|
|
Konštrukcia a charakterizácia mutantných foriem cytokinínového receptora CRE1 AHK4 z Arabidopsis thaliana
Pacurová, Marika
Rostlinný receptor CRE1 / AHK4 vytváří po navázání cytokininů signál, který je následně přenášený do jádra buňky, kde reguluje transkripci cílových genů. Pro studium aktivity receptoru a jeho mutantních forem se využívá skutečnosti, že receptor zachovává svou aktivitu i po expresi v kmeni KMI001 bakterie Escherichia coli, kdy je detekovaná aktivita β-galaktozidázy jako odpověď na cytokininy. Práce ,,Konstrukce a charakterizace mutantních forem cytokininového receptoru CRE1/AHK4 z Arabidopsis thaliana“ rozebírá problematiku mutageneze vykonané pomocí komerčně dostupného kitu a postupu popsaného v odborné literatuře. Současně charakterizuje receptor AHK4, popisuje jeho signální dráhu po expresi v bakteriálním kmeni KMI001 a shrnuje také jeho popsané mutantní formy. Experimentální část se zaměřuje na PCR mutagenezi vykonanou dvěma popsanými způsoby včetně návrhu primerů zanášejících mutaci a transformaci mutovaného konstruktu do Escherichia coli KMI001. Dále se zaměřuje na samotný test β-galaktosidázové aktivity mutantních variant CRE1 / AHK4 v přítomnosti koncentrační řady hormonu trans-zeatinu. Výsledky ukazují, že mutace L437F, L437G, L437I, L437W a L437Y způsobují při nízkých koncentracích trans-zeatinu zvýšenou míru aktivity vůči původní nemutované formě CRE1 / AHK4 receptoru, avšak přítomnost mutace L437H způsobila ztrátu této aktivity.
|
host ::
RSS.