|
|
Import proteinů do mitochondrií.
Drašnarová, Zuzana ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Pyrih, Jan (oponent)
Většina mitochondriálních proteinů je syntetizována v cytoplasmě a poté musí být dopravena do vnější a vnitřní membrány nebo do mezimembránového prostoru a matrix. K transportu všech proteinů přes vnější membránu slouží TOM komplex. Odtud se osud jednotlivých populací proteinů liší: (i) sbalení β-barelových proteinů ve vnější membráně zprostředkovávají proteiny SAM komplexu, (ii) proteiny mezimembránového prostoru jsou po průchodu TOM komplexem zachyceny pomocí tzv. MIA dráhy, (iii) mitochondriální přenašeče vnitřní membrány vyžadují TIM22 a nakonec (iv) matrixové proteiny s částí proteinů vnitřní membrány jsou přeneseny komplexem TIM23. Zatímco transport přes vnější membránu nevyžaduje zdroj energie, přechod proteinů přes vnitřní mitochondriální membránu je závislý na ATP spotřebovaném mtHsp70 v rámci PAM komplexu a/nebo na membránovém potenciálu. Transportované proteiny mají targetovací sekvence, které jsou nutné pro rozpoznání transportovaného proteinu receptorovým proteinem na vnější membráně. Klíčová slova: import, protein, mitochondrie, translokáza, membrána, matrix, mezimembránový prostor
|
|
| |
|
|
Zavedení APEXového značení pro výzkum mitochondriálních organel Giardia intestinalis a Trichomonas vaginalis.
Drašnarová, Zuzana ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Rothová, Olga (oponent)
Giardia intestinalis a Trichomonas vaginalis jsou parazitičtí prvoci žijící v anaerobním prostředí. Z tohoto důvodu došlo k přeměně mitochondrií na organely, ve kterých neprobíhá oxidativní fosforylace. O mezimembránovém prostoru (IMS) mitochondriálních organel těchto organismů však není mnoho známo. Hlavním důvodem je obtížná izolace proteinů IMS pomocí klasických metod molekulární biologie, jako je buněčná frakcionace. Nedávno došlo k vytvoření nového značení pomocí askorbát peroxidázy (APEX). Toto značení je možní použít pro fluorescenční i elektronovou mikroskopii. APEX se také může chovat v přítomnosti biotin-fenolu jako biotin ligáza, umožňuje tak značení proteinů daného kompartmentu a také jejich izolaci. Optimalizovali jsme podmínky pro optimální aktivitu APEXu a pomocí této techniky se nám podařilo vizualizovat IMS hydrogenosomů T. vaginalis a izolovat hydrogenosomální proteiny.
|
|
|
Import proteinů do mitochondrií.
Drašnarová, Zuzana ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Pyrih, Jan (oponent)
Většina mitochondriálních proteinů je syntetizována v cytoplasmě a poté musí být dopravena do vnější a vnitřní membrány nebo do mezimembránového prostoru a matrix. K transportu všech proteinů přes vnější membránu slouží TOM komplex. Odtud se osud jednotlivých populací proteinů liší: (i) sbalení β-barelových proteinů ve vnější membráně zprostředkovávají proteiny SAM komplexu, (ii) proteiny mezimembránového prostoru jsou po průchodu TOM komplexem zachyceny pomocí tzv. MIA dráhy, (iii) mitochondriální přenašeče vnitřní membrány vyžadují TIM22 a nakonec (iv) matrixové proteiny s částí proteinů vnitřní membrány jsou přeneseny komplexem TIM23. Zatímco transport přes vnější membránu nevyžaduje zdroj energie, přechod proteinů přes vnitřní mitochondriální membránu je závislý na ATP spotřebovaném mtHsp70 v rámci PAM komplexu a/nebo na membránovém potenciálu. Transportované proteiny mají targetovací sekvence, které jsou nutné pro rozpoznání transportovaného proteinu receptorovým proteinem na vnější membráně. Klíčová slova: import, protein, mitochondrie, translokáza, membrána, matrix, mezimembránový prostor
|
host ::
RSS.