|
|
Vztah mezi StkP/PhpP fosforylační dráhou a diadenylát cyklázou CdaA produkující c-di-AMP u Streptococcus pneumoniae
Beneš, Tomáš ; Buriánková, Karolina (vedoucí práce) ; Fišer, Radovan (oponent)
Vztah mezi StkP/PhpP fosforylační dráhou a diadenylátcyklázou CdaA produkující c-di-AMP u Streptococcus pneumoniae Druzí poslové se staly novou oblastí výzkumu bakterií. Jedním z nejnověji objevených druhých poslů je c-di-AMP. Tato sloučenina je zodpovědná za adaptaci na řadu environmentálních stresů, hlavně na ty spojené s poškozením buněčné stěny. C-di-AMP je produkován enzymy, které jsou označované jako diadenylátcyklázy. Nejvíce rozšířenou diadenylátcyklázou je CdaA. Již dříve bylo popsáno, že aktivita CdaA je regulována fosfoglukosaminmutázou GlmM, která se podílí na syntéze buněčné stěny. GlmM je zároveň fosforylována serin/threoninovou kinázou StkP u Streptococcus pneumoniae. Cílem této práce je stanovení vztahu mezi těmito třemi proteiny u S. pneumoniae s důrazem na aktivitu CdaA. Pomocí dvouhybridového systému a koimunoprecipitace jsme prokázali, že CdaA interaguje přímo s StkP. Rovněž jsme identifikovali slabou fosforylaci CdaA kinázou StkP in vitro.V koralynové reakci jsme potvrdili snížení aktivity CdaA v přítomnosti GlmM. Na druhou stranu jsme nedetekovali žádnou významnou změnu aktivity CdaA v přítomnosti StkP. V závěru předkládáme model, který navrhuje roli StkP v regulaci CdaA.
|
|
|
Vliv systému Quorum sensing Staphylococcus aureus na toleranci k antibiotikům
Šaňková, Michaela ; Lichá, Irena (vedoucí práce) ; Buriánková, Karolina (oponent)
Staphylococcus aureus je grampozitivní oportunně patogenní bakterie, která především u oslabených jedinců způsobuje řadu chronických infekcí. Největší problém v klinické praxi představují v poslední době hlavně infekce způsobené takzvanými perzistery. Jedná se totiž o subpopulaci buněk, které díky adaptacím na stresové podmínky dokáží odolat i běžně letálním dávkám antibiotik a následně opět vyvolat infekci. Hlavní roli v přepínání mezi aktivní virulentní formou a perzistentním stavem spojeným s tvorbou biofilmu hraje Agr systém, který je zodpovědný za mechanismus quorum-sensing. A právě v tomto systému dochází při chronických infekcích ke hromadění adaptačních mutací, jež ovlivňují schopnost perzistovat. Pro vypracování diplomové práce byly použity klinické izoláty odebírané od pacientů s cystickou fibrózou chronologicky během prvních tří let života. Hlavním cílem práce bylo potvrdit vliv adaptačních mutací na perzistenční schopnosti klinických izolátů a dále také sledovat, jak se v závislosti na působení vybraných antibiotik mění membránový potenciál a metabolická aktivita buněk. Dalším cílem pak bylo vytvořit deleci v genu pro regulátor odpovědi AgrA za použití systému CRISPR/Cas9. Pro charakterizaci perzistenčních schopností byly použity tzv. TD testy (Tolerance Disk Tests) a metoda stanovení...
|
|
|
Vliv adaptačních mutací na vznik perzisterů u Staphylococcus aureus
Hloucalová, Nikola ; Lichá, Irena (vedoucí práce) ; Buriánková, Karolina (oponent)
Perzistence představuje přechodný stav, ve kterém jsou bakteriální buňky schopny přežívat antibiotickou léčbu. Nastává stochasticky u malé části populace a umožňuje přeživším buňkám opakovaně vyvolat infekci. Velikost subpopulace perzisterů může být ovlivněna adaptačními mutacemi vzniklými v době chronické infekce v genech souvisejících s regulací přechodu mezi virulentní formou a tvorbou biofilmu. Pro regulaci vstupu a výstupu z perzistence má významnou roli též mezibuněčná komunikace a molekuly produkované buňkami do prostředí. Předpokládá se, že perzistence u S aureus je ovlivňována především PSM moduliny a molekulami AIP, jež se účastní mechanizmu Quorum sensing. Hlavním cílem práce bylo objasnit, jak adaptační mutace vzniklé u klinických izolátů získaných od dvou pacientek s diagnostikovanou cystickou fibrózou ovlivňují schopnost perzistovat. Dále bylo cílem stanovit, jak se v souvislosti s perzistencí mění membránový potenciál a metabolická aktivita a určit, jaký vliv mají extracelulární molekuly produkované do kultivačního média na růstové parametry studovaných izolátů. Metodou TD testu a určením míry perzistence stanovením CFU bylo zjištěno, že u izolátů pacientky 2 nedošlo v průběhu chronické infekce ke vzniku adaptačních mutací ovlivňujících perzistenci, zatímco u třech později odebraných...
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.