|
|
Large Extracellular Vesicles in Cell Culture and Blood: Role in Prion Transmission and Detection by Flow Cytometry
Soukup, Jakub ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Šebestová Janoušková, Olga (oponent) ; Živný, Jan (oponent)
Priony (PrP) jsou hlavní příčinou neurodegenerativních onemocnění jako je ovčí klusavka, bovinní spongiformní encefalopatie, chronické strádání jelenovité zvěře a lidská Creutzdfeld- Jacobova choroba. Přestože se buněčný PrP (PrPC ) účastní mnoha buněčných procesů, jeho přesná funkce není dosud známá. Onemocnění vzniká akumulací patologické formy PrP (PrPTSE ), která vzniká přímým kontaktem PrPTSE a PrPC . PrP je ukotvený v membráně pomocní GPI a může být přenášen mezi buňkami kontaktem, tzv. "tunnelling nanotubes" nebo extracelulárními vezikuly (EV). Frakce EV se dělí na exosomy, mikrovezikuly a apoptotická tělíska rozdílnou biogenezí. PrPTSE se nachází v exosomech a mikrovezikulech, ale tyto frakce EV nikdy nebyly mezi sebou porovnány. Prvním cílem dizertační práce je porovnat obsah PrP, prion konvertující aktivitu a infektivitu v těchto frakcích EV na CAD5 a N2a-PK1 buněčných modelech infekce. Centrifugací jsme izolovali frakci velkých EV (20 000× g) a malých EV (110 000× g) z kondiciovaného média. EV jsme charakterizovali pomocí kryo-elektronové mikroskopie a western blotem s markery Alix, TSG-101, CD63, CD9 a HSP70. Kontaminace z jiných buněčných kompartmentů byla ověřena kalnexinem. Frakce EV se mezi sebou lišili obsahem β-1 integrinu. Malé EV mají sníženou a velké EV mají zvýšenou hladinu...
|
|
|
Nanostructured Modifcation of Material Surfaces for Controlled Cell Cultivation
Kotelnikov, Ilya ; Proks, Vladimír (vedoucí práce) ; Chytil, Petr (oponent) ; Šebestová Janoušková, Olga (oponent)
Komerčně dostupné materiály a média pro kultivaci buněk neumožnují kultivaci a růst buněk s využitím specifických interakcí buňka-povrch. Cílem této práce je vývoj povrchů pro kultivaci buněk, které napodobují podmínky v živých tkáních a vytvoření povrchů pro kultivaci specifického typu buněk. Přístup zavedený v této práci je založen na aplikaci biomimetických peptidových ligandů na inertní nosné materiály s non-fouling vlastnostmi. Vzhledem k tomu, že volba sekvence ligandu a vzdálenost mezi peptidy má vážný vliv, bylo syntetizováno a zkoumáno několik modelových peptidů s různými parametry. Adhezivní peptidy byly syntetizovány syntézou peptidů na pevné fázi. Také byly syntetizovány a testovány peptidy s kontrolními peptidovými sekvencemi bez biologické aktivity. Nedílnou částí práce je dále prostorová distribuce peptidů na povrchu. 'Click'-reakce byla použita pro úspěšnou imobilizaci peptidů na modifikovaných površích. Vzdálenost mezi molekulami peptidů na povrchu byly řízeny jejich koncentrací v reakční směsi. Referenční vzorky byly imobilizovány radioaktivně značenými peptidy pro kvantitativní odhad přítomných peptidů. Dále byly materiály s různými typy peptidů a rozsahem koncentrací využity pro kultivace buněčných kultur, kdy experimenty byly zaměřeny na zkoumání interakcí buněk s připravenými...
|
host ::
RSS.