|
|
Production of biologically active proteins in plants
Šmídková, Markéta ; Angelis, Karel (advisor) ; Bříza, Jindřich (referee) ; Griga, Miroslav (referee)
6. SOUHRN 1) Byly zavedeny tři rostlinné expresní systém umožňující produkci biologicky aktivních proteinů. První využívá dočasné exprese z vektoru dopraveného do buňky Agrobacteriem po infiltraci listů tabáku bakteriální suspenzí. Pomocí tohoto systému jsme schopni vyprodukovat množství rekombinantního proteinu dosahujícího 5% CRP během 3 dnů. Druhý expresní systém využívá suspenzní kultury stabilně transformovaného mechu Physcomitrella patens. Za kontrolovaných podmínek pěstování v bioreaktoru je výtěžek rekombinantního proteinu srovnatelný s výtěžkem z agroinfiltrace. Expresní systém využívající kombinace virové expresní kazety, založené na TRV, a jejího přenosu do rostlinné buňky pomocí Agrobacteria je pro produkční účely vzhledem k nízkým výtěžkům méně vhodný, nežli předchozí dva systémy. 2) Ve všech třech systémech lze produkovat heterologní proteiny, které se svými vlastnostmi neliší od proteinů produkovaných v původním organismu. Pro dosažení požadované aktivity heterologního proteinu produkovaného rostlinou, stejně jako pro dosažení vysokého výtěžku, je nutné provést řadu optimalizací. Významné je zjištění, že v případě virových antigenů (HPV16L1 protein) i jednořetězcových fragmentů protilátek (scFv MEM97) je pro rostlinu výhodnější exprimovat sekvence genů rekombinantních proteinů s vyšším...
|
|
|
Production of biologically active proteins in plants
Šmídková, Markéta ; Angelis, Karel (advisor) ; Bříza, Jindřich (referee) ; Griga, Miroslav (referee)
6. SOUHRN 1) Byly zavedeny tři rostlinné expresní systém umožňující produkci biologicky aktivních proteinů. První využívá dočasné exprese z vektoru dopraveného do buňky Agrobacteriem po infiltraci listů tabáku bakteriální suspenzí. Pomocí tohoto systému jsme schopni vyprodukovat množství rekombinantního proteinu dosahujícího 5% CRP během 3 dnů. Druhý expresní systém využívá suspenzní kultury stabilně transformovaného mechu Physcomitrella patens. Za kontrolovaných podmínek pěstování v bioreaktoru je výtěžek rekombinantního proteinu srovnatelný s výtěžkem z agroinfiltrace. Expresní systém využívající kombinace virové expresní kazety, založené na TRV, a jejího přenosu do rostlinné buňky pomocí Agrobacteria je pro produkční účely vzhledem k nízkým výtěžkům méně vhodný, nežli předchozí dva systémy. 2) Ve všech třech systémech lze produkovat heterologní proteiny, které se svými vlastnostmi neliší od proteinů produkovaných v původním organismu. Pro dosažení požadované aktivity heterologního proteinu produkovaného rostlinou, stejně jako pro dosažení vysokého výtěžku, je nutné provést řadu optimalizací. Významné je zjištění, že v případě virových antigenů (HPV16L1 protein) i jednořetězcových fragmentů protilátek (scFv MEM97) je pro rostlinu výhodnější exprimovat sekvence genů rekombinantních proteinů s vyšším...
|
|
|
Advances in the production of antibodies in plants
Angelis, Karel ; Šmídková, Markéta
Plants are the oldest biotechnological production system and as eukaryots have advantage over bacteria to modify expressed proteins. Laboratory model plants like tobacco along with crop plants with established logistics for harvest and storage like potatoes or rice are used for production of desired proteins. Current trend is to replace soil grown plants with liquid cultures of plant cells grown under controlled conditions. In this respect the moss Physcomitrella patens besides ability to grow in liquid culture enables due to efficient homologous recombination to modify posttranslational glycosylation to correspond human. For heterologous expression in plants, recombinant, single-chain molecules composed of only variable VL and VH regions of the original antibody forming binding pocket are constructed and expressed. Recombinant scFv antibodies are then used as a part of therapeutic or diagnostic drugs in oncology.
|
guest ::
RSS feed.