|
|
Optimalizace SIA stanovení dakarbazinu
Horáková, Markéta ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Dakarbazin byl stanovován sekvenční injekční analýzou s chemiluminiscenční detekcí, při reakci vzorku s manganistanem draselným v prostředí kyseliny sírové. Optimalizovány byly objemy činidel, jejich koncentrace, průtoková rychlost, struktura měřícího cyklu. Také byl zkoušen vliv rozpouštědel (voda, 60% etanol, 60% metanol) a zesilovačů chemiluminiscenční reakce (polyfosfát sodný, kyselina mravenčí, glutaraldehyd a formaldehyd). Výslednými optimálními podmínkami byla sekvence: 40 μl 1 M H2SO4, 3 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 10 mM roztoku dakarbazinu, 40 μl 1 M H2SO4, případná aspirace 50 μl zesilovače. Aspirace roztoků probíhala za průtokové rychlosti 100 μl/s, promísení a průtoková rychlost transportu do detektoru byla 40 μl/s, po každém měření byl přidán výplach kyselinou šťavelovou, aby se předešlo usazování KMnO4 v hadičkách. Napětí na fotonásobiči detektoru bylo 420 V. Kalibrační závislosti velikosti CL intenzity na koncentraci dakarbazinu byly nelineární, s možností výběru určité lineární oblasti. Pro roztok dakarbazinu bez zesilovače nebyla lineární oblast nalezena s dostatečně vysokým korelačním koeficientem, pro roztok dakarbazinu s 60% metanolem 0,5 - 10 mmol/l, pro roztok dakarbazinu s 1,39 M kyselinou mravenčí 4 - 10 mmol/l. Detekční limit byl pro roztok dakarbazinu bez zesilovače vypočítán...
|
|
|
Studie chemiluminiscenčních vlastností metforminu pomocí sekvenční injekční analýzy
Horáková, Markéta ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Markéta Horáková Konzultant: PharmDr. Hana Sklenářová Ph.D. Název rigorózní práce: Studie chemiluminiscenčních vlastností metforminu pomocí sekvenční injekční analýzy Chemiluminiscenční vlastnosti metforminu byly studovány pomocí sekvenční injekční analýzy ve třech systémech s různým složením činidel. První systém používal manganistan draselný a kyselinu sírovou, druhý síran ceričitý a (tris(2,2'- bipyridyl)dichloro-ruthenium hexahydrát. Třetí systém využíval N-bromsukcinimid a fluorescein. U prvních dvou systémů byla optimalizována průtoková rychlost, koncentrace a objemy činidel, schéma měřícího cyklu a použitá rozpouštědla. U třetího systému koncentrace N-bromsukcinimidu (NBS) a fluoresceinu vycházela z údajů vyhledaných v odborné literatuře [Zhouping Wang, Anal. Lett. 2003]. Objem a rychlost byly nalezeny automaticky s využitím programu FaFSIAOptim, vytvořeným na Katedře analytické chemie. Schéma měřícího cyklu bylo optimalizováno stejným způsobem jako u předešlých dvou systémů. Během optimalizace a následného měření bylo zjištěno, že jediným vhodným systémem je třetí systém s NBS a fluoresceinem. Proto bylo dále pokračováno jen s ním. Postup odpovídal výslednému schématu shrnujícímu...
|
|
|
Stanovení biologicky aktivních látek metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminiscenční detekcí
Štěpánková, Lucie ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
1.1 Souhrn Byla navržena a optimalizována jednoduchá a rychlá metoda pro stanovení norepinefrinu metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminescenční detekcí. Optimalizovanými parametry byly objemy a koncentrace vzorku norepinefrin bitartrátu a reagencií, průtoková rychlost, složení nosného proudu a napětí na fotonásobiči. Optimální objem vzorku byl 80 μl a optimální koncentrace činidel (a aspirované objemy) byly - 25 mM polyfosfát sodný (44 μl), 0,1 M kyselina sírová (24 μl) a 1 mM manganistan draselný (21 μl). Optimální průtoková rychlost (pro průchod detektorem) byla 91 μl/s a napětí na fotonásobiči bylo 450 V. Jako nosný proud byla použita ultračistá voda. Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu koncentrací 1 - 40 μmol/l norepinefrin bitartrátu. Parametry kalibrační křivky y = kx + q (kde y je intenzita chemiluminiscence v nA a x je koncentrace norepinefrin bitartrátu v μmol/l) byly vypočítány metodou lineární regrese. Směrnice k byla 33.923 a absolutní člen q byl 34.839. Korelační koeficient byl 0,9997. Relativní směrodatné odchylky byly 2.78 a 1.18 % (n = 10) pro stanovení norepinefrin bitartrátu ve standardních roztocích o koncentracích 4.75 a 18.98 μmol/l. Limit detekce (LOD) byl 0.28 μmol/l a limit kvantifikace (LOQ) byl 3.34 μmol/l. Navrhovaná SIA metoda byla použita pro stanovení obsahu...
|
|
|
Elektro membránová extrakce za nehybných podmínek - Ultrarychlá izolace kyselých léčiv z neupravené lidské plazmy
Prosová, Klára ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Tato práce se zabývá studiem elektro-membránové extakce (EME) léčiv kyselé povahy z biologických vzorků za naprosto stabilních podmínek; čili bez využití třepání. Jak je z názvu patrné, EME přes kapalnou membránu na nosiči (SLM) je důsledkem existence elektrického potenciálového rozdílu mezi kompartmenty oddělenými membránou *1+*2+. Byla provedena extrakce tří kyselých léčiv z neupravené lidské plazmy, a to pomocí organického rozpouštědla (dekanol) imobilizovaného v pórech polymerního dutého vlákna (o tloušťce stěny 200 µm) jako SLM, do přijímacího roztoku, kterým byl roztok 10 mM NaOH. Hnací silou pro extrakci bylo 10-30 V. Byl studován vliv doby extrakce, napětí a hodnot pH dárcovského a přijímacího roztoku a byly navrženy optimální podmínky pro dosažení efektivity. Ketorpofen, ibuprofen a naproxen ze skupiny nesteroidních antiflogistik byly extrahovány ze vzorků plazmy s výtěžky dosahujícími hodnot 2 až 20 % za 5-10 minut. Systém byl během extrakce udržován v nehybném stavu a hnací silou pro přechod cílových analytů přes SLM bylo pouze napětí 20 V. Metoda představuje velice efektivní způsob předúpravy a zakoncentrování před separací za použití kapilární elektroforézy (CE) nebo vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Metoda vykazuje lineární odezvu signálu v rozmezí koncentrací 0.5 až 30...
|
|
|
Stanovení vitamínů A, D a E metodou sekvenční injekční chromatografie
Trefilová, Kateřina ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Byl vypracován postup separace vitamínů A, D a E pomocí monolitických kolon zapojených v systému sekvenční injekční analýzy. Po provedené optimalizaci byly vybrány následující podmínky separace: analýza na: monolitické koloně 25 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), při rychlosti (10 µl/s) za použití mobilní fáze acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolitická kolona byla v SIA systému zapojena mezi vícecestný ventil a průtokovou Z celu. Spektrofotometrická detekce byla provedena při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A - 324 nm, D - 265 nm, E - 285. Celková délka SIA analýzy byla 400 s (z toho 230 s trvala vlastní separace). Ze základních chromatografických validačních parametrů byly vyhodnoceny faktor symetrie AS, rozlišení RS, počet teoretických pater a opakovatelnost. Faktor symetrie pro vitamín A - 1,309, pro vitamín D2 - 1,302, pro D3 - 1,286 , pro vitamín E - 1,158. Rozlišení píků pro vitamíny A-D2 je 3,607, D2-D3 4,232, D-E 1,532. Počet teoretických pater pro vitamín A 998, pro vitamín D2 1621, pro vitamín D3 2091 a vitamín E 2376. Opakovatelnost byla vypočítána z 6 nástřiků, kdy z výšky píků jednotlivých látek byla vypočítaná relativní směrodatná odchylka. Opakovatelnost je pro vitamín A - 0,53 %, pro vitamín D2 - 0,35 %, pro vitamín D3 - 0,81 % a...
|
|
|
Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve
Krchňáková, Eva ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Eva Krchňáková Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve. Diplomová práce se zabývá možností automatizovat extrakci na tuhou fázi (SPE) ve spojení s mikročásticovou analýzou (BI). Cílem práce bylo vyzkoušet nahrazení mikročástic v mikročásticové analýze sorbentem z SPE, zjistit chování sorbentu v tomto systému a následně ověřit, zda je možné extrakci na tuhou fázi miniaturizovat se všemi kroky, které jsou k provedení metody nutné. V práci byla manuálně provedena extrakce na tuhou fázi, ve které bylo testováno 7 sorbentů: Lichrolut MERCK RP-18, DSC-18, DSC-18Lt, DSC-8, DSC-PH, DSC-CN a HLB Oasis. Z pokusu vyplynuly nejlepší možné podmínky pro provedení extrakce na tuhou fázi a to: aktivace sorbentu a eluce analytu 100% acetonitrilem, solvatace sorbentu, rozpuštění vitaminu D a vymytí balastu ze sorbentu zředěnou kyselinou octovou o pH 3. Pro systém je nejvhodnější sorbent HLB Oasis od firmy Waters, který je smáčivý s vodou a neměl by se rozptylovat po systému, což bylo po použití sorbentu potvrzeno. Ostatní sorbenty byly pro systém nevhodné z důvodu nesmáčivosti s vodou a velké jemnosti sorbentu. Sorbenty...
|
|
|
On-line extrakce na tuhé fázi pomocí sekvenční injekční analýzy
Hadysová, Zuzana ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Katedra: Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Zuzana Hadysová Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: On-line extrakce na tuhé fázi pomocí sekvenční injekční analýzy Tato diplomová práce je zaměřena na porovnání tří sorbentů (Iontosorb OXIN 50, Iontosorb OXIN 100 a TOYOpearl AF-chelate-650M) s cílem najít ten nejvhodnější pro analýzu Zn2+ při použití on-line extrakce na tuhou fázi s využitím sekvenční injekční analýzy. Při práci byly používány roztoky síranu zinečnatého o koncentracích 25 nmol/l, 50 nmol/l, 100 nmol/l, 200 nmol/l, 500 nmol/l, 1000 nmol/l, 1500 nmol/l a 2000 nmol/l. Při analýze byl dále využíván pufr o pH 6, eluční činidlo HCl o pH 1 a činidlo 4-(2- Pyridylazo)resorcinol (PAR). Snahou bylo extrahovat Zn2+ v co nejnižších koncentracích. Testovány byly kalibrační rozsahy a opakovatelnost metody. Nejlepším sorbentem z porovnávaných byl Iontosorb OXIN 100.
|
|
|
Hodnocení obsahu fenolických látek v ovoci
Baďurová, Kristýna ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Kristýna Bortlová Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení obsahu fenolických látek v ovoci Tato diplomová práce je zaměřena na analýzu vybraných fenolických látek (kyselinu gallovou, kyselinu chlorogenovou, epikatechin, rutin, kvercitrin, floridzin a floretin). Obsah těchto fenolických látek je hodnocen v deseti vybraných odrůdách jablek pomocí optimalizované HPLC metody. V práci je zahrnut obecný popis vybraných fenolických látek. Dále práce obsahuje krátkou rešerši odborných publikací na téma obsah fenolických látek v ovoci a stručný popis HPLC metody pro stanovení fenolických látek. HPLC analýza probíhala na předkoloně Ascentis Express C18 (5 x 4,6 mm x 5 μm), na koloně Kinetex C18 (150 x 4,6 mm x 5 μm) s povrchově porézními částicemi a pevným jádrem a na koloně Luna Omega Polar C18 (150 x 4,6 mm x 5 μm) s plně porézními částicemi. Detekce byla provedena pomocí UV detektoru při vlnových délkách 255, 280, 320 a 365 nm. Nastřikovaný objem byl 10 μl a průtoková rychlost 1 ml/min při teplotě kolonového prostoru 30 řC. Byla využita gradientová eluce mobilní fáze začínající na 95 % vodné složky okyselené na pH 2,8 kyselinou octovou a 5 % acetonitrilu, celková doba...
|
|
|
Stanovení železitých iontů v SIA systému s chemiluminiscenční detekcí
Blahynková, Michaela ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Blahynková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení hladin železitých iontů v SIA systému s chemiluminiscenční detekcí Bylo sledováno katalytické působení železitých iontů na oxidaci luminolu peroxidem vodíku v bazickém prostředí pomocí chemiluminiscenční detekce. Optimalizována byla sekvence aspirace vzorku a činidel, jejich objemy, rychlosti mísení a průtoku detektorem. Také byl zkoušen vliv promísení, různých železitých sloučenin a přítomnost železnatých iontů na intenzitu chemiluminiscence. Výsledky optimalizace byly sekvence aspirace 50 µl H2O2 10-3 mol·l-1 , 50 µl K3[Fe(CN)6] 10-3 mol·l-1 ,50 µl luminol 10-3 mol·l-1 . Aspirace roztoků probíhala při 100 µl·s-1 , rychlost průtoku detektorem byla 70 µl·s-1 . Kalibrační závislost intenzity chemiluminiscence na koncentraci železitých iontů při nízkých koncentracích (10-7 - 10-9 mol·l-1 ) byla nelineární. Lineární oblast kalibrace Fe3+ iontů za standardních podmínek nebyla nalezena s dostatečně vysokým korelačním koeficientem, proto byla použita polynomická kalibrační závislost druhého řádu s korelačním koeficientem Rš = 0,9785. Byl vypočítán detekční limit, který se rovná 7,48∙10-10 mol∙l-1 Fe3+...
|
|
|
Automatizace liberačních testů pro uvolňování biologicky aktivních látek z nanovláken
Schneidrová, Marie ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Marie Schneidrová Školitel: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Automatizace liberačních testů pro uvolňování biologicky aktivních látek z nanovláken Tato diplomová práce se zabývá automatizací liberace antibiotika tetracyklinu (TTC) z nanovlákenného nosiče, za využití neseparační průtokové metody sekvenční injekční analýzy. Pro detekci signálu byl používán UV-VIS spektrofotometr. Měření byla realizována za využití 1-3 paralelně zapojených Franzových cel umístěných ve vodní lázni. Jako liberační média byly použity tlumivé roztoky o pH 7,4 a 4,5. Liberace TTC probíhala ze dvou různých nanovlákenných nosičů - typ "A" a "AK", lišících se v postupu při své výrobě. Každý z nich tedy vykazoval odlišné vlastnosti, týkající se především množství navázaného TTC a způsobu jeho vazby na nosič. Výroba těchto nanovláken byla realizována Technickou univerzitou v Liberci za využití technologie NanoSpiderTM . Měření probíhala za různých, předem stanovených podmínek, reprezentujících stav lidské kůže - dvě rozdílné hodnoty pH (7,4; 4,5) a teploty (32řC; 37řC). Byly využívány také čtyři různé typy membránových filtrů, které liberační profily v průběhu měření různě ovlivňovaly. Jednalo se o filtry...
|
host ::
RSS.