|
|
Problematika inhibice cholinesteras vybranými organofosforovými pesticidy in vitro
Lázenská, Helena ; Opletalová, Veronika (vedoucí práce) ; Kuča, Kamil (oponent)
PROBLEMATIKA INHIBICE CHOLINESTERAS VYBRANÝMI ORGANOFOSFOROVÝMI PESTICIDY IN VITRO Helena Lázenská Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Univerzita Karlova v Praze, Heyrovského 1203, 500 05 Hradec Králové, Česká republika. Cílem této práce bylo popsat a zhodnotit organofosforové inhibitory (OFI) paraoxon, DDVP a DFP z hlediska kinetiky jejich reakce s lidskou erytrocytární acetylcholinesterasou (AChE) a plazmatickou butyrylcholinesterasou (BuChE), určit odpovídající hodnoty IC50, a u pěti vybraných reaktivátorů cholinesteras (pralidoxim, methoxim, trimedoxim, obidoxim a HI-6), používaných jako antidota při otravách nervově paralytickými látkami, organofosforovými a karbamátovými pesticidy, zjistit a vzájemně porovnat jejich in vitro reaktivační účinnost u AChE a BuChE inhibovaných vybranými OFI. Experimenty byly prováděny při teplotě 25 řC a v prostředí 0,1 M fosfátového pufru při pH 7,4. Enzymy byly inkubovány s inhibitory o vhodné koncentraci a po takovou dobu, aby bylo docíleno 10% zbytkové aktivity. Následná reaktivace probíhala po dobu 10 minut, koncentrace reaktivátorů v roztoku byla 1 M a 10 M. Stanovení aktivity enzymů bylo provedeno za použití spektrofotometrické Ellmanovy metody, za použití acetyl- a butyrylthiocholin-jodidu jako substrátů. Ze...
|
|
| |
|
| |
|
|
Biologická aktivita obsahových látek rostlin III. Vliv alkaloidů z Chelidonium majus L. na acetylcholinesterázu
Kubincová, Dagmar ; Opletal, Lubomír (vedoucí práce) ; Kuča, Kamil (oponent)
SOUHRN Spolu s ostatními diplomantkami (Šárkou Brožovou, Janou Nagyovou a Evou Vítkovou) jsem provedla extrakci 41,8 kg suché nati s kořeny. Primární extrakt jsme vyčistily filtrací a následným oddestilováním rozpouštědla na vakuové odparce. Dále jsme připravily sekvenčním postupem výtřepky s jednotlivými typy alkaloidů: šlo o dva diethyletherové výtřepky (získané po předchozí alkalizaci primárního extraktu uhličitanem sodným a hydroxidem draselným), které byly následně okyseleny kyselinou chlorovodíkovou, vzniklé kvartérní jodidy po přidání jodidu draselného vytřepány chloroformem a po následné alkalizaci extraktu amoniakem získány další kvartérní jodidy vytřepáním do směsi chloroform + ethanol 8,5:1,5. Já jsem se zabývala výtřepkem B, který obsahoval silně basické alkaloidy. Provedla jsem separaci výtřepku B pomocí sloupcové chromatografie. Zpracovávala jsem frakci 27- 46, jejíž odparek jsem po vysušení rozdělila na dvě části. První část (0,02 g) byla podrobena barevným reakcím s činidly, které prokázaly, že izolovaný alkaloid CH-M/B-1 je berberin.Dále jsem změřila teplotu tání Z druhé části odparku jsem získala 0,346 g žlutého prášku, který byl v závěru práce podroben testu vlivu látky na aktivitu AChE. Z naměřené hodnoty IC50= 0,221 (0,146- 0,228) μM je patrné, že látka CH-M/B-1 je vysoce aktivní v...
|
host ::
RSS.