|
|
Production of human milk oligosaccharides in the cell factory of E. coli
Havrdová, Jana ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Smrček, Stanislav (oponent)
Oligosacharidy lidského mléka patří mezi nejhojnější složky mateřského mléka a jsou nezbytné pro zdravý vývoj novorozence. Izolovat tyto oligosacharidy z živočišného mléka, zejména ty méně hojné, je velmi náročné, a proto je třeba hledat nové způsoby získání těchto látek. Chemické a enzymové syntézy těchto sloučenin jsou pracné a nákladné a poskytují nízké výtěžky. Inovativním přístupem k syntéze HMO jsou bakteriální buněčné továrny, v nichž geneticky upravené bakteriální kmeny mohou využívat levné sacharidy jako substráty a přeměňovat je na specifické oligosacharidy. Cílem této práce je prozkoumat možnosti využití vybraných bakteriálních kmenů (E. coli) pro produkci oligosacharidů lidského mléka. U laktosy jako sacharidového substrátu musí být bakteriální hostitel deficientní na β-galaktosidasu, jinak by byl substrát degradován. Pro zýšení příjmu laktózy v buňce lze do hostitelského organ- ismu vnést gen crp, který kóduje pozitivní transkripční regulátor (Catabolite Acti- vator Protein - CAP). Klonovaný plazmid - pRSFDuet-1-crp byl transformován do vybraného bakteriálního kmene. Laktóza z buněk byla purifikována gelovou chro- matografií a vliv zvýšené exprese CAP na příjem laktózy do buněk byl analyzován pomocí různých analytických metod, jako je TLC, HPLC a komerční laktózový test. Klíčová slova:...
|
host ::
RSS.