|
|
Diagnostika významných virů jabloní
Winkowska, Lucie ; Ryšánek, Pavel (vedoucí práce) ; Petr, Petr (oponent)
Virus mozaiky jabloně (Apple mosaic virus, ApMV), virus žlábkovitosti kmene jabloně (Apple stem grooving virus, ASGV), virus vrásčitosti kmene (Apple stem pitting virus, ASPV) a virus chlorotické skvrnitosti listů jabloně (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) jsou ekonomicky významné viry jádrovin, které jsou celosvětově rozšířeny a mohou způsobit značné snížení výnosu. Hlavní kontrolní strategie (konkrétně detekce patogena, certifikace, karanténa atd.) jsou závislé na přesných a citlivých detekčních metodách a na perfektní znalosti patogena.
V rámci disertační práce byla optimalizována detekční metoda kvantitativního RT-PCR (qRT-PCR) pro detekci a kvantifikaci čtyř studovaných virů. Získané výsledky naznačily, že qRT-PCR je nejspolehlivější technika ve srovnání s konvenčními metodami DAS/I-ELISA a RT-PCR.
V naší studii při kvantifikaci virů pomocí qRT-PCR se ukázalo, že koncentrace ASGV, ASPV a ACLSV je stabilní v průběhu vegetace a v různých rostlinných tkáních. Výjimku představuje ApMV, u kterého se během vegetace měnil obsah v listech a lýku. Tyto výsledky naznačují, že změny v koncentraci virů pozorované metodami DAS/I-ELISA a RT-PCR v rostlinných tkáních jsou důsledkem jiných vlivů (inhibitory, stárnutí rostlinných tkání, nižší citlivost atd.) než změnami v samotné koncentraci virů v rostlinách.
V průběhu monitoringu (celkem bylo otestováno 351 stromů) se ukázalo, že studované viry jsou více rozšířeny v jabloňových sadech a v zahradách než v planých volně rostoucích jabloních.
Vybrané virové izoláty planých a kulturních jabloní byly osekvenovány a byla studována jejich molekulární variabilita i v porovnání s již publikovanými izoláty studovaných virů. Nebyly však objeveny žádné výrazné rozdíly mezi jednotlivými izoláty a ani nalezen žádný vztah s jejich geografickým původem nebo typem výsadby, ze které pocházely.
|
|
|
Metodika diagnostiky ApMV, ACLSV a ASGV v odrůdách a podnožích jabloně a hrušně pomocí ELISA: Certifikovaná metodika pro praxi
Svoboda, Jiří ; Polák, Jaroslav
Přítomnost virů mozaiky jabloně (ApMV), chlorotické skvrnitosti jabloně (ACLSV) a žlábkovitosti kmene jabloně (ASGV) se podle EPPO metodiky stanovuje v odrůdách a podnožích jabloně a hrušně vyhodnocením příznaků po přenosu na dřevinné indikátory. Toto hodnocení trvá minimálně dva až tři roky. Proto bylo vypracováno a v praxi vyzkoušeno sérologické, imunoenzymatické stanovení pomocí ELISA jako spolehlivá a specifická metoda zjištění přítomnosti ApMV, ACLSV a ASGV ve stromech jabloně a hrušně. Výsledky dlouholetého výzkumu diagnostiky těchto virů včetně přípravy specifických protilátek na pracovišti virologie VÚRV, v.v.i. Praha prokazují vhodnost metody ELISA pro detekci jmenovaných virů ve specifickém ročním období při použití určité tkáně stromu. Vypracované metodické postupy jsou určeny pro laboratoře státních kontrolních a dozorových institucí, ÚKZÚZ, SRS, laboratoře zajišťující systém certifikace ovocných dřevin a další rostlinolékařské diagnostické laboratoře.
Plný text:  PDF
|
host ::
RSS.