|
|
Příprava rekombinantního inhibitoru serinových proteáz z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
VLNOVÁ, Ivana
Inhibitory serinových proteáz klíšťat mohou být díky jejich vlastnostem a funkcím vhodnými kandidáty na vakcínu proti klíšťatům. Cílem této práce bylo připravit rekombinantní inhibitor serinových proteáz z klíštěte Ixodes ricinus v bakulovirovém expresním systému. Pro tento účel byly vybrány dva proteiny z nadrodiny serpinů a transformovány do plazmidů. Jeden rekombinantní protein byl exprimován v bakulovirovém expresním systému, následně byl přečištěn a byla provedena jeho biochemická analýza.
|
|
| |
|
|
Charakterizace defensinu klíštěte \kur{Dermacentor marginatus}
LEŠTINOVÁ, Kateřina
Antimikrobiální peptidy (AMPs), které jsou součástí imunitního systému klíšťat a dalších žijících organismů, jsou schopné eliminovat patogenní organismy. Defensiny jsou u klíšťat nejdůležitější skupinou AMPs. V této práci byl studován defensin z klíštěte D. marginatus. Gen pro defensin byl izolován z nasátých samic D. marginatus. Pomocí RT-PCR byla detekována genová exprese ve slinných žlázách a ve střevě. Rekombinantní protein byl připraven v prokaryontním expresním systému, purifikován a testován pro svou antimikrobiální aktivitu. Byly připraveny specifické polyklonální králičí protilátky (anti DR IgG) a byla testována jejich specifita i sensitivita.
|
|
|
Studium sericinu 3 u \kur{Bombyx mori} a zaklonování sericinu do \kur{Escherichia coli}
KRŮČEK, Tomáš
Spřádané hedvábné vlákno bource morušového se zkládá z fibroinů a sericinů, které je drží pohromadě. Sericiny jsou na serin bohaté a jeho obsah je kolem 20-30% celkové bílkoviny kokonu. Sericiny se získávají, jako vedlejší produkt při výrobě hedvábí. Při máčení kokonů v horké vodě se luhují sericiny, které jsou v malé míře komerečně využívané. Sericiny jsou známe hlavně z kosmetických přípravků. Velká snaha je, aby bylo možno nahradit bovinní telecí sérum z buněčných medií sericiny, neví se však, který by byl účinný. Naším cílem bylo pokusit se zaklonovat několik zajímavých oblastí se sericinu 3. Sericin 3 je bohatý na aminokyseliny aspartát, asparagin, glutamát, glutamin serin. Bylo izolováno několik úseků o délce: 267, 279, 525, 672 a 528 bp. Tyto úseky jsou vybrány z repetitivních oblastí sericinu. DNA úseky byly zaklonovány do Escherichia coli a exprimovány, jako proteiny obsahující hexahistidin. Tyto úseky byly přečištěny pomocí afinitní chromatografie a prokázány na polyakrylamidovém gelu.
|
|
|
Charakterizace dvou zástupců multigenní rodiny jednodoménových Kunitz-inhibitorů z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
SINGEROVÁ, Barbora
Dva nové geny, kódující 94AA dlouhé proteiny Monolaris 1 a Monolaris 2, byly izolovány z klíštěte Ixodes ricinus. Monolaris 1 je 8,1kDa velký protein, Monolaris 2 8,3kDa. Funkce proteinu Monolaris 1 byla testována s použitím RNA interference. Po injikaci dsRNA se daly samičky klíštěte Ixodes ricinus sát na morčata. Pro zhodnocení efektu utlumení genu byla změřena tělesná hmotnost, hmotnost vaječné snůšky a úmrtnost samic. V bakteriálním expresním systému byl připraven rekombinantní protein Monolaris 1 a po imunizaci králíka byly získány protilátky proti tomuto proteinu. Protilátky reagovaly s přibližně 190kDa velkým proteinem ve slinných žlázách, ováriích a střevě klíštěte, zatímco Monolaris 1 nebyl v slinách, slinných žlázách a dalších tkáních detekován.
|
|
| |
host ::
RSS.