|
|
The Study of Molecular and Biochemical Bases of Cytochrome C Oxidase Deficiency
Veselá, Kateřina ; Zeman, Jiří (vedoucí práce) ; Farghali, Hassan (oponent) ; Drahota, Zdeněk (oponent)
Předkládaná práce vznikla v Laboratoři pro studium mitochondriálních poruch Kliniky dětského a dorostového lékařství 1.LF UK v Praze, která je diagnostickým centrem pro pacienty z České a Slovenské Republiky. V průběhu posledních let bylo v naší laboratoři diagnostikováno přes 40 pacientů s izolovanou poruchou aktivity cytochrom c oxidázy (COX). Molekulární podstata onemocnění byla objasněna pouze u 12 pacientů, kteří nesli patologické mutace v SURF1 genu. Vzhledem k tomu, že v současnosti neexistuje žádná adekvátní léčba těchto onemocnění, hraje v přístupu k postiženým rodinám klíčovou roli genetické poradenství a možnost prenatální diagnostiky. Skutečnost, že mitochondriální poruchy mohou mít dvojí genetický původ (geny kódovány mitochondriální nebo jadernou DNA), se kterým jsou spojené i specifické vlastnosti různých typů dědičnosti, genetické poradenství založené pouze na biochemickém potvrzení COX deficience je značně obtížné nebo dokonce zcela nemožné. Cílem naší práce byla snaha odhalit molekulární podstatu deficitu COX u našich pacientů. Kromě optimalizace metod pro rutinní skríning a nalezení několika patologických mutací v genech pro asemblační proteiny, jsme měli možnost studovat také tkáňový dopad těchto mutací z pohledu biochemického, strukturálního a histochemického.
|
|
| |
|
|
Exprese cytokinů, zvláště chemokinů, po aplikaci acyklických nukleosidfosfonátů
Potměšil, Petr ; Zídek, Zdeněk (vedoucí práce) ; Otová, Berta (oponent) ; Farghali, Hassan (oponent)
Acyklické nukleosidfosfonáty jsou samostatnou skupinou antivirotik, která účinně potlačují replikaci DNA virů a retrovirů. V klinické praxi se používají tenofovir (Viread®) k léčbě infekce virem HIV-1, adefovir (Hepsera®) k terapii hepatitidy B a cidofovir (Vistide®) k léčbě cytomegalovirové retinitidy u pacientů s AIDS [43]. V minulosti bylo zjištěno, že některé ANP jako např. tenofovir mají rovněž imunomodulační vlastnosti, které by mohly znamenat dodatečný protivirový účinek. Tenofovir zvyšuje expresi NO, cytokinů TNF- , IL-10 a chemokinů RANTES, MIP-1 [18, 42, 48]. V dalších experimentech jsme věnovali pozornost imunobiologickým účinkům nových derivátů ANP za podmínek in vitro u myších makrofágů a splenocytů, případně u lidských leukocytů. Nejdříve jsme věnovali pozornost sloučeninám odvozeným od adeninu nebo 2,6-diaminopurinu, které se liší přítomností fosfonometoxyetylové nebo fosfonometoxypropylové skupiny v poloze N9 a typem substituce aminoskupiny v poloze N6 heterocyklické báze. Zjistili jsme, že řada těchto sloučenin má schopnost zvýšit produkci NO, cytokinů TNF- , IL-10 a chemokinů RANTES, MIP-1 [41]. Nově jsme ukázali, že ANP indukují expresi chemokinů MCP-1 a MCP-3, nikoliv však MCP-2 a MCP-5 [39]. K molekulám jejichž exprese nebyla působením vybraných ANP ovlivněna patřily IFN- , IFN- , SDF-1...
|
|
|
Změny exprese a produkce cyklooxygenáz v míše vlivem bolesti a farmak
Procházková, Michaela ; Kršiak, Miloslav (vedoucí práce) ; Farghali, Hassan (oponent) ; Rokyta, Richard (oponent)
Cílem naší práce bylo zjistit, zda a jak se mění exprese a produkce COX-1 a 2 v míše u různých typů bolestí a zjistit vliv vybraných analgetik na expresi a produkci COX-1 a COX-2 v lumbální části míchy v modelu zánětlivé bolesti. Všechny experimenty, které byly provedeny v rámci disertační práce, byly provedeny na laboratorních potkanech. Bolest byla měřena v plantar testu nebo pomocí von Freyových filament. Exprese jednotlivých cyklooxygenáz byla testována pomocí real-time PCR analýzy, zatímco produkce COX-1 a COX-2 byla sledována pomocí ELISA metody. Zjistili jsme, že při periferní bolesti může být v míše zvýšena exprese a produkce nejen COX-2, ale i COX-1 a že profil změn exprese a produkce COX-1 a 2 v míše je u různých typů bolestí různý. Při zánětlivé bolesti způsobené intraplantární aplikací karageninu se v míše zvyšovala exprese COX-2, neměnila se však exprese COX-1. Naproti tomu u neuropatické bolesti se v míše exprese COX-2 nezvyšovala, ale docházelo k výraznému zvýšení exprese COX-1, a to až po dlouhé latenci 21 dní. K indukci obou cyklooxygenáz docházelo v modelu pooperační bolesti a osteoartrózy. Změny exprese a produkce COX-1 a 2 v míše nebyly statické, ale vyvíjely se v čase. Analgetika podaná v ekvianalgetických dávkách (ED50) měla v modelu zánětlivé bolesti různý vliv na expresi a produkci...
|
|
|
Účinek analgetik a jejich kombinací s neurofarmaky na bolest a mediátory v mozku
Soukupová, Marie ; Kršiak, Miloslav (vedoucí práce) ; Farghali, Hassan (oponent) ; Rokyta, Richard (oponent)
Prvním cílem bylo experimentálně zjišťovat změny analgetické účinnosti některých analgetik při kombinaci s vybranými neurofarmaky, a to při celkovém podání. Druhým cílem bylo zjišťovat změny hladin mediátorů bolesti in vivo v supraspinálních strukturách mozku (v periakveduktální šedi, centrální amygdale, striatu) při bolesti a pod vlivem farmak. Metody: Analgetická účinnost kombinací analgetik s neurofarmaky byla zjišťována v testu peritoneálního dráždění u myší. Interakce analgetik s neurofarmaky byly hodnoceny tzv. izobolografickou analýzou, která umožňuje odlišit supra-aditivní (synergické) interakce od pouze aditivních a sub-aditivních. Případný nepříznivý vliv neurofarmak na motorické funkce byl zjišťován v testu rotující tyčky u myší. Změny hladin mediátorů v mozku při bolesti a vlivem farmak jsme zjišťovali u potkanů metodou mikrodialýzy in vivo napojenou na vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii. Použili jsme model zánětlivé bolesti navozené intraplantární aplikací karageninu a model neuropatické bolesti způsobené částečným poraněním sedacího nervu u potkanů. Bolest jsme měřili v plantar testu a von Freyovými vlákny. Výsledky: V mikrodialyzačních experimentech bylo zjištěno, že zánětlivá bolest způsobená intraplantární aplikací karageninu je spojena se zvýšením hladin glycinu v periakveduktální...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.