|
| |
|
| |
|
|
Možnosti využití antivirotik v procesu eliminace virů u česneku kuchyňského
Kudělková, Martina
Disertační práce byla zaměřena na studium vlivu tří antivirotik, acycloviru, rimantadinu nebo zidovudinu, pro jejich možné použití v procesu chemoterapie v kombinaci s meristémovou kulturou pro eradikaci virů Onion yellow stripe virus, Leek yellow stripe virus, Garlic common laten virus a Shallot latent virus v podmínkách in vitro. Antivirotika byla aplikována vždy jednotlivě do kultivačního média a sledovány byly dvě koncentrace (25 nebo 50 mg.l-1). Doba působení antivirotik byla dva týdny. Prostá meristémová kultura byla zvolena jako kontrolní metoda. Ve všech variantách bylo použito Murashige a Skoog medium. První rok práce byly chemoterapií ošetřeny rostliny česneku odrůdy 'D'Alsace Freres' kultivované in vitro, které byly již jednou, neúspěšně, ošetřeny metodou meristémových kultur. Přítomnost virových patogenů byla detekována metodou ELISA. Jako nejefektivnější varianta pro eliminaci sledovaných virů byla varianta aplikace rimantadinu v koncentraci 50 mg.l-1. Pro další části experimentu byla pro detekci přítomnosti sledovaných virů optimalizována citlivější metoda reverzně-transkripční polymerázové řetězové reakce (RT-PCR), a to včetně navržení a ověření primerů pro detekci viru Garlic common latent virus (GCLV). Druhý rok byly chemoterapií ošetřeny izolované meristémy s ponecháním jednoho listového primordia o velikosti 0,8 mm. Explantáty odrůd česneku ´Blanin´, ´Sukoradský´ a ´Japo´ však neregenerovaly ani u kontrolní varianty a chemoterapie nemohla být hodnocena. V dalších dvou letech byly chemoterapií ošetřeny jednotlivé stroužky česneku odrůdy ´Unikát´. U rostlin byla před ošetřením provedena detekce přítomnosti virových patogenů a pouze jedna rostlina byla všech sledovaných virů prostá. Při vyhodnocení jednotlivých variant ošetření bylo zjištěno, že pro eliminaci sledovaného komplexu virů je nejefektivnější použití acycloviru v koncentraci 25 mg.l-1, a to rovněž z pohledu ekonomického. V disertační práci byla dále zahájena optimalizace relativní kvantifikace viru Garlic common latent virus. Po přetestování souboru izolátů negativních na přítomnost viru dle RT-PCR bylo detekcí metodou Real-Time PCR pozorováno vyšší procento izolátů pozitivních na přítomnost GCLV. Optimalizace metody pro další viry bude předmětem dalších výzkumů.
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.