|
|
Vývoj metodiky pro identifikaci hmyzu určeného pro lidskou spotřebu na základě molekulárních metod
MÜLLEROVÁ, Veronika
Hmyz bývá často označován jako potravina budoucnosti. Důležitým předpokladem pro využití hmyzu jako potraviny je konstrukce přesné a spolehlivé metody detekce hmyzu. Cílem bakalářské práce bylo vyvinout molekulární metodu, podle které by se v potravinách dala ověřit přítomnost potemníka moučného (Tenebrio molitor), jenž je od roku 2021 v EU schválen ke konzumaci. Experimentální část zahrnovala optimalizaci izolace DNA potemníka moučného. Pro ověření specificity metody bylo pracováno i s potemníkem brazilským (Zophobas morio), který ke konzumaci schválen není. DNA byla izolována ze sušených larev brouků, z běžného pečiva, perníku, čokolády a rýžové kaše. Pro izolaci DNA byly provedeny 3 různé postupy. Jako vhodná metoda s nejvyšší výtěžností a čistotou DNA byla stanovena metoda izolace DNA pomocí CTAB-PVP. Následně byla provedena optimalizace složení reakční směsi a reakčního cyklu PCR včetně optimalizace annealingu primerů. Výsledky byly vizualizovány pomocí gelové elektroforézy. Výsledná metoda je přesná, specifická a vhodná pro rutinní detekci potemníka moučného v potravinách.
|
|
|
Molekulární detekce střevních parazitů u laboratorních hlodavců
FÜRSTOVÁ, Petra
Diplomová práce se zaměřuje na problematiku molekulární detekce pomocí real-time PCR u laboratorních hlodavců s využitím primerů pro TaqMan real-time PCR. Navržené primery byly verifikovány na 22 vzorcích bukálních stěrů, biopsií ze střevní tkáně a exkrementů. Specificita byla ověřena na 9 příbuzných střevních parazitech. Také bylo provedeno stanovení detekčních limitů reakčních směsí. Detekční limit pro reakční směs pro Spironucleus muris byl stanoven na 3,3×10-5 ng/l, pro Tritrichomonas muris na 9,4×10-8 ng/l a pro Giardia muris na 1,66×10-6 ng/l. Mezi laboratorními hlodavci existuje mnoho onemocnění a přítomnost původců těchto onemocnění je potřeba detekovat. Mezi nejcitlivější detekční metody patří právě molekulární detekce. V dnešní době je stále k dispozici pouze málo navržených esejí pro detekci střevních parazitů, mezi které se řadí například Spironucleus muris, Tritrichomonas muris a v neposlední řadě Giardia muris. Potřeba detekovat tyto parazity vzrostla v důsledku stoupající poptávky po SPF (specified-pathogen free) laboratorních hlodavcích pro experimentální potřeby. Často se využívají jako indikátor selhání mikroizolační techniky. Střevní paraziti mohou také způsobovat velmi nepříjemná onemocnění, které je potřeba léčit. Cíle práce byly splněny. Optimalizované metody jsou vhodné pro použití k detekci Spironucleus muris, Tritrichomonas muris a Giardia muris. Výsledky diplomové práce mohou sloužit jako informační zdroj a mohou být využity k dalším výzkumným účelům.
|
|
|
Molekulární detekce bakterií rodu \kur{Helicobacter} u laboratorních myší
FEDOR, Tereza
Tato práce se zabývá molekulární detekcí bakterií rodu Helicobacter u laboratorních myší. Bakterie rodu Helicobacter jsou známé svou schopností infikovat gastrointestinální trakt savců. Tento výzkum se zaměřuje na vývoj a optimalizaci metod pro citlivou detekci těchto bakterií z bukálních stěrů myší. Byly použity molekulární metody, jako je TaqMan real-time PCR, konvenční PCR a klonování. Výsledky této práce mohou pomoci určit prevalenci infikovaných myší ve výzkumných laboratořích, což může být užitečné pro vývoj léčby onemocnění gastrointestinálního traktu a souvisejících onemocnění.
|
|
|
Optimalizace real-time PCR pro detekci bakterie Klebsiella pneumoniae
ELSTNEROVÁ, Šárka
Předmětem této bakalářské práce je optimalizace real-time PCR pro detekci bakterie Klebsiella pneumoniae s využitím primerů z publikace Sun et al, 2010, pro SYBR Green real-time PCR a end point PCR a primerů navržených vedoucí této práce (Stehlíková, nepublikováno) pro TaqMan real-time PCR. Vybrané primery byly následně testovány na vzorcích čisté kultury Klebsiella pneumoniae 4799 ze sbírky DSMZ a verifikovány na 41 vzorcích stěrů z bukální sliznice. Dále bylo provedeno stanovení specificity za použití 26 izolátů bakteriální DNA a senzitivity detekčních metod PCR v závislosti na jejich rutinním používání, stanovení jejich detekčních limitů a porovnání.
|
host ::
RSS.