|
|
Analýza glykoproteinů ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
BUČINSKÁ, Lenka
Charakterizovala jsem nekolik potencionálních glykoproteinů z extraktů slinných žláz nenasátých a částečně nasátých samic klíštěte Ixodes ricinus použitím afinitního značení s lektiny a pomocí enzymatické deglykosylační reakce. Izolovala jsem glykoprotein specifický k lektinu GNA. Tento glykoprotein obsahuje N{--}vázanou terminální manózu připojenou Man{$\alpha$}1,3Man. Tento protein byl hmotnostní spektrometrii určen jako Karboxypeptidáza M. Dále byly izolovány dva glykoproteiny obsahující GalNAc pomocí HPA{--}afinitní chromatografie. Výsledkem MS analýzy bylo určení morčecího proteinu Trappin 12. V SŽ nasáté samice klíštěte jsem detekovala fukózu vazanou vazbami {$\alpha$}1,2, {$\alpha$}1,3 a {$\alpha$}1,6. Také přítomnost O{--}vázané fukózy je možná. Přítomnost kyseliny sialové v glykoproteinech SŽ a slinách nasáté samice klíště byla nepřímo prokázána vazbou s MAA II lektinem. Analýzou hmotnostní spekrometrie byla zjištěna N{--}terminální sekvence peptidu podobná s myším sialoadhesinem (Siglec 1). Dosavadní výsledky z MS zatím nepřispěly k potvrzení či vyvrácení přítomnosti Siglec 1. Z nenasátých SŽ samic jsme izolovali dva proteiny specifické pro značení GNA lektinem. Byly předběžně identifikovány jako protein podobný arylsulfatáze B a Sojo protein cytoskeletu klíštěte Ixodes. Přítomnost proteinů s GNA specifitou byla prokázána v granulech acinů SŽ nenasáté a částečně nasáté samice klíštěte. Přítomnost fukózy byla prokázána v granulárních buňkách acinů II a III a ve střevních buňkách a obsahu střeva klíštěte pomocí afinitního značení a reakce byla pozorována florescenčním mikroskopem.
|
|
|
Charakterizace rodiny proteinů o molekulové hmotnosti 18,7 a 19 kDa ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
SOUČKOVÁ, Nina
Podařilo se vytvořit rekombinantní protein c90 a polyklonální protilátky proti tomuto proteinu. Byla připravena dvouvláknová RNA pro pokusy s RNA interferencí. Z tkání získaných z klíšťat napíchaných touto dsRNA po pěti dnech sání byly připraveny vzorky pro RT-PCR a Western blot. Dosažené výsledky naznačovaly, že protein c90 se uplatňuje v těle klíštěte v reakci na poranění, a proto byl uskutečněn pokus s klíšťaty napíchanými vodou, G+ bakteriemi a G- bakteriemi. V průběhu získávání dat pro tuto diplomovou práci bylo zjištěno, že zkoumané proteiny mají schopnost tvořit multimery, a že při RNA interferenci nedochází k vypnutí genu, ale naopak k jeho upregulaci. Ve světle těchto informací společně s bioinformatickou analýzou vyvstává možný závěr, že proteiny o molekulové hmotnosti 18,7 a 19 kDa jsou pravděpodobně důležité ve fyziologii klíštěte. Tyto proteiny mají s největší pravděpodobností strukturní funkci v těle klíštěte a jejich produkce může být reakcí na poranění, v případě RNAi vpichu, spíš než v antiimunitě. Současně ale i skutečnost, že u normálního klíštěte jsou proteiny 18,7 kDa exprimované ve větší míře na začátku sací periody nabízí k úvaze to, že i v hostiteli mají tyto proteiny přece jen svou funkci.
|
host ::
RSS.