|
| |
|
|
Rekombinantní cysteinové peptidasy klíšťat
Srba, Jindřich
Rekombinantní cysteinové peptidasy klíšťat Jindřich Srba Abstrakt Intracelulární proteolýza krevních proteinů je zásadním fyziologickým procesem u klíšťat. U klíštěte Ixodes ricinus jsou cysteinové peptidasy, katepsiny B a L, součástí multi-peptidasového komplexu střev. Tato diplomová práce se zabývá přípravou rekombinatních prokatepsinů B a L a charakteristikou funkčních a biochemických vlastností katepsinů B a L. Po expresi prokatepsinů B a L v E. coli a jejich purifikaci z inkluzních tělísek afinitní chromatografií se hledala základní strategie, která by umožnila dosáhnout úspěšného refoldingu. Vhodným typem refoldingu se ukázal pro oba studované prokatepsiny "bazický" refolding. Oba prokatepsiny byly auto-aktivovány v kyselém prostředí pH 4,0; katepsin B (nikoli katepsin L) také při pH 5,5. Byla určena závislost aktivity na pH, substrátová a inhibiční specificita. Optimální pH pro hydrolytickou aktivitu katepsinů B a L byla v rozmezí 4,5 - 5,5 a 3,0 - 3,5. Oba enzymy byly blokovány skupinovým inhibitorem cysteinových peptidas a každý z nich specifickým inhibitorem navrženým pro savčí katepsiny B a L. Výsledky této diplomové práce ukazují, že katepsiny B a L produkované ve střevě klíštěte I. Ricinus vykazují výraznou exo- resp. endo-petidasovou aktivitu, což potvrzuje jejich předpokládanou úlohu v...
|
|
| |
|
|
Pharmacovigilance:Spontaneous Reporting Systems
Srba, Jindřich ; Vlček, Jiří (vedoucí práce) ; Votava, Martin (oponent) ; Petráček, Jan (oponent)
Farmakovigilance: Systémy spontánního hlášení Srba J. Abstrakt Úvod: Farmakovigilance využívá několika nástrojů pro dohled nad bezpečností léčiv. Systémy spontánního hlášení v evropských zemích byly založeny ve druhé polovině 20. století. Původně bylo spontánní hlášení nežádoucích účinků určeno pouze pro lékaře. Nedostatečné hlášení je obecně považováno za hlavní slabinu tohoto systému. Z důvodu zvýšení počtu hlášení začaly regulační autority přijímat hlášení také přímo od pacientů. Cíle: Cílem této práce bylo charakterizovat farmakovigilanční systém hlášení nežádoucích účinků. Zaměřili jsme se na hodnocení pozice pacientů jako přímý zdroj hlášení nežádoucích účinků (PRO-AE) v zavedených systémech evropských zemí. Dílčí cíle byli i) charakterizovat aktivity hlášení v rámci evropských zemí, ii) zhodnotit pozici pacientů jako přímý zdroj hlášení nežádoucích účinků, a iii) zpracovat přehled o přístupu regulačních autorit k hlášení nežádoucích účinků přímo pacienty. Metodika: Praktická část byla založena na dotaznících distribuovaných na příslušné národní kompetentní autority, a na rešerši elektronických databází s relevantními publikovanými články. Výsledky: Charakterizace a srovnávání národních systémů hlášení nežádoucích účinků bylo založeno na poměru počtu hlášení na obyvatele. V průběhu let rostl počet...
|
|
|
Rekombinantní cysteinové peptidasy klíšťat
Srba, Jindřich
Rekombinantní cysteinové peptidasy klíšťat Jindřich Srba Abstrakt Intracelulární proteolýza krevních proteinů je zásadním fyziologickým procesem u klíšťat. U klíštěte Ixodes ricinus jsou cysteinové peptidasy, katepsiny B a L, součástí multi-peptidasového komplexu střev. Tato diplomová práce se zabývá přípravou rekombinatních prokatepsinů B a L a charakteristikou funkčních a biochemických vlastností katepsinů B a L. Po expresi prokatepsinů B a L v E. coli a jejich purifikaci z inkluzních tělísek afinitní chromatografií se hledala základní strategie, která by umožnila dosáhnout úspěšného refoldingu. Vhodným typem refoldingu se ukázal pro oba studované prokatepsiny "bazický" refolding. Oba prokatepsiny byly auto-aktivovány v kyselém prostředí pH 4,0; katepsin B (nikoli katepsin L) také při pH 5,5. Byla určena závislost aktivity na pH, substrátová a inhibiční specificita. Optimální pH pro hydrolytickou aktivitu katepsinů B a L byla v rozmezí 4,5 - 5,5 a 3,0 - 3,5. Oba enzymy byly blokovány skupinovým inhibitorem cysteinových peptidas a každý z nich specifickým inhibitorem navrženým pro savčí katepsiny B a L. Výsledky této diplomové práce ukazují, že katepsiny B a L produkované ve střevě klíštěte I. Ricinus vykazují výraznou exo- resp. endo-petidasovou aktivitu, což potvrzuje jejich předpokládanou úlohu v...
|
|
| |
host ::
RSS.