|
|
Úloha transportních systémů pro draselné kationty ve fyziologii kvasinky Saccharomyces cerevisiae
Marešová, Lydie ; Sychrová, Hana (vedoucí práce) ; Pácha, Jiří (oponent) ; Janderová, Blanka (oponent)
V rámci této disertační práce se podařilo objasnit některé dříve publikované nesrovnalosti (Ramírez et al., 1998) v souvislosti s domnělým K+/H antiporterem plasmatické membrány kvasinky S cerevisiae. Bylo prokázáno, že Kha I p nezprostředkovává transport draselných kationtů z buněk přes plasmatickou membránu a že mutanty s delecí khal nemají změněný vnitorbuněčný obsah K+ ani zvýšený membránový potenciál. Byly nalezeny a ověřeny nové fenotypy delece khal (citlivost k zvýšenému pH růstového média a k hygromycinu B) což (1) napovídá o funkci proteinu Kha l v regulaci vnitrobuně čného a vnitroorganelového pH a následně v regulaci homeostáze kationtů alkalických kovů v cytosolu a uvnitř buněčných organel; a (2) umožňuje heterologní xpresi a charakterizaci příbuzných proteinů z vyšších eukaryot v S cerevisiae. První z nich, protein Chx 17 z A. thaliana, byl v delečních mutantech exprimován a ukázalo se, že je schopen komplementovat fenotypové projevy delece khal, takže jeho role v buňkách A. thaliana by mohla být podobná funkci proteinu Kha 1 v S. cerevisiae. Jeden z vytyčenýc h cílů disertační práce se nepodařilo splnit docela: Bylo sice správně určeno, že protein Khal není lokalizován v plasmatické membráně kvasinky, a jeho lokalizace byla odhadnuta do membrány Golgiho aparátu, než se však podařilo nalézt...
|
|
|
Stechiometrie transportu membránovým transportním proteinem MntH bakterie E. coli
Doležalová, Iva ; Chaloupka, Roman (vedoucí práce) ; Marešová, Lydie (oponent)
Rodina Nramp(Natural Resistance-Associated Macrophage Protein) zahrnuje proteiny, které zprostředkovávají symport dvojmocných kovových iontů spolu s protony do buňky. Kovové ionty mají v buněčném organismu velký význam, podílejí se na celé řadě důležitých vnitrobuněčných procesů. Proto jsme se studiem stechiometrie transportu bakteriálním proteinem MntH (Proton-dependent Manganese Transporter) z této rodiny snažili rozšířit naše znalosti o funkci a charakteristikách celé této rodiny. Zkoumáním divokého typu proteinu MntH a proteinu s mutací N401G, u které byly již dříve pozorovány funkční odchylky, jsme zjistili výrazný vliv vnějšího pH na stechiometrii transportu. Funkční rozdíly mezi divokým typem a proteinem s mutací N401G se projevily pouze v kyselejším vnějším pH. V experimentálních podmínkách, při nichž byl již dříve pozorován odpřažený tok protonů proteinem MntH, jsme zjistili, že vápník způsobuje nejen inhibici odpřaženého toku protonů tímto proteinem, ale i aktivaci spřaženého toku protonů. To může mít spojitost s tím, že se vápenaté ionty tímto proteinem také přenáší. Překvapivě však přidání vápenatých iontů ani změna vnějšího média nemají signifikantní vliv na hodnotu stechiometrie transportu divokým typem MntH ani proteinem s mutací N401G.
|
|
|
Úloha transportních systémů pro draselné kationty ve fyziologii kvasinky Saccharomyces cerevisiae
Marešová, Lydie ; Sychrová, Hana (vedoucí práce) ; Pácha, Jiří (oponent) ; Janderová, Blanka (oponent)
V rámci této disertační práce se podařilo objasnit některé dříve publikované nesrovnalosti (Ramírez et al., 1998) v souvislosti s domnělým K+/H antiporterem plasmatické membrány kvasinky S cerevisiae. Bylo prokázáno, že Kha I p nezprostředkovává transport draselných kationtů z buněk přes plasmatickou membránu a že mutanty s delecí khal nemají změněný vnitorbuněčný obsah K+ ani zvýšený membránový potenciál. Byly nalezeny a ověřeny nové fenotypy delece khal (citlivost k zvýšenému pH růstového média a k hygromycinu B) což (1) napovídá o funkci proteinu Kha l v regulaci vnitrobuně čného a vnitroorganelového pH a následně v regulaci homeostáze kationtů alkalických kovů v cytosolu a uvnitř buněčných organel; a (2) umožňuje heterologní xpresi a charakterizaci příbuzných proteinů z vyšších eukaryot v S cerevisiae. První z nich, protein Chx 17 z A. thaliana, byl v delečních mutantech exprimován a ukázalo se, že je schopen komplementovat fenotypové projevy delece khal, takže jeho role v buňkách A. thaliana by mohla být podobná funkci proteinu Kha 1 v S. cerevisiae. Jeden z vytyčenýc h cílů disertační práce se nepodařilo splnit docela: Bylo sice správně určeno, že protein Khal není lokalizován v plasmatické membráně kvasinky, a jeho lokalizace byla odhadnuta do membrány Golgiho aparátu, než se však podařilo nalézt...
|
host ::
RSS.