|
The potential of aldo-keto reductase 1C3 inhibition as an off-target effect of isocitrate dehydrogenase 2 inhibitor enasidenib in leukemia.
Haddad, Melodie ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Melodie Haddad Školitel: Mgr: Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Konzultant: Anselm Morell García, Ph.D. Název diplomové práce: POTENCIÁL INHIBICE ALDO-KETO REDUKTÁZY 1C3 JAKO NECÍLENÉHO ÚČINKU INHIBITORU ISOCITRÁT DEHYDROGENÁZY 2 ENASIDENIBU U LEUKÉMIE Akutní myeloidní leukémie (AML) zahrnuje nadměrnou proliferaci klonálních myeloidních blastů. Studuje se několik léků zaměřených na mutace AML, přičemž enasidenib (ENA) je prvním selektivním inhibitorem mutací izocitrát dehydrogenázy 2 (IDH2) schváleným úřadem FDA. Současná multicentrická klinická studie ukázala povzbudivé výsledky kombinace ENA se standardní intenzivní indukční léčbou, včetně daunorubicinu (Daun). Exprese transportérů ABC (ATP-binding cassette) a aldo-keto reduktázy 1, člena C3 (AKR1C3) v buňkách AML však může vést k extruzi a hydroxylaci Daunu, což snižuje jeho cytotoxické účinky. Cílem této studie bylo zhodnotit vliv ENA na akumulaci a/nebo inaktivaci Daunu v leukemické buněčné linii KG1α. ENA měla synergický účinek na cytotoxicitu Daunu v buňkách KG1α v souvislosti s jeho vyšší akumulací a nižší metabolizací. Kromě toho AKR1C3 také katalyzuje přeměnu prostaglandinu D2 (PGD2) na 9α a 11β-prostaglandin F2α (11β-PGF2α), který indukuje proliferaci...
|
|
Vliv inhibice belinostatu na aktivitu vybraných reduktas z nadrodiny AKR a SDR.
Slámová, Adéla ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Adéla Slámová Školitel: prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv inhibice belinostatu na aktivitu vybraných reduktas z nadrodiny AKR a SDR Antracyklinová antibiotika (ANT) jsou významná protinádorová léčiva. Jedním z nich je daunorubicin (DAUN), který se používá v léčbě akutních leukémií a jiných malignit u dětí i dospělých. Mezi faktory limitující jeho klinické použití patří rezistence a kardiotoxicita. Enzymy z nadrodiny aldo-ketoreduktáz (AKR) a dehydrogenáz/reduktáz s krátkým řetězcem (SDR) katalyzují redukci DAUN na C-13 alkoholový metabolit daunorubicinol (DAUNOL). Ten má vyšší kardiotoxicitu, menší antineoplastickou aktivitu a je zodpovědný mimo jiné za ANT rezistenci. Cílem této diplomové práce bylo zjistit inhibiční účinek belinostatu na aktivitu AKR1A1, 1B1, 1B10, 1C3 a CBR1. Specifická enzymová aktivita a inhibiční potenciál byly posouzeny na úrovni in vitro pomocí rekombinantních enzymů a enzymatická tvorba DAUNOL byla hodnocena pomocí kapalinové chromatografie (UHPLC). Míra inhibice klesala v pořadí AKR1C3 AKR1B10 AKR1A1 AKR1B1 CBR1. Nejvíce inhibovaný enzym AKR1C3 vykazoval 50,7% inhibici 10M belinostatem a 89,2% inhibici 50M belinostatem. V porovnání s...
|
|
Characterization of different differentiation protocols of H9c2 cardiomyoblasts
Gardianová, Anna ; Jirkovský, Eduard (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Anna Gardianová Školiteľ: PharmDr. Eduard Jirkovský, Ph.D. Názov diplomovej práce: Charakterizácia rôznych diferenciačných protokolov H9c2 kardiomyoblastov Bunková diferenciácia je bežný proces vo vývoji mnohobunkového organizmu, kedy dochádza k zmene bunkového vzhľadu a funkcie. Proces diferenciácie zohráva významnú úlohu aj pri oprave poškodených tkanív. Niektoré chemické látky môžu negatívne ovplyvniť tieto procesy, a tým ovplyvniť i ľudské zdravie. V tejto práci sme sa zamerali na charakterizáciu procesu diferenciácie bunkovej línie H9c2 použitím rôznych publikovaných diferenciačných protokolov, a popísali v čase zmeny v morfológii (výskyt viacjadrových a predĺžených buniek) a expresii mRNA vybraných markerov typických pre fenotyp srdcového (cTnT, Hand2, GATA4) alebo kostrového (myogenín) svalu. Proces diferenciácie sme sledovali po dobu 15 dní a jednotlivé protokoly sa líšili prídavkom fetálneho hovädzieho séra (FBS, 1 % alebo 10 %) a all-trans-retinovej kyseliny (ATRA, 10 nmol/L) do kultivačného média Dulbecco's Modified Eagle's Medium. Z pozorovaných výsledkov môžeme povedať, že všetky použité protokoly viedli k diferenciácii buniek, ktorá sa ale kvantitatívne i kvalitatívne menila a...
|
|
Monitoring the antioxidant activity of newly synthesized potential acetylcholinesterase modulators
Keratová, Žaneta ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Kobrlová, Tereza (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Žaneta Keratová Vedoucí diplomové práce: RNDr. Miloslav Macháček, Ph.D. Konzultant: RNDr. Ľubica Múčková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Sledovanie antioxidačnej aktivity novo syntetizovaných potenciálnych modulátorov acetylcholinesterasy Teoretická časť diplomovej práce je zameraná na charakteristiku oxidačného stresu (OS) a antioxidačnej ochrany organizmu. V ďalšej časti sú podrobne spracované jednotlivé neurodegeneratívne ochorenia a význam OS pri ich rozvoji. V experimentálnej časti predkladanej práce bola hodnotená cytotoxicita 16 nových potenciálnych modulátorov acetylcholinesterasy pomocou neuroblastómovej bunkovej línie SH-SY5Y. Cytotoxicita látok, vyjadrená ako IC50, bola meraná pomocou kolorimetrickej metódy, ktorá využíva tetrazóliovú soľ (MTT). Táto metóda bola využitá aj k stanoveniu maximálnej tolerovateľnej koncentrácie (MTC). Hodnoty MTC boli následne overené pomocou sledovania apoptoticko-nekrotického profilu buniek vo fyziologickom prostredí (bez OS) a v prostredí OS, ktoré bolo indukované peroxidom vodíka (H2O2) pomocou mikrokapilárnej prietokovej cytometrie. Z výsledkov bolo patrné, že látky nevyvolali žiadnu štatisticky významnú zmenu distribúcie buniek v jednotlivých populáciách....
|
|
Study of migration of cells affected by sulfur mustard
Mojská, Mária ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Fikrová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Mária Mojská Školiteľ: RNDr. Miloslav Macháček, PhD. Konzultant: Mgr. Petr Jošt, PhD. Názov diplomovej práce: Štúdium migrácie buniek ovplyvnených sírnym yperitom Sírny yperit je vysoko toxická chemická látka. Z pohľadu toxikológie ju radíme medzi pľuzgierotvorné chemické látky a jej použitie je zakázané medzinárodným "Dohovorom o zákaze vývoja, výroby, hromadenia a použitia chemických zbraní a o ich zničení". Aj napriek tomu bola však táto látka v minulosti zneužitá v niekoľkých ozbrojených konfliktoch a teroristických útokoch. Pri kontakte s ľudskou kožou dochádza k tvorbe typických pľuzgierov naplnených nažltlým exsudátom. Sírny yperit má cytotoxické a cytostatické účinky na živé tkanivo, a preto je liečba takýchto lézií mimoriadne obťažná. Táto práca sa zaoberá hodnotením hypotézy, či môžu rastové faktory IGF, KGF a EGF prispieť k rýchlejšej regenerácii tkaniva zasiahnutým yperitom. Metódou "scratch wound healing assay" bol hodnotený vplyv uvedených rastových faktorov na kolektívnu migráciu buniek keratinocytov HaCaT a kožných fibroblastov HDFa v podmienkach in vitro. Naše výsledky ukazujú, že toxické účinky sírneho yperitu natoľko inhibujú migráciu buniek, že sa pozitívny vplyv testovaných rastových...
|
|
Peripherally substituted subphthalocyanines for photodynamic therapy with benzocrown or tyrosine methyl ester as axial ligands
Hlbočanová, Ingrid ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Ingrid Hlbočanová Školiteľ: RNDr. Miloslav Macháček, Ph.D. Názov diplomovej práce: Periférne substituované subftalocyaníny pre fotodynamickú terapiu s axiálne viazaným benzocrownom alebo metylesterom tyrozínu Nádorové ochorenia sa pomaly, ale s istotou stávajú najrozšírenejším ochorením na svete. Malígne stavy postihujú široké spektrum ľudí, ktorí predispozíciu k ochoreniu zdedili geneticky, prípadne boli alebo sú ovplyvnení faktormi vonkajšieho prostredia. Nákladná terapia však predstavuje problém nielen vo vyspelých krajinách, ale hlavne v krajinách tretieho sveta. Financie a dostupnosť predstavujú len časť z problému. Základom je hlavne včasná diagnostika, prevencia pred vznikom tohto typu ochorenia a efektívna terapia. Vzhľadom na vysokú rozšírenosť a úmrtnosť spojenú s malígnymi ochoreniami, ktoré každoročne stúpajú, sa venuje veľké úsilie predchádzaniu týchto ochorení a správnou a včasnou diagnostikou spojenou so zdravým životným štýlom. Veľká pozornosť sa venuje taktiež aj výskumu a vývoju nových a účinných protinádorových liečiv a terapeutických postupov. Jednou z takýchto moderných a sľubných metód je fotodynamická terapia (PDT). Jedná sa o selektívnu, minimálne invazívnu klinicky schválenú...
|
|
Nové inhibitory topoisomerasy II - studie antiproliferačních účinků a vlivu na protinádorovou aktivitu etoposidu
Proftová, Lenka ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lenka Ohnemichlová Školitel: prof. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název diplomové práce: Nové inhibitory topoisomerasy II - studie antiproliferačních účinků a vlivu na protinádorovou aktivitu etoposidu Rakovina je závažným celospolečenským problémem, který se může týkat každého z nás, její výskyt se navíc výrazně zvyšuje s věkem. Antracyklinová antibiotika (ANT) představují mimořádně účinné léky, pomocí nichž se léčila a stále léčí celá řada rakovinných onemocnění. Mají multimodální mechanismus účinku, přičemž jedním z mechanismů je inhibice topoisomerasy 2 (TOP2), základního buněčného enzymu modulujícího topologii DNA. V současné době je užití ANT limitováno kvůli obavám plynoucím z výskytu kardiotoxicity. Etoposid (ETO) je protinádorová látka působící jako topoisomerasový jed. Často je využíván v léčbě v kombinaci společně s ANT, není však na rozdíl od antracyklinů považovaný za významně kardiotoxický. Proti kardiotoxicitě ANT působí dexrazoxan (DEX), také známý jako ICRF-187, jako jediné dosud schválené kardioprotektivum. Nepůsobí však jako chelátor iontů železa, nýbrž prostřednictvím ovlivnění TOP2. Ačkoliv se DEX potvrdil jako velmi účinná kardioprotektivní látka, má i své nevýhody, především bývá...
|
|
Porovnání vlivu bisfenolů na parentní a diferencované H9c2 buňky
Macáková, Barbora ; Jirkovský, Eduard (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Barbora Macáková Školiteľ: PharmDr. Eduard Jirkovský, Ph.D. Názov diplomovej práce: Porovnanie vplyvu bisfenolov na parentné a diferencované H9c2 bunky Bisfenoly je skupina látok vyskytujúca sa vo veľkej miere v produktoch a v životnom prostredí. Ich možná toxicita na ľudské zdravie je stále v procese študovania,pričom priamy účinok enviromentálne relevantných dávok nebol pozorovaný. Tieto endokrinné disruptory pôsobia na rôzne receptory v tele a taktiež nie je vylúčený vplyv na kardiovaskulárny systém. Najviac preskúmanou látkou je BPA, ktorý je postupne nahradzovaný svojimi analógmi, ktoré ale nie sú z veľkej časti tak preskúmané. V tejto práci sme sa zamerali na vplyv bisfenolov BP, M a S na diferenciáciu H9c2 buniek, ako modelu, s možnými negatívnymi účinkami na vývoj srdca a jeho regenerácii po poškodení. Bunková línia H9c2 majú nediferencovaný fenotyp ale môžu byť ľahko nasmerované k diferenciácii za určitých podmienok. Skúmaný bol vplyv bisfenolov na diferencované bunky a zmeny v expresii vybraných markerov (GATA4, Hand2, Tnnt2, Myog) diferenciácie (transkripčných faktorov). Dané protokoly boli sledované 9 dní a líšili sa prídavkom fetálneho hovädzieho séra (1 % alebo 10 %), all-trans...
|
|
Protinádorový a imunomodulační efekt polymerních konjugátů na bázi HPMA nesoucích gemcitabin
Klusová, Natálie ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Macháček, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Natálie Klusová Školitel: prof. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Konzultant: RNDr. Milada Šírová, Ph.D. (MBÚ AV ČR, v.v.i.) Název diplomové práce: Protinádorový a imunomodulační efekt polymerních konjugátů na bázi HPMA nesoucích gemcitabin Diplomová práce se zaměřila na zkoumání protinádorového a imunomodulačního účinku polymerních konjugátů na bázi HPMA s navázaným gemcitabinem (Gem). Zkoumány byly čtyři polymerní konjugáty (P-Gem1-P-Gem4), jejichž molární hmotnost a obsah léčiva byly podobné a lišily se použitými spojkami pro vazbu Gem na nosič. Využity byly spojky: β- Alanin (P-Gem1); glycyl-fenylalanyl-leucyl-glycyl (P-Gem2); kyselina aminokapronová (P- Gem3); kyselina valerová (P-Gem4). Na základě stanovených hodnot IC50 na nádorových liniích 4T1, LL2, Panc02, MiaPaca2 a Panc1 byly vzorky rozděleny do dvou skupin: a) vzorky s rychlým uvolňováním léčiva (P-Gem1, P-Gem2); b) vzorky s pomalým uvolňováním léčiva (P-Gem3, P-Gem4). Stabilita konjugátu in vivo ovlivňuje systémovou toxicitu a protinádorovou aktivitu, což prokázal experiment na BALB/c myších s modelem myšího mammárního karcinomu (4T1), kdy byla již po jedné intravenózní aplikaci pozorována významná protinádorová aktivita vzorků P-Gem3 a...
|
| |