|
|
Nové typy magnetických sorbentů pro analýzu fosfoproteinů
Emmerová, Tereza ; Ryšlavá, Helena (oponent) ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce)
Byla vypracována metoda pro studium fosforylačních míst fosfoproteinů. Tato metoda je založena na separaci fosfopeptidů po proteolytickém štěpení fosfoproteinů na nových IMAC magnetických sorbentech s imobilizovanými kovovými ionty a jejich následné identifikaci hmotnostní spektrometrií (MS). Neporézní hydrofilní poly(2- hydroxyethyl metakrylát-co-glycidyl metakrylátové) magnetické částice připravené disperzní kopolymerací a modifikované iminodioctovou kyselinou obsahující imobilizované Fe(III) nebo Ga(III) ionty byly použity k separaci fosfopeptidů z proteolytických směsí peptidů modelových fosfoproteinů: α-kaseinu a prasečího pepsinu A. Optimalizací adsorpčních a elučních podmínek se nám na připravených magnetických sorbentech podařilo selektivně separovat fosfopeptidy z proteolyticky rozštěpeného modelového fosfoproteinu, který obsahoval velké množství kyselých peptidů (prasečí pepsin A). Získané výsledky prokázaly, že připravené magnetické sorbenty jsou vhodné k separaci fosfopeptidů s jednou fosfátovou skupinou i vícenásobně fosforylovaných peptidů. Fosfopeptidy separované z proteolytických směsí peptidů modelových proteinů byly analyzovány MS na principu MALDI-TOF (matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight). Pro imunochemickou separaci fosfoproteinů byla připravena...
|
|
| |
|
|
Separace žaludečních aspartátových proteas pomocí afinitní chromatografie
Frýdlová, Jana ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce) ; Barthová, Jana (oponent) ; Jonáková, Věra (oponent)
Lidská žaludeční šťáva obsahuje zejména aspartátové proteasy - pepsin A a pepsin C. Oba pepsiny jsou produkovány v žaludeční sliznici jako inaktivní pepsinogeny (pepsinogen A a pepsinogen C), které se liší svými fyzikálněchemickými a imunologickými vlastnostmi. Oba pepsinogeny obsahují několik izozymogenů. K aktivaci pepsinogenů na příslušné pepsiny dochází v kyselém prostředí žaludku. (...) Téma dizertační práce je součástí projektu zabývajícího se zejména vypracováním metody pro separaci žaludečních aspartátových proteas, která by byla vhodná pro sledování jejich změn během zmíněných onemocnění. Dizertační práce se konkrétně zabývala přípravou vhodných afinitních sorbentů pro separaci pepsinů a pepsinogenů. Při výběru vhodného afinitního ligandu pro tyto proteasy jsme vycházeli ze známého substrátu N-acetyl-L-fenylalanyl- 3,5-dijod-L-tyrosinu, pomocí kterého lze stanovit aktivitu pepsinu A ve směsi s pepsinem C. Byly připraveny tři afinitní sorbenty: jodovaná L-tyrosin- Sepharosa, 3,5-dijod-L-tyrosin-Sepharosa a N-acetyl-L-fenylalanin-Sepharosa. Připravené sorbenty byly charakterizovány pomocí modelového enzymu (prasečího pepsinu A). Při studiu interakce prasečího pepsinu A a jeho komplexu s pepstatinem A s připravenými sorbenty bylo prokázáno, že se aktivní místo enzymu nepodílí na jeho interakci s...
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.