|
|
Preparation of constructs for protein isolation and its testing
Osadchuk, Olha ; Kostovová, Iveta (referee) ; Brázda, Václav (advisor)
This study is focused on describing of recombinant protein production. Protein p53 was chosen, as one of the most important tumor suppressor proteins, for studying this issue. The p53 protein is responsible for the gene regulation, control of cell cycle and DNA replication. P53 is the most mutated gene in human cancer. Several point mutations of p53 protein was chosen for work with. The theoretical part describes main properties of protein, expression systems, Gateway cloning system and methods of protein purification. In the experimental part are described the procedures of preparing of the expression vectors by Gateway technology, cell transformation and DNA plasmid isolation. Using cloning technology were prepared three expression clones, they were transformed into competent cells and after was done DNA isolation.
|
|
|
Optimization of p53 mutant protein isolation and its DNA binding properties
Osadchuk, Olha ; Zemanová, Jana (referee) ; Brázda, Václav (advisor)
Protein p53 je jednou z nejdůležitějších molekul v lidském těle. P53 reguluje celou řadu procesů v buňce, jako je například oprava DNA, buněčný cyklus nebo indukce apoptózy. Protein p53 je známý i jako „strážce genomu“. DNA vazebné schopnosti proteinu p53 jsou důležité pro normální vývoj a růst buňky. Mutace genu pro p53 mohou vést ke ztrátě jeho DNA vazebných vlastností a funkce nádorového supresoru, což muže způsobit rozvoj rakoviny. Teoretická část této diplomové práce je zaměřena na popis vlastností, funkce a mechanismus aktivace proteinu p53 a popis lokálních sekundárních struktur DNA. Hlavním cílem experimentální části byla produkce čtyř mutantních forem proteinů p53 a wild-type p53 proteinu a studium jejich vazebných vlastnosti s různými lokálními sekundárními strukturami DNA. Pomoci Gateway klonovacího systému byly připraveny čtyři expresní vektory, které byly použity pro produkci proteinů v bakteriálním expresním systému. Celkem byly úspěšně připraveny čtyři mutantní formy a wild-type p53 protein. Jejich vazebné vlastnosti byly studovány gelovou retardační analýzu. Výsledky naznačují různé DNA-vazebné vlastnosti wild-type p53 a studovaných mutantních forem tohoto proteinu. Všechny mutantní proteiny ztratily schopnost sekvenčně specificky vázat DNA, zatímco nespecifická interakce s DNA byla pozorována u tří ze čtyř mutantních forem. Jeden ze studovaných mutantních proteinů se vázal jenom na superhelikální formu DNA.
|
|
|
Optimization of p53 mutant protein isolation and its DNA binding properties
Osadchuk, Olha ; Zemanová, Jana (referee) ; Brázda, Václav (advisor)
Protein p53 je jednou z nejdůležitějších molekul v lidském těle. P53 reguluje celou řadu procesů v buňce, jako je například oprava DNA, buněčný cyklus nebo indukce apoptózy. Protein p53 je známý i jako „strážce genomu“. DNA vazebné schopnosti proteinu p53 jsou důležité pro normální vývoj a růst buňky. Mutace genu pro p53 mohou vést ke ztrátě jeho DNA vazebných vlastností a funkce nádorového supresoru, což muže způsobit rozvoj rakoviny. Teoretická část této diplomové práce je zaměřena na popis vlastností, funkce a mechanismus aktivace proteinu p53 a popis lokálních sekundárních struktur DNA. Hlavním cílem experimentální části byla produkce čtyř mutantních forem proteinů p53 a wild-type p53 proteinu a studium jejich vazebných vlastnosti s různými lokálními sekundárními strukturami DNA. Pomoci Gateway klonovacího systému byly připraveny čtyři expresní vektory, které byly použity pro produkci proteinů v bakteriálním expresním systému. Celkem byly úspěšně připraveny čtyři mutantní formy a wild-type p53 protein. Jejich vazebné vlastnosti byly studovány gelovou retardační analýzu. Výsledky naznačují různé DNA-vazebné vlastnosti wild-type p53 a studovaných mutantních forem tohoto proteinu. Všechny mutantní proteiny ztratily schopnost sekvenčně specificky vázat DNA, zatímco nespecifická interakce s DNA byla pozorována u tří ze čtyř mutantních forem. Jeden ze studovaných mutantních proteinů se vázal jenom na superhelikální formu DNA.
|
|
|
Preparation of constructs for protein isolation and its testing
Osadchuk, Olha ; Kostovová, Iveta (referee) ; Brázda, Václav (advisor)
This study is focused on describing of recombinant protein production. Protein p53 was chosen, as one of the most important tumor suppressor proteins, for studying this issue. The p53 protein is responsible for the gene regulation, control of cell cycle and DNA replication. P53 is the most mutated gene in human cancer. Several point mutations of p53 protein was chosen for work with. The theoretical part describes main properties of protein, expression systems, Gateway cloning system and methods of protein purification. In the experimental part are described the procedures of preparing of the expression vectors by Gateway technology, cell transformation and DNA plasmid isolation. Using cloning technology were prepared three expression clones, they were transformed into competent cells and after was done DNA isolation.
|
guest ::
