|
|
Influence of a composition of hybridization mixtures on fluorescence intensity during the in-situ hybridization
Janíček, Tomáš ; Kejík, Lukáš (referee) ; Vojtěch,, Hudzieczek (advisor)
Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) je široce používaná metoda pro detekci určité sekvence DNA na chromozomech. Cílem práce je porovnání tří různých chemických sloučenin (formamidu, ethylenkarbonátu a sodných kationtů) používaných ve směsích pro in situ hybridizaci. Složení těchto směsí ovlivňuje renaturaci DNA a je důležité porovnat jejich fyzikální vlastnosti. Práce je rozdělena do dvou hlavních částí. První část se zabývá otázkou termodynamických parametrů používaných pro experimenty FISH, jako je teplota tání, entalpie přechodu DNA ze dvoušroubovice na vlákno nám dává přehled o energii potřebné k tomto přechodu a interakcích mezi bázemi a každou složkou směsi. Kromě toho hodnoty entropie určují poř uvnitř směsi - systém DNA. Druhá část porovnává intenzitu fluorescenčního signálu při optimalizovaných teplotách tání sondy použité pro in situ hybridizaci. Jako sonda byla použita sub-telomerní repetice X43.1, která je umístěna na Y chromozomu rostlinného modelového organismu Silene latifolia. Směs obsahující formamid má nejlepší výkon při delším postupu hybridizace, zatímco ethylenkarbonát poskytuje vyšší intenzitu signálu, a proto je vhodnější pro rychlé FISH protokoly.
|
|
|
Influence of a composition of hybridization mixtures on fluorescence intensity during the in-situ hybridization
Janíček, Tomáš ; Kejík, Lukáš (referee) ; Vojtěch,, Hudzieczek (advisor)
Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) je široce používaná metoda pro detekci určité sekvence DNA na chromozomech. Cílem práce je porovnání tří různých chemických sloučenin (formamidu, ethylenkarbonátu a sodných kationtů) používaných ve směsích pro in situ hybridizaci. Složení těchto směsí ovlivňuje renaturaci DNA a je důležité porovnat jejich fyzikální vlastnosti. Práce je rozdělena do dvou hlavních částí. První část se zabývá otázkou termodynamických parametrů používaných pro experimenty FISH, jako je teplota tání, entalpie přechodu DNA ze dvoušroubovice na vlákno nám dává přehled o energii potřebné k tomto přechodu a interakcích mezi bázemi a každou složkou směsi. Kromě toho hodnoty entropie určují poř uvnitř směsi - systém DNA. Druhá část porovnává intenzitu fluorescenčního signálu při optimalizovaných teplotách tání sondy použité pro in situ hybridizaci. Jako sonda byla použita sub-telomerní repetice X43.1, která je umístěna na Y chromozomu rostlinného modelového organismu Silene latifolia. Směs obsahující formamid má nejlepší výkon při delším postupu hybridizace, zatímco ethylenkarbonát poskytuje vyšší intenzitu signálu, a proto je vhodnější pro rychlé FISH protokoly.
|
|
|
Structure and evolution of plant sex chromosomes: The use of BAC library
Kejnovský, Eduard ; Lengerová, Martina ; Hobza, Roman ; Široký, Jiří ; Vyskot, Boris
Sex chromosomes of plant species Silene latifolia are the ideal model for evolutionary biology studies because they represent early stages of X and Y chromosomes history. We used fluorescence in situ hybridization (FISH) with bacterial artificial chromosome (BAC) clones in studies of chromosome structure to demonstrate that a majority of genes are located in subtelomeric regions of all chromosomes. Our results also indicate the absence of accumulation of main classes of repetitive sequences - retroelements and centromeric tandem repeats - in non-recombining parts of the sex chromosomes.
|
|
|
Genetic and epigenetic acpects of sex determination
Janoušek, Bohuslav ; Hodurková, Jaromíra ; Žlůvová, Jitka ; Lengerová, Martina ; Hobza, Roman ; Nix, Tomáš ; Vyskot, Boris
The article concentrates on the latest knowledge concerning the role of epigenetic mechanisms in sex determination in model dioecious species Silene latifolia. Results suggest that the locus suppressing development of female organs in male plants is hypersensitive to the action of agents influencing level of DNA methylation (5-azacytidine) and histone acetylation (trichostatin A). According to the results obtained via inter-specific hybridisation and the ability of the smut Ustilago violacea to activate development of male organs in female plants, it can be deduced that there is a locus suppressing male organ development in standard female plants. Function of this locus is not influenced by the drugs mentioned above.
|
guest ::
