|
|
Directed evolution of enzymes on microfluidic chip
Kohúteková, Táňa ; Chmelíková, Larisa (referee) ; Prokop,, Zbyněk (advisor)
Tato práce se zaměřuje na řízenou evoluci enzymů pomocí fluorescenčně řízeného kapénkového třídení (ang. zkratka FADS) na mikrofluidním čipu. Byl sestaven nový třídicí systém, který byl validován pro vysoce výkonnou optickou detekci mikrofluidních kapének spojenou s dielektrickým tříděním. Systém byl testován pomocí dvou různých (DhaA31, ancHLD-RLuc) populací haloalkan dehalogenas (HLD) exprimovaných v buňkách Escherichia coli a jedné populace prázdného vektoru pIDR9 v poměru 5:45:50, což imituje proteinovou knihovnu. Naměřená a analyzovaná data z experimentu ukazují, že intenzity kapek ve validačním experimentu byly zaznamenány v stejném poměru jako teoretický poměr. Poté byla knihovna HLD mutantů s inzercemi a delecemi tříděna pomocí FADS, za účelem získaní 1 % nejaktivnějších variant. Program pro analýzu dat pro FADS byl programován v prostředí LabVIEW s využítím jazyka Python, s funkcemi pro počáteční analýzu, predikci prahového napětí, validaci a grafickou interpretaci dat a konečnou zprávu o experimentu.
|
guest ::
