|
|
Dimerization of Streptococcus pneumoniae eukaryotic-type SerThr protein kinase and characterization of its substrate, phosphoglucosamine mutase GlmM
Pallová, Petra
7 1 Úvod Bakteriální buňka v přirozeném prostředí musí čelit náhlým změnám koncentrace živin, pH, teploty, osmolarity a vlhkosti. Bakterie vyvinuly během evoluce řadu mechanizmů, které jim umožňují tyto změny prostředí monitorovat a reagovat na ně. Proteiny, které jsou jednou z hlavních složek buňky, plní jednak funkci stavební, jednak funkci katalytickou. Účastní se katalýzy chemických reakcí, ale také přenosu signálu v buňce. Jedním z nejdůležitějších mechanizmů přenosu signálu je fosforylace proteinů prostřednictvím enzymů proteinkinas. Současné studie a analýzy bakteriálních genomů prokázaly přítomnost Ser/Thr a Tyr proteinkinas eukaryotního typu u celé řady prokaryotních organizmů. Především se uplatňují v procesech spojených s regulací růstu, odpovědí na stresové podmínky a v patogenezi, což je jen potvrzením univerzálnosti tohoto mechanizmu. Identifikace proteinů, které jsou signalizací Ser/Thr a Tyr proteinkinas ovlivňovány, a které jsou přímo substrátem daného signalizačního proteinu, skýtá možnost tyto signalizační dráhy blokovat a danou bakterii tak oslabit. Přestože Ser/Thr proteinkinasy jsou mezi bakteriemi široce rozšířené, dostupných informací o jejich substrátech je stále málo. Předkládaná dizertační práce se zabývá studiem Ser/Thr proteinkinasy eukaryotního typu patogenní bakterie...
|
|
|
Dimerization of Streptococcus pneumoniae eukaryotic-type SerThr protein kinase and characterization of its substrate, phosphoglucosamine mutase GlmM
Pallová, Petra
7 1 Úvod Bakteriální buňka v přirozeném prostředí musí čelit náhlým změnám koncentrace živin, pH, teploty, osmolarity a vlhkosti. Bakterie vyvinuly během evoluce řadu mechanizmů, které jim umožňují tyto změny prostředí monitorovat a reagovat na ně. Proteiny, které jsou jednou z hlavních složek buňky, plní jednak funkci stavební, jednak funkci katalytickou. Účastní se katalýzy chemických reakcí, ale také přenosu signálu v buňce. Jedním z nejdůležitějších mechanizmů přenosu signálu je fosforylace proteinů prostřednictvím enzymů proteinkinas. Současné studie a analýzy bakteriálních genomů prokázaly přítomnost Ser/Thr a Tyr proteinkinas eukaryotního typu u celé řady prokaryotních organizmů. Především se uplatňují v procesech spojených s regulací růstu, odpovědí na stresové podmínky a v patogenezi, což je jen potvrzením univerzálnosti tohoto mechanizmu. Identifikace proteinů, které jsou signalizací Ser/Thr a Tyr proteinkinas ovlivňovány, a které jsou přímo substrátem daného signalizačního proteinu, skýtá možnost tyto signalizační dráhy blokovat a danou bakterii tak oslabit. Přestože Ser/Thr proteinkinasy jsou mezi bakteriemi široce rozšířené, dostupných informací o jejich substrátech je stále málo. Předkládaná dizertační práce se zabývá studiem Ser/Thr proteinkinasy eukaryotního typu patogenní bakterie...
|
|
|
Dimerization of Streptococcus pneumoniae eukaryotic-type SerThr protein kinase and characterization of its substrate, phosphoglucosamine mutase GlmM
Pallová, Petra ; Branny, Pavel (advisor) ; Janata, Jiří (referee) ; Španová, Alena (referee)
104 7 Závěr 7.1 Proteinkinasa StkP Připravili jsme kmen S. pneumoniae KDTM-his, který ve svém genomu kóduje epitopem značenou kinázovou doménu proteinkinasy StkP ukotvenou do membrány pomocí transmembránové domény. Imunologickou detekcí s monoklonální protilátkou proti histidinové kotvě jsme potvrdili lokalizaci proteinu v membránové frakci S. pneumoniae. V in vitro kinázových reakcích jsme prokázali, že se jedná o plně funkční protein s autofosforylační aktivitou. Pomocí in vivo reportérového systému jsme zjistili, že transmembránová doména a extracelulární doména proteinkinasy StkP tvoří stabilní dimery. Dimerizace proteinkinasy StkP byla následně potvrzena pomocí nativní elektroforézy. Je tedy velmi pravděpodobné, že proteinkinasa StkP se in vivo vyskytuje ve formě dimeru a dimerizace je nutným předpokladem její autofosforylační aktivity. Na základě těchto výsledků jsme vyslovili hypotézu, že protein kódující kinázovou doménu postrádající transmembránovou doménu není funkční, neboť není schopen dimerizace a podléhá degradaci. 7.2 Fosfoglukosaminmutasa GlmM V in vitro kinázové reakci na bezbuněčných lyzátech S. pneumoniae Cp1015, ∆stkP a ∆phpP-stkP v přítomnosti rekombinantní proteinkinasy StkP jsme prokázali fosforylaci proteinu o molekulové hmotnosti odpovídající fosfoglukosaminmutase GlmM....
|
|
| |
guest ::
RSS feed.