|
|
Detekce opioidních receptorů v membránových frakcích mozku. Vazebné studie se specifickými radioligandy.
Višněvská, Kateřina ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Wilhelm, Jiří (oponent)
Morfin je významný opioid využívaný v medicíně jako silné analgetikum. Při léčbě chronické bolesti se však při opakovaném podávání rozvíjí tolerance a fyzická závislost. Morfin se váže na všechny tři základní typy opioidních receptorů: μ-OR, δ-OR a κ-OR. Primární a dominantní význam pro vznik drogové závislosti mají receptory μ-OR. Cílem výzkumu farmaceutických firem je proto najít látku s povahou silného agonisty μ-OR, která bude vykazovat stejný analgetický účinek jako morfin, ale nebude vyvolávat drastickou závislost na této droze při dlouhodobém užívání. V této práci jsme se zaměřili především na studium vazby agonisty DAMGO na μ- opioidní receptory. Tyto receptory jsou primárně zodpovědné za fyziologický účinek morfinu i vznik závislosti na droze. Studium vazby radioaktivně značeného agonisty [3 H]DAMGO bylo provedeno ve frakcích získaných při izolaci plasmatických membrán (PM) z cerebrálního kortexu potkana. Izolace PM byla provedena na hustotním gradientu Percollu. Plasmatické membrány byly připraveny z kontrolních potkanů a potkanů, kterým byly po dobu 10 dnů podávány stoupající dávky morfinu, 10-50 mg/ kg. V izolovaných plasmatických membránách se stanovil počet specifických vazebných míst a afinita vazby [3 H]DAMGO v inkubačním médiu bez iontů. Zjistili jsme, že PM izolované z mozku...
|
|
|
Assay of fluorescent products in erytrocytes of patients with Alzheimer' s disease
Kohutiar, Matej ; Wilhelm, Jiří (vedoucí práce)
Voľné radikály sú vysoko reaktívne častice s nespárovaným elektrónom v orbitale. Medzi biologicky významné molekuly radikálovej povahy patria reaktívne zlúčeniny kyslíka a dusíka. Pre zachovanie homeostázy je dôležité, aby koncentrácia voľných radikálov bola udržovaná na hladine pre bunky netoxickej. Reaktívne častice majú schopnosť napadnúť celú radu biomolekúl. Produkty radikálového poškodenia sa hromadia v bunkách intra i extracelulárne a vedú k tvorbe pigmentov podobných lipofuscínu. Lipofuscinoidné pigmenty obsahujú fluorofory a sú preto vhodné pre fluorescenčnú analýzu. Alzheimerova choroba predstavuje v súčasnosti významný ekonomický a sociálny problém. Príčina Alzheimerovej demencie nie je známa. Histologickým korelátom Alzheimerovej choroby je nález senilných plakov zložených z amyloidu ?. ROS a RNS prenikajú hematoencefalickou bariérou do lumen mozgových kapilár a dostávajú sa do styku s erytrocytmi. Radikálové napadnutie krviniek vedie k intracelulárnemu zvýšeniu koncentrácie produktov oxidačného stresu v cytosole. Pre analýzu fluorescenčných produktov bol použitý extrakt z červených krviniek pripravený od 30 pacientov a 8 zdravých kontrol. Vyhodnotenie emisných spektier zdravých kontrol ukázalo prítomnosť emisných maxím v oblasti 327-343nm. Patologické vzorky v oblasti nad 380nm vykazovali...
|
|
|
Tkáňový faktor u akutních koronárních syndromů
Malý, Martin ; Hampl, Václav (vedoucí práce) ; Wilhelm, Jiří (oponent) ; Vízek, Martin (oponent) ; Málek, Ivan (oponent)
Ateroskleróza a její komplikace jsou na prvním místě v příčinách úmrtí v průmyslově rozvinutých zemích. V České republice je stále více než 50% úmrtí spojeno s kardiovaskulárními chorobami, hlavně s akutním koronárním syndromem. Přitom ještě před 100 lety byly kardiovaskulární choroby dle statistik příčinou přibližně 10% úmrtí. Tento strmý nárůst je dáván do spojitosti s výrazně vyšším výskytem rizikových faktorů akcelerované aterosklerózy - hypertenzí, hyperlipoproteinémií, kouřením, obezitou a diabetem. Tento trend se u nás zastavil na konci osmdesátých let a od té doby má klesající tendenci. Je to dáno úspěšnou primární i sekundární prevencí: důslednou léčbou hypertenze, změnou stravovacích návyků, která vedla k poklesu průměrné hladiny cholesterolu na 5.88 mmol.l-1 a poklesem počtu kuřáků . Nedaří se však ovlivnit procento obezity (průměrný body mass index u mužů 28.1) a s ní spojené inzulinové rezistence (Bruthans 2000, Cífková et al. 2002). Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
| |
|
|
Studium fluorescenčních produktů v mitochondriích po napadení volnými radikály
Ivica, Joško ; Wilhelm, Jiří (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Drahota, Zdeněk (oponent)
Lipofuscinoidní pigmenty (LFP) jsou produkty reakcí, ve kterých volné radikály napadají molekuly s nukleofilními skupinami. LFP vznikají např. v reakcích mezi produkty rozkládaní peroxidů lipidů, což jsou hlavně reaktivní aldehydy, a sloučeninami obsahujícími aminoskupiny (fosfolipidy, peptidy). LFP lze snadno měřit díky jejich vnitřní fluorescenci. Tyto produkty jsou poměrně stabilní, a proto byly úspěšně využívány jako robustní markery oxidačního poškození. Provedli jsme metabolomické studie, přičemž LFP byly nejprve analyzovány fluorimetricky pomocí trojrozměrných a diferenciálních fluorescenčních spekter. Potom jsme LFP analyzovali pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s cílem rozdělit směs látek na jednotlivé frakce. LFP jsme získali z izolovaných mitochondrií vystavených in vitrooxidačnímu stresu zahájenému různými spouštěči. LFP byly rovněž analyzovány v potkaních mozcích během časného rozvoje, což je doprovázeno přechodným zvýšením koncentrace kyslíku, a v erytrocytech z pacientů s Alzheimerovou chorobou. Vyvinuli jsme HPLC metodu pro kvalitativní analýzu LFP odlišného původu. Tato analýza objevila, že se LFP opravdu skládají z mnoha chromatograficky odlišných látek. Tímto způsobem jsme potvrdili jsoucnost velkého počtu jednotlivých fluorescenčních látek, jež se účastní patofyziologie...
|
|
|
Detekce opioidních receptorů v membránových frakcích mozku. Vazebné studie se specifickými radioligandy.
Višněvská, Kateřina ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Wilhelm, Jiří (oponent)
Morfin je významný opioid využívaný v medicíně jako silné analgetikum. Při léčbě chronické bolesti se však při opakovaném podávání rozvíjí tolerance a fyzická závislost. Morfin se váže na všechny tři základní typy opioidních receptorů: μ-OR, δ-OR a κ-OR. Primární a dominantní význam pro vznik drogové závislosti mají receptory μ-OR. Cílem výzkumu farmaceutických firem je proto najít látku s povahou silného agonisty μ-OR, která bude vykazovat stejný analgetický účinek jako morfin, ale nebude vyvolávat drastickou závislost na této droze při dlouhodobém užívání. V této práci jsme se zaměřili především na studium vazby agonisty DAMGO na μ- opioidní receptory. Tyto receptory jsou primárně zodpovědné za fyziologický účinek morfinu i vznik závislosti na droze. Studium vazby radioaktivně značeného agonisty [3 H]DAMGO bylo provedeno ve frakcích získaných při izolaci plasmatických membrán (PM) z cerebrálního kortexu potkana. Izolace PM byla provedena na hustotním gradientu Percollu. Plasmatické membrány byly připraveny z kontrolních potkanů a potkanů, kterým byly po dobu 10 dnů podávány stoupající dávky morfinu, 10-50 mg/ kg. V izolovaných plasmatických membránách se stanovil počet specifických vazebných míst a afinita vazby [3 H]DAMGO v inkubačním médiu bez iontů. Zjistili jsme, že PM izolované z mozku...
|
|
|
Úloha metabolitů kyseliny arachidonové cestou cytochromu P-450 v patogenezi hypertenze
Čertíková-Chábová, Věra ; Tesař, Vladimír (vedoucí práce) ; Wilhelm, Jiří (oponent) ; Štípek, Stanislav (oponent)
Výše krevního tlaku (TK) je jednou z důležitých součástí homeostázy. Proto jsou k její regulaci v organismu vyvinuty mnohočetné mechanismy, které zajišťují optimální úroveň za nejrůznějších okolností. Zásadní roli zde hraje renin-angiotenzinový systém (RAS), který se podílí na regulaci renálních funkcí a objemu extracelulární tekutiny. Některé z těchto účinků jsou zprostředkovány metabolity kyseliny arachidonové pomocí cytochromu P-450 (CYP), zejména kyselinou 20-hydroxy- eikosatetraenovou (20-HETE) a epoxyeikosatrienovými kyselinami (EETs). V poslední době bylo zjištěno, že angiotenzin II (ANG II) stimuluje tvorbu 20-HETE v renálních cévách a že zvýšená prosukce 20-HETE v periferním cévním systémupřispívá k akutní vazokonstrikční odpovědi na ANG II. V experimentu inhibice 20-HETE zmírňuje rozvoj hypertenze podmíněné ANG II. 20-HETE hraje důležitou roli v ovlivňování senzitivity tubuloglomerulární zpětné vazby a autoregulaci renální hemodynamiky. CYP umožňuje také vznik EETs, které zejména svým vazodilatačním a natriuretickým působením naopak antagonizují některé účinky 20-HETE. Eikosanoidy vzniklé pomocí CYP tedy pravděpodobně výrazně přispívají k ANG II dependentním formám hypertenze. Potkan transgenní pro myší gen Ren-2 [TGR, jméno kmene TGR(mRen2)27] představuje jedinečný ANG II dependentní model...
|
|
|
Tkáňový faktor u akutních koronárních syndromů
Malý, Martin ; Hampl, Václav (vedoucí práce) ; Wilhelm, Jiří (oponent) ; Vízek, Martin (oponent) ; Málek, Ivan (oponent)
Ateroskleróza a její komplikace jsou na prvním místě v příčinách úmrtí v průmyslově rozvinutých zemích. V České republice je stále více než 50% úmrtí spojeno s kardiovaskulárními chorobami, hlavně s akutním koronárním syndromem. Přitom ještě před 100 lety byly kardiovaskulární choroby dle statistik příčinou přibližně 10% úmrtí. Tento strmý nárůst je dáván do spojitosti s výrazně vyšším výskytem rizikových faktorů akcelerované aterosklerózy - hypertenzí, hyperlipoproteinémií, kouřením, obezitou a diabetem. Tento trend se u nás zastavil na konci osmdesátých let a od té doby má klesající tendenci. Je to dáno úspěšnou primární i sekundární prevencí: důslednou léčbou hypertenze, změnou stravovacích návyků, která vedla k poklesu průměrné hladiny cholesterolu na 5.88 mmol.l-1 a poklesem počtu kuřáků . Nedaří se však ovlivnit procento obezity (průměrný body mass index u mužů 28.1) a s ní spojené inzulinové rezistence (Bruthans 2000, Cífková et al. 2002). Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
| |
|
|
Vliv volných radikálů na stárnutí
Lukšanová, Hana ; Wilhelm, Jiří (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Macháčková, Ivana (oponent)
Cílem této studie bylo ověřit platnost Harmanovy teorie stárnutí, založené na působen í volných ra dikálů, na nových modelech stárnutí rostlin a kvasinek, jelikož tyto organizmy byly nedávno přijaty mezinárodní komunitou jako uznávané modely pro studium mechanizmu stárnutí na molekulární úrovni. Vzhledem k tomu, že v Harmanově teorii stárnutí má centrální význam endogenní produkce volných radikálů, zaměřila jsem se ve své studii na sledování časového průbě hu vzniku jejich koncových produktů . Paralelně jsem sledovala změny antioxid a ční ch systémů, které rozhodují o rozsahu poškození vyvolaném volnými radikály. V poslední době se ukazuje, že procesů stárnutí se účastní i reaktivní slo u čen iny dusíku, a proto jsem zaměři l a pozornost i na mechanizmy zahrnující účast těchto sloučenin. Jako modelové organizmy jsem použila fazol (Phaseo/us vu/garis L.), trasgenní rostliny tabáku (Nicotiana tabacum L. ) s pozměněnou koncentrací cytokininů, husen íček rolní (Arabidopsis tha/iana) a kvasinky (Saccharomyces cerevisiae). Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
host ::
RSS.