|
|
Targeting of viral nanoparticles to cancer specific receptors
Žáčková Suchanová, Jiřina ; Španielová, Hana (vedoucí práce) ; Němečková, Šárka (oponent) ; Ulbrich, Pavel (oponent)
Úkolem této práce bylo prozkoumat potenciál umělých virových částic (virus-like particles, VLPs) odvozených od myšího polyomaviru (MPyV) jako možných nanonosičů pro řízenou dopravu terapeutických a diagnostických látek do specifických buněk či tkání. Vybrali jsme VLPs myšího polyomaviru, protože neobsahují virovou DNA a jsou považovány za bezpečné pro využití v bioaplikacích. Při našem výzkumu jsme použili přístup chemické modifikace pro přesměrování VLPs z jejich přirozeného receptoru na nádorové buňky. Lysinové zbytky exponované na povrchu částice byly modifikovány aldehydickým činidlem pro následnou konjugaci vybraných molekul, transferinu a inhibitoru glutamát karboxypeptidázy II (GCPII), na povrch částice. Transferin, transportér iontů železa do metabolicky aktivních buněk, pomohl k přesměrování VLPs do různých druhů nádorových buněk nadměrně produkujících transferinový receptor. Na druhou stranu, GCPII slouží jako transmembránový antigen specificky se vyskytující na buňkách nádoru prostaty a připojení malé molekuly inhibitoru k VLPs vedlo k úspěšnému rozpoznání těchto buněk. Použili jsme metodu elektronové mikroskopie k vizualizaci obou typů modifikovaných VLPs a metody průtokové cytometrie a konfokální mikroskopie pro studium specifických buněčných interakcí a internalizace nanočástic. Dále...
|
|
|
Strukturní studie mutantu S6A matrixového proteinu Mason-Pfizerova opičího viru
Kamal, Rašíd ; Hrabal, Richard (vedoucí práce) ; Ulbrich, Pavel (oponent)
Mason-Pfizerův opičí virus (M-PMV) patří k retrovirům morfogenetického typu D, které sestavují virové částice v cytoplazmě. Tím je tento proces časově a prostorově oddělen od pučení na cytoplazmatické membráně, a proto M-PMV představuje vhodný modelový organismus pro studium životního cyklu retrovirů. Matrixový protein, který je N-terminální částí polyproteinového retrovirového prekurzoru Gag, hraje v tomto životním cyklu ústřední úlohu. Jednou z oblastí, která je pro jeho funkce klíčová, je jeho myristoylovaný N-konec, důležitý zejména pro vazbu na cytoplazmatickou membránu při pučení z hostitelské buňky. Mezi serinem 6 a glutamátem 9 divokého typu tohoto proteinu je vodíková vazba, jejíž vliv na strukturu a molekulární mechaniku této oblasti jsme studovali narušením zmíněné interakce výměnou serinu 6 za alanin. Tato práce popisuje přípravu rekombinantního, mutantního matrixového proteinu M-PMV, přiřazení rezonancí atomů jeho páteře nukleární magnetickou rezonanční spektroskopií a zjištěnou sekundární strukturu porovnává s dalšími mutanty a divokým typem.
|
|
|
NMR struktura N-terminální domény kapsidového proteinu Mason-Pfizerova opičího viru nesoucí mutaci narušující skládání kapsidy.
Obr, Martin ; Rumlová, Michaela (vedoucí práce) ; Ulbrich, Pavel (oponent)
Během procesu zrání retrovirových částic je polyproteinový prekurzor Gag rozštěpen virovou proteasou na jednotlivé funkční komponenty - matrixový protein (MA), kapsidový protein (CA) a nukleokapsidový protein (NC). Kapsidový protein se skládá ze dvou domén N-terminální (NTD) a C-terminální (CTD) a vytváří multimerní proteinovou síť. Konformační změna po uvolnění CA umožňuje rozpustit nezralou síť a vytvořit zralou virovou kapsidu. Trojrozměrná struktura CA NTD M-PMV obsahuje 6 -helixů a N-terminální -smyčku. -smyčka se vytváří po uvolnění N-konce CA z prekurzoru interakcí mezi Pro1 a Asp57 a dalším nespecifikovaným rozhraním mezi Arg14 a helixem 5. Tvorba -smyčky je nezbytným předpokladem pro vznik zralé sítě CA. Tato diplomová práce analyzuje vliv bodových mutací D111N (helix 5) a R14K (-smyčka) na strukturu CANTD pomocí NMR spektroskopie.V případě obou mutací nebyl pozorován vliv na celkové sbalení proteinu. Porovnáním NOE kontaktů CANTD D111N s divokým typem byla prokázána strukturní identita těchto proteinů. CANTD R14K se od divokého typu odlišoval výraznějším způsobem, především v oblastech -smyčky a helixu 5. Výsledky této strukturní studie potvrzují existenci stabilizačního rozhraní mezi -smyčkou a helixem 5, s Arg14 jako klíčovým prvkem této stabilizace. Kontakt mezi Arg14 a Asp111 byl vyloučen a...
|
|
|
Targeting of viral nanoparticles to cancer specific receptors
Žáčková Suchanová, Jiřina ; Španielová, Hana (vedoucí práce) ; Němečková, Šárka (oponent) ; Ulbrich, Pavel (oponent)
Úkolem této práce bylo prozkoumat potenciál umělých virových částic (virus-like particles, VLPs) odvozených od myšího polyomaviru (MPyV) jako možných nanonosičů pro řízenou dopravu terapeutických a diagnostických látek do specifických buněk či tkání. Vybrali jsme VLPs myšího polyomaviru, protože neobsahují virovou DNA a jsou považovány za bezpečné pro využití v bioaplikacích. Při našem výzkumu jsme použili přístup chemické modifikace pro přesměrování VLPs z jejich přirozeného receptoru na nádorové buňky. Lysinové zbytky exponované na povrchu částice byly modifikovány aldehydickým činidlem pro následnou konjugaci vybraných molekul, transferinu a inhibitoru glutamát karboxypeptidázy II (GCPII), na povrch částice. Transferin, transportér iontů železa do metabolicky aktivních buněk, pomohl k přesměrování VLPs do různých druhů nádorových buněk nadměrně produkujících transferinový receptor. Na druhou stranu, GCPII slouží jako transmembránový antigen specificky se vyskytující na buňkách nádoru prostaty a připojení malé molekuly inhibitoru k VLPs vedlo k úspěšnému rozpoznání těchto buněk. Použili jsme metodu elektronové mikroskopie k vizualizaci obou typů modifikovaných VLPs a metody průtokové cytometrie a konfokální mikroskopie pro studium specifických buněčných interakcí a internalizace nanočástic. Dále...
|
|
| |
|
|
NMR struktura N-terminální domény kapsidového proteinu Mason-Pfizerova opičího viru nesoucí mutaci narušující skládání kapsidy.
Obr, Martin ; Rumlová, Michaela (vedoucí práce) ; Ulbrich, Pavel (oponent)
Během procesu zrání retrovirových částic je polyproteinový prekurzor Gag rozštěpen virovou proteasou na jednotlivé funkční komponenty - matrixový protein (MA), kapsidový protein (CA) a nukleokapsidový protein (NC). Kapsidový protein se skládá ze dvou domén N-terminální (NTD) a C-terminální (CTD) a vytváří multimerní proteinovou síť. Konformační změna po uvolnění CA umožňuje rozpustit nezralou síť a vytvořit zralou virovou kapsidu. Trojrozměrná struktura CA NTD M-PMV obsahuje 6 -helixů a N-terminální -smyčku. -smyčka se vytváří po uvolnění N-konce CA z prekurzoru interakcí mezi Pro1 a Asp57 a dalším nespecifikovaným rozhraním mezi Arg14 a helixem 5. Tvorba -smyčky je nezbytným předpokladem pro vznik zralé sítě CA. Tato diplomová práce analyzuje vliv bodových mutací D111N (helix 5) a R14K (-smyčka) na strukturu CANTD pomocí NMR spektroskopie.V případě obou mutací nebyl pozorován vliv na celkové sbalení proteinu. Porovnáním NOE kontaktů CANTD D111N s divokým typem byla prokázána strukturní identita těchto proteinů. CANTD R14K se od divokého typu odlišoval výraznějším způsobem, především v oblastech -smyčky a helixu 5. Výsledky této strukturní studie potvrzují existenci stabilizačního rozhraní mezi -smyčkou a helixem 5, s Arg14 jako klíčovým prvkem této stabilizace. Kontakt mezi Arg14 a Asp111 byl vyloučen a...
|
|
|
Strukturní studie mutantu S6A matrixového proteinu Mason-Pfizerova opičího viru
Kamal, Rašíd ; Hrabal, Richard (vedoucí práce) ; Ulbrich, Pavel (oponent)
Mason-Pfizerův opičí virus (M-PMV) patří k retrovirům morfogenetického typu D, které sestavují virové částice v cytoplazmě. Tím je tento proces časově a prostorově oddělen od pučení na cytoplazmatické membráně, a proto M-PMV představuje vhodný modelový organismus pro studium životního cyklu retrovirů. Matrixový protein, který je N-terminální částí polyproteinového retrovirového prekurzoru Gag, hraje v tomto životním cyklu ústřední úlohu. Jednou z oblastí, která je pro jeho funkce klíčová, je jeho myristoylovaný N-konec, důležitý zejména pro vazbu na cytoplazmatickou membránu při pučení z hostitelské buňky. Mezi serinem 6 a glutamátem 9 divokého typu tohoto proteinu je vodíková vazba, jejíž vliv na strukturu a molekulární mechaniku této oblasti jsme studovali narušením zmíněné interakce výměnou serinu 6 za alanin. Tato práce popisuje přípravu rekombinantního, mutantního matrixového proteinu M-PMV, přiřazení rezonancí atomů jeho páteře nukleární magnetickou rezonanční spektroskopií a zjištěnou sekundární strukturu porovnává s dalšími mutanty a divokým typem.
|
host ::
RSS.