|
|
Structural studies of LEDGF/p75 interactions
Těšina, Petr ; Maloy Řezáčová, Pavlína (vedoucí práce) ; Obšil, Tomáš (oponent) ; Spiwok, Vojtěch (oponent)
4 ABSTRAKT Protein LEDGF/p75 je lidský transkripční koaktivátor, který je asociován s epigenetickými modifikacemi transkripčně aktivního chromatinu. Je také nezbytný v procesu integrace HIV do genomu hostitelské buňky a v leukemogenezi způsobené fúzními produkty genu kódujícího protein MLL1. Interakce proteinu LEDGF/p75 s HIV integrázou a komplexem MLL1-menin jsou považovány za potenciální cíl terapeutického zásahu. Interakce proteinu LEDGF/p75 s HIV integrázou i MLL1 jsou zprostředkovány tzv. integrázu vážící doménou (IBD - integrase binding domain). Zatímco patofyziologické interakce IBD LEDGF/p75 byly intenzivně studovány, těm fyziologickým byla věnována malá pozornost. Mimo HIV integrázy a MLL1 interaguje LEDGF/p75 skrze IBD také s proteiny JPO2, PogZ, ASK a MLL2. Jelikož se interakce IBD s HIV integrázou stala cílem pro vývoj inhibitorů, bylo nutné získat informace o ostatních interakcích této domény. Jen díky detailní charakterizaci všech interakcí IBD je možné zajistit specifické cílení vyvíjených inhibitorů. Proteinový komplex IBD-MLL1-menin byl již dříve strukturně charakterizován, ale pouze částečně. Pomocí NMR spektroskopie se nám podařilo zmapovat novou interakční oblast komplexu IBD-MLL1. Toto navazující interakční rozhraní je schopné zajistit interakci IBD s MLL1 i bez přítomnosti meninu,...
|
|
|
The role of signaling phospholipids in the regulation of plant polar growth
Pleskot, Roman ; Potocký, Martin (vedoucí práce) ; Testerink, Christa (oponent) ; Spiwok, Vojtěch (oponent)
Polární růst patří mezi jeden z nejdůležitějších procesů ve vývoji rostlin. Pylové láčky představují vynikající experimentální systém pro studium mechanismů polárního růstu. Tento typ růstu je kontrolován přesnou časo-prostorovou koordinací molekul jako jsou např. malé GTPasy, aktinový cytoskelet, protein kinasy nebo reaktivní formy kyslíku. V této práci jsme se zaměřili na studium role dvou signálních fosfolipidů, kyseliny fosfatidové (PA) a fosfatidylinositol 4,5-bisfosfátu (PIP2), v regulaci polárního růstu rostlin. Kombinací biochemických a molekulárně- biologických metod jsme popsali zapojení PA v regulaci aktinového cytoskeletu, jehož dynamika je nezbytná pro správný růst pylových láček. Nalezli jsme přímou interakci enzymu, který produkuje PA, fosfolipasy D (PLD)β1 s aktinem a ukázali jsme, že aktin ovlivňuje aktivitu tohoto enzymu. Pomocí molekulárně-dynamických simulací jsme popsali strukturní detaily inhibice aktin-čepičku-jícího proteinu PA a navrhli jsme model pozitivní zpětné vazby v regulaci aktinové dynamiky zprostředkované PA a PLDβ1. Abychom získali informace o lokalizaci PA, připravili jsme PA-vazebnou doménu proteinu Spo20p ve fúzi s YFP a tuto doménu jsme použili jako PA-biosensor. V pylových láčkách se PA lokalizuje do subapikální oblasti a částečně se překrývá se signálem pro...
|
host ::
RSS.