|
|
Intermediate filaments in mammalian cell motility
Čermáková, Kateřina ; Libusová, Lenka (vedoucí práce) ; Pelantová, Markéta (oponent)
Buněčná migrace hraje klíčovou roli ve formování a udržování mnohobuněčného savčího těla. Podílí se na tak zásadních jevech, jakými jsou embryonální vývoj, obnova tkání nebo imunitní odpověď. Jedná se o komplexní děj, zahrnující celou škálu procesů, včetně příslušné signalisace. Narušení těchto procesů se může manifestovat širokou škálou patologických stavů, od narušeného hojení ran až po nádorovou invasivitu, proto jsou děje provázející migraci cílem výzkumu mnoha týmů. Migrace buněk je závislá na cytoskeletu, který je v migrujících buňkách zásadně přestavován a neustále přizpůsobován pohybu. Tato práce si klade za cíl shrnout poznatky o úloze středních filament v migraci savčích buněk. Jedná se o nejméně probádaný cytoskeletární systém v tomto kontextu. Cytoplasmatická i jaderná střední filamenta, díky svým unikátním mechanoelastickým vlastnostem, významně ovlivňují mechaniku buňky. Poskytují jí fyzickou ochranu před silami, působícími při migraci skrze stísněné prostory komplexního mezibuněčného prostředí. Zároveň ovlivňují a usměrňují kontraktilitu aktomyosinové sítě, jež je hnacím motorem buněčného pohybu, a dále se podílí na zásadních krocích migrace, jakými jsou polarisace, přichycení buněk k okolním povrchům nebo navigace skrze spletité extracelulární prostředí.
|
|
|
Analysis of Src dynamics in cellular structures
Pelantová, Markéta ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Rozbeský, Daniel (oponent)
Src kináza je klíčovým elementem mnoha signálních drah, které ovlivňují buněčné procesy jako diferenciaci, proliferaci, motilitu či migraci. Deregulace její aktivity je spojena s rozvojem rakoviny. Pochopení její funkce v buňce je tedy zásadní. Aktivita Src kinázy přímo koreluje s její konformací; v aktivním stavu zaujímá otevřenou konformaci, ve stavu inaktivním je v uzavřené konformaci, stabilizované intramolekulárními interakcemi. Detekce konformace Src kinázy tak může být použita ke sledování její aktivity. V této práci byl vylepšen biosenzor, detekující změnu konformace Src kinázy a založený na metodě FRET, a to použitím mNeonGreenu jako nového akceptorového fluoroforu v již existujícím designu. Vlastnosti nového senzoru byly porovnány se senzorem původním. Nový senzor je schopen detekovat konformační změny Src kinázy a lze ho stabilně exprimovat v buňkách. Analýza aktivity Src kinázy ve fokálních adhezích potvrdila zvýšenou aktivitu Src v těchto strukturách. Ačkoli nový biosenzor v porovnání s původním nevykazuje vyšší citlivost ke konfromačním změnám Src, stále se jedná o validní a užitečný nástroj pro studium aktivity Src kinázy, který je díky vyššímu jasu mNeonGreenu vhodnější pro mikroskopické experimenty. Klíčová slova: Src, FRET, biosenzor, mikroskopie živých buněk, mNeonGreen
|
|
|
Genetically encoded biosensors of cellular tension and their use in cellular biology
Pelantová, Markéta ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Lánský, Zdeněk (oponent)
1 Abstrakt a klíčová slova Mechanické síly mají velký vliv na celý život buněk. Ovlivňují buněčnou proliferaci, migraci či diferenciaci a chyby v buněčném vnímání mechanických sil se ukazují být jednou z příčin různých chorob jako je např. hluchota, ateroskleróza či rakovina. Mechanismy, kterými buňky mechanické síly vnímají, jsou nicméně ještě velmi málo probádány a chybějí nástroje, kterými by je bylo možné zkoumat. Geneticky kódované tenzní biosenzory využívající pro detekci tenze FRET jsou jednou ze současně používaných metod pro studium přenosu mechanického signálu v buňce. Jedná se o neinvazivní metodu, jejíž pomocí je možné v živých buňkách sledovat změny v mechanickém napětí na různých proteinech. V tomto textu jsou představeny různé typy existujících geneticky kódovaných tenzních biosenzorů využívajících FRET, proces jejich vytváření a objevy díky nim získané. Klíčová slova: mechanická síla, mechanosenzitivita, FRET, tenzní senzor, příprava biosenzoru
|
host ::
RSS.