Národní úložiště šedé literatury Nalezeno 22 záznamů.  1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam: Hledání trvalo 0.00 vteřin. 
Stanovení distribuce farmakologicky aktivních látek a jejich biologická degradace v rámci procesů čištění odpadních vod
Palyzová, Andrea ; Kyslík, Pavel ; Marešová, Helena
Projekt je zaměřen na vývoj technologie degradace perzistujících farmakologicky aktivních látek (FAL) v odpadních vodách. Tyto látky jsou již z podstaty biologicky aktivní, vzhledem ke svým fyzikálně chemickým vlastnostem často obtížně degradovatelné, jejich spotřeba v humánní i veterinární medicíně je obtížně regulovatelná. Již samotným používáním se i nemetabolizovaná léčiva dostávají do životního prostředí. Nakládání koncových uživatelů s nespotřebovanými léčivy je prakticky nekontrolovatelné a stává se dalším důležitým zdrojem znečištění. Pro hlavní zdroje kontaminace prostředí FAL jsou společným uzlovým bodem odpadní vody. Bohužel v případě řady FAL nejsou současné systémy ČOV schopné ani záchytu natož degradace a jsou tedy prostřednictvím povrchových vod distribuovány zpět do prostředí. Vývoj technologie degradace perzistentních FAL na úrovni ČOV je cílem projektu. Její implementace významně sníží míru znečištění povrchových vod a zvýší tak udržitelnost využívání vodních zdrojů
Studium enantioselektivity a syntézy β-laktamových antibiotik katalyzované penicilin G acylasou: biokatalýza a in-silico experimenty
Grulich, Michal ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Kotík, Michal (oponent) ; Ettrich, Rüdiger (oponent)
10 Abstrakt Penicilin-G-acylasy (PGA) se řadí mezi enantioselektivní enzymy katalyzující hydrolýzu stabilní amidické vazby v rámci širokého spektra substrátů majících často velký aplikační potenciál. PGA z mikroorganismů Escherichia coli (PGAEc ) a Achromobacter sp. CCM4824 (PGAA ) byly použity pro katalýzu enantioselektivních hydrolýz sedmi vybraných N-fenylacetylovaných (N-PhAc) racemických směsí α/β-aminokyselin. Prokázali jsme, že PGAA vykazovala vyšší stereoselektivitu pro trojici (S)-enantiomerů: N- PhAc-β-homoleucin, N-PhAc-α-terc-leucin a N-PhAc-β-leucin. Dále byl zkonstruován homologní model PGAA , který byl použit pro molekulární modelování interakcí se stejnými substráty. In-silico experimenty zreprodukovaly experimentálně získaná data z enzymaticky katalyzovaných enantioselektivních hydrolýz, což potvrdilo věrohodnost připraveného homologního modelu. Stejný přístup jsme použili pro ověření enantiopreference PGAA vůči sedmi novým substrátům s aplikačním potenciálem, přičemž pro pětici z nich byla predikována vysoká enantioselektivita PGAA . PGAA byla dále použita v kineticky řízených syntézách β-laktamových antibiotik (SSBA). Enzym byl prokazatelně účinnější při syntéze ampicilinu a amoxicilinu (vyšší S/H poměr a akumulace produktu) oproti PGAEc . Analogicky k predikci enantioselektivity PGAA...
Heterologní exprese genu pro esterasu alfa-aminokyselin z kmene Achromobacter sp. CCM 4824 v Escherichia coli BL21(DE3).
Schneiderová, Michaela ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Lichá, Irena (oponent)
Na chromosomální DNA mikroorganismu Achromobacter sp. CCM 4824, který byl získaný v Laboratoři enzymových technologií, MBÚ AVČR, v.v.i., byl identifikován gen pro enzym hydrolyzující semi-syntetická β-laktamová antibiotika ampicilin a cephalexin s postranním řetězcem D-fenylglycinem. Enzym je zařazen mezi esterasy α-aminokyselin, které jsou zajímavé pro své potenciální využití při kineticky řízené syntéze těchto antibiotik. V několika aspektech mohou být esterasy α-aminokyselin lepší, než současně používané penicilinacylasy, a proto jsou tyto enzymy předmětem širokého zájmu. Chromosomálně nesený gen kódující esterasu α-aminokyselin byl klonován, charakterizován a heterologně exprimován ve zkonstruovaném, vysoce produkčním bakteriálním systému Escherichia coli BL21(DE3)JM5. Produkovaný enzym byl purifikován a byly stanoveny jeho vlastnosti, důležité z hlediska možného použití při výrobě semi-syntetických β-laktamových antibiotik. Klíčová slova: esterasa alfa-aminokyselin, Achromobacter sp., rekombinantní expresní systém, β-laktamová antibiotika
Integrated development of a bioprocess: From the soil enzyme to the yeast production platform
Borčinová, Martina ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Uhlík, Ondřej (oponent) ; Hasal, Pavel (oponent)
V zájmu udržitelné budoucnosti se stupňuje tlak na zvýšení podílu biotechnologií a biomateriálů na trhu. Mikrobiální biotechnologie mají potenciál a schopnost na mnoha úrovních podstatně přispět k tomuto celosvětovému úsilí o dosažení udržitelnosti. Vývoj a využití mikrobiálních technologií je však komplexní proces zahrnující řadu kroků, včetně objevování nových technologií a vývoje průmyslově realizovatelných výrobních systémů. V předložené práci byly řešeny jednotlivé kroky vývoje mikrobiální biotechnologie. V první části studie byla využita řada metodických přístupů ke studiu vlivu antropogenní aktivity (tj. desetiletí trvající produkce penicilinu G) na strukturu půdních mikrobiálních společenstev. Kultivovatelné i nekultivovatelné frakce těchto populací byly zároveň podrobeny funkčnímu screeningu za účelem odhalení biotechnologického potenciálu mikroorganismů ve smyslu produkce enzymů podílejících se na biotrasformaci beta-laktamových antibiotik: penicilin G acylázy (PGA) a esterázy alfa-aminokyselin (AEH). Naše výsledky ukázaly, že společenstva zasažených půd ukrývají mikrobiální komunitu se zvýšenou biodiverzitou a druhovou bohatostí. Na úrovni složení se však tyto komunity významně liší od kontrolních vzorků, co je důkazem zásadního dopadu průmyslové činnosti na tato společenstva. Následné...
Nová penicilin-G-acylasa z bakteriálního kmene Achromobacter sp.CCM 4824
Škrob, František ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Gabriel, Jiří (oponent) ; Králová, Blanka (oponent)
83 6. Závěr 1. Kultivací bakteriálního kmene Achromobacter sp. CCM 4824 v bioreaktoru byla získána biomasa s penicilinacylasovou aktivitou jako výchozí materiál pro purifikaci enzymu. Specifická aktivita biomasy měřená se substrátem penicilin G byla 19 U·g-1 sušiny. 2. Byla vyvinuta metoda purifikace nové PGA. Specifická aktivita purifikovaného enzymu byla kolem 30 U·mg-1 proteinu s celkovým výtěžkem kolem 10 % a stupněm přečištění kolem 300. 3. Bylo zjištěno, že purifikovaný enzym se skládá ze dvou nekovalentně spojených, nestejně velkých podjednotek α a β. Přesné molekulové hmotnosti obou podjednotek byly stanoveny pomocí hmotnostní spektrometrické analýzy: α = 27,02 kDa a β = 62,45 kDa. Molekulová hmotnost β-podjednotky přibližně odpovídá hmotnostem β- podjednotek známých PGA, naopak menší α-podjednotka svou molekulovou hmotností α-podjednotky známých PGA převyšuje přibližně o 3 kDa. 4. Pomocí nativní elektroforézy a izoelektrické fokusace bylo zjištěno, že purifikovaná PGA obsahovala dvě izoformy o izoelektrických bodech pI 8,0 a 8,2. Substrátová specifita obou izoforem byla stejná, proto byla směs izoforem považována za jeden enzym. 5. Nový enzym se od známých PGA odlišuje svojí substrátovou specifitou: hydrolyzuje téměř dvojnásobnou rychlostí semisyntetická β-laktamová antibiotika, která mají na...
Studium enantioselektivity a syntézy β-laktamových antibiotik katalyzované penicilin G acylasou: biokatalýza a in-silico experimenty
Grulich, Michal ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Kotík, Michal (oponent) ; Ettrich, Rüdiger (oponent)
10 Abstrakt Penicilin-G-acylasy (PGA) se řadí mezi enantioselektivní enzymy katalyzující hydrolýzu stabilní amidické vazby v rámci širokého spektra substrátů majících často velký aplikační potenciál. PGA z mikroorganismů Escherichia coli (PGAEc ) a Achromobacter sp. CCM4824 (PGAA ) byly použity pro katalýzu enantioselektivních hydrolýz sedmi vybraných N-fenylacetylovaných (N-PhAc) racemických směsí α/β-aminokyselin. Prokázali jsme, že PGAA vykazovala vyšší stereoselektivitu pro trojici (S)-enantiomerů: N- PhAc-β-homoleucin, N-PhAc-α-terc-leucin a N-PhAc-β-leucin. Dále byl zkonstruován homologní model PGAA , který byl použit pro molekulární modelování interakcí se stejnými substráty. In-silico experimenty zreprodukovaly experimentálně získaná data z enzymaticky katalyzovaných enantioselektivních hydrolýz, což potvrdilo věrohodnost připraveného homologního modelu. Stejný přístup jsme použili pro ověření enantiopreference PGAA vůči sedmi novým substrátům s aplikačním potenciálem, přičemž pro pětici z nich byla predikována vysoká enantioselektivita PGAA . PGAA byla dále použita v kineticky řízených syntézách β-laktamových antibiotik (SSBA). Enzym byl prokazatelně účinnější při syntéze ampicilinu a amoxicilinu (vyšší S/H poměr a akumulace produktu) oproti PGAEc . Analogicky k predikci enantioselektivity PGAA...
Heterologní exprese genu pro esterasu alfa-aminokyselin z kmene Achromobacter sp. CCM 4824 v Escherichia coli BL21(DE3).
Schneiderová, Michaela ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Lichá, Irena (oponent)
Na chromosomální DNA mikroorganismu Achromobacter sp. CCM 4824, který byl získaný v Laboratoři enzymových technologií, MBÚ AVČR, v.v.i., byl identifikován gen pro enzym hydrolyzující semi-syntetická β-laktamová antibiotika ampicilin a cephalexin s postranním řetězcem D-fenylglycinem. Enzym je zařazen mezi esterasy α-aminokyselin, které jsou zajímavé pro své potenciální využití při kineticky řízené syntéze těchto antibiotik. V několika aspektech mohou být esterasy α-aminokyselin lepší, než současně používané penicilinacylasy, a proto jsou tyto enzymy předmětem širokého zájmu. Chromosomálně nesený gen kódující esterasu α-aminokyselin byl klonován, charakterizován a heterologně exprimován ve zkonstruovaném, vysoce produkčním bakteriálním systému Escherichia coli BL21(DE3)JM5. Produkovaný enzym byl purifikován a byly stanoveny jeho vlastnosti, důležité z hlediska možného použití při výrobě semi-syntetických β-laktamových antibiotik. Klíčová slova: esterasa alfa-aminokyselin, Achromobacter sp., rekombinantní expresní systém, β-laktamová antibiotika
Bakteriální metabolismus morfinových alkaloidů
Zahradník, Jiří ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Lichá, Irena (oponent)
Alkaloidy morfinové řady a jejich deriváty jsou nenahraditelné farmaceuticky významné látky. Díky jejich obrovské produkci a spotřebě se z nich stávají významné polutanty, které jsou detekovány v povrchových vodách. Cílem této práce bylo charakterizovat vliv alkaloidů morfinové řady na fyziologii tří modelových organizmů: Agrobacterium sp. R89-1, Escherichia coli XL-1 (Blue), a Raoultella sp. kDF8, a objasnění mechanismů vedoucích k toxicitě meziproduktů jejich metabolizmu. Nejprve byl charakterizován biotransformační potenciál a utilizační schopnosti studovaných mikroorganizmů. Bylo prokázáno, že mikroorganizmus Agrobacterium sp. R89- 1 je schopný rychlé biotransformace kodeinu na jeho 14-OH deriváty, ale zároveň jsou u něj projevy toxických účinků nejvyšší. Mikroorganizmus Raoultella sp. KDF8 je oproti tomu charakteristický kompletní utilizací kodeinu jako zdroje uhlíku a energie a k akumulaci 14- OH derivátů u něj nedochází. Escherichia coli XL-1 (Blue) kodein netransformuje ani neutilizuje. Jako nejtoxičtější meziprodukty metabolizmu kodeinu byly nalezeny α,β- nenasycené ketony (morfinon, kodeinon, 14-OH-morfinon a 14-OH-kodeinon). Růst bakteriálních buněk kmenů R89-1 a KDF8 v přítomnosti kodeinu je provázen vyvoláním buněčné odpovědi na oxidační stres. Jak bylo zjištěno, tento stres je vyvolán...
Microbial consortia and metagenome of industrially polluted soil: occurrence of genes encoding AEH
Pitkina, Anastasiya ; Kyslík, Pavel (vedoucí práce) ; Lichá, Irena (oponent)
Půda obsahuje různorodá společenstva bakterii, což z ní děla atraktivní cíl pro metagenomický výzkum a zkoumání kultivovatelných organizmů. Tato diplomová práce analyzuje složení mikrobiálního společenstva farmaceuticky znečištěných půd, s využitím sekvenační technologie nové generace Illumina a knihovny amplikonů 16S rDNA. Tato analýza odhalila vysokou komplexitu mikrobiálního prostředí půd a potvrdila to, že antropogenní aktivita (konkrétně produkce beta-laktamových antibiotik) ovlivňuje variabilitu a relativní zastoupení druhů, aniž by však snižovala mikrobiální diverzitu. V druhé části této diplomové práce je popsaná isolace a heterologní exprese nového genu kódujícího alfa-amino acid ester hydrolázu (AEH), který pochází z kultivovatelného půdního mikroorganizmu B. cereus. AEH mají velký průmyslový potenciál v biokatalytických syntézách beta-laktamových antibiotik, které jsou momentálně velmi důležité z hlediska uplatnění v medicíně. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)

Národní úložiště šedé literatury : Nalezeno 22 záznamů.   1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam:
Chcete být upozorněni, pokud se objeví nové záznamy odpovídající tomuto dotazu?
Přihlásit se k odběru RSS.