|
|
Ampicilin rezistentní beta-laktamáza negativní kmeny Haemophilus influenzae izolované v ČR v letech 2010-2018
Jakubů, Vladislav ; Žemličková, Helena (vedoucí práce) ; Růžička, Filip (oponent) ; Nyč, Otakar (oponent)
Ampicilin rezistentní β-laktamáza negativní kmeny Haemophilus influenzae izolované v České republice v letech 2010-2018 Podle výsledků pravidelné surveillance rezistence bakteriálních původců infekcí dýchacích cest vzrůstá v České republice počet kmenů Haemophilus influenzae s neenzymatickou rezistencí k β-laktamovým antibiotikům. Neenzymatická rezistence je podmíněna mutacemi v genu ftsI kódujícím penicilin-vážící protein (PBP3), jejichž důsledkem je snížená schopnost vázat β-laktamová antibiotika. Průkaz tohoto typu rezistence je obtížnější než detekce β-laktamázy, která je u H. influenzae stále nejčastější příčinou rezistence k aminopenicilinům. Analýzou souboru 228 kmenů H. influenzae bylo zjištěno, že nejvyšší možný záchyt (99,5 %) izolátů s neenzymatickou rezistencí způsobenou mutacemi v genu ftsI, je možno v rutinní praxi dosáhnout při současném vyšetření citlivosti vůči penicilinu, ampicilinu, amoxicilinu a cefuroximu diskovou difúzní metodou dle metodologie EUCAST. V současnosti doporučovanou metodou EUCAST s využitím pouze penicilinu byl záchyt mutací nižší, 95,7 %. Sekvenační analýza prokázala značnou variabilitu mutací genu ftsI. V souboru 228 kmenů bylo zjištěno celkem 37 různých kombinací aminokyselinových záměn, které se vyskytly na 23 pozicích v proteinu PBP3 (V329I, D350N, S357N, A368T,...
|
|
|
Genová exprese porinů a beta-laktamáz během účinku beta-laktamových antibiotik v závislosti na velikosti inokula u klinických izolátů Klebsiella pneumoniae
Hepnar, David ; Žemličková, Helena (vedoucí práce) ; Fišer, Radovan (oponent)
Genová exprese genů porinů a beta-laktamáz během účinku beta- laktamových antibiotik a efekt inokula u klinických izolátů Klebsiella pneumoniae ABSTRAKT V posledních letech narůstá počet publikací, které se zabývají Klebsiella pneumoniae jako jedním z nejvýznamnějších nozokomiálních patogenů a předmětem studií je především narůstající rezistence k širokému spektru antibiotik. Diplomová práce je zaměřena na expresi genů skupiny AmpC - a to β- laktamázy DHA-1 a jejího negativního regulátoru AmpR a současně i porinů OmpK35 a OmpK36 a na efekt inokula. V práci byly použity již dříve charakterizované kmeny Klebsiella pneumoniae. Plazmidy, které byly získány z těchto kmenů byly transformovány do typově odlišných divokých kmenů Klebsiella pneumoniae a následně byla provedena jejich typizace s pomocí pulzní gelové elektroforézy (PFGE) a multilokusové sekvenační typizace (MLST). Pro sledování genové exprese byla použita metoda RT-PCR s použitím specifických primerů a TaqMan sond. Ve většině vzorků byla exprese závislá na přítomnosti induktoru. Vysoce rezistentní kmeny vykazují různý expresní profil, ale exprese blaDHA-1 zůstává indukovatelná cefoxitinem. Různá regulace exprese byla také pozorována u transformantů. Na základě získaných údajů se domníváme, že dříve popsaný regulační mechanismus genů skupiny AmpC není...
|
|
|
Testování antimikrobiální účinnosti nově syntetizovaných látek
Benková, Markéta ; Marek, Jan (vedoucí práce) ; Žemličková, Helena (oponent) ; Hanovcová, Irena (oponent)
V disertační práci jsme se věnovali testování antimikrobiální účinnosti (proti grampozitivním i gramnegativním bakteriím, kvasinkám i vláknitým houbám) nově syntetizovaných látek a sledování vztahu mezi jejich strukturou a právě antimikrobiální účinností. Tyto látky na bázi kvartérních amoniových solí s různými strukturními obměnami byly připraveny v rámci spolupráce s Katedrou toxikologie a vojenské farmacie Fakulty vojenského zdravotnictví Univerzity obrany a Centrem biomedicínského výzkumu Fakultní nemocnice Hradec Králové na společném projektu Agentury pro zdravotnický výzkum. První částí této práce byl výběr metodiky testování antimikrobiální účinnosti. K tomuto byla vybrána standardně používaná mikrodiluční bujónová metoda, která byla na pracovišti úspěšně zavedena. Další fází bylo in vitro testování vybraných syntetizovaných látek proti několika bakteriálním a fungálním kmenům. Několik látek bylo hodnoceno i na inhibici růstu zelených mikrořas (z hlediska šetrnosti k životnímu prostředí). Dále proběhlo testování cytotoxického účinku na savčí buněčné linii pro posouzení, zda jsou látky vhodnější jako antiseptika nebo povrchové dezinfekce. Proti jednotlivým mikroorganismům bylo vždy nalezeno několik účinných látek. Na základě výsledků výše zmíněných základních testování byly vybrány a...
|
|
| |
|
|
Využití MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie i dalších metod při identifikaci mikroorganismů
Šafránková, Renáta ; Žemličková, Helena (vedoucí práce) ; Sedláček, Ivo (oponent) ; Scharfen, Josef (oponent)
Úvod Metoda MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie je relativně nová metoda identifikace mikroorganismů, založená na analýze části buněčného proteomu. V posledních letech prodělala prudký rozvoj a postupně doplnila a pak i částečně nahradila do té doby dlouhodobě ověřené rutinní biochemické metody. Stala se tak nedílnou součástí mnoha mikrobiologických laboratoří a s jejím rozšířením souvisí i včasné nasazení efektivní terapie a ve výsledku zkrácení doby léčby pacienta. V těch případech, kdy potřebujeme detailnější charakterizaci mikroorganismů, můžeme dnes využít celé spektrum dalších, především molekulárně- biologických metod, polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) počínaje, přes RFLP (polymorfismus délky restrikčních fragmentů), sekvenační analýzu amplikonů části genu pro 16S rRNA (16S rRNA), až po celogenomovou sekvenaci. Cíl práce Pomocí metody MALDI-TOF MS i jiných metod (PCR, RFLP, rozšířená biochemická identifikace) charakterizovat a/nebo reidentifikovat vybrané čtyři skupiny infekčních agens (Campylobacter spp., Plesiomonas shigelloides, Citrobacter spp., Staphylococcus intermedius/Staphylococcus pseudintermedius). Zvolená agens byla klasickými metodami identifikace (morfologie, mikroskopie, biochemické testy) testována v letech 1950-2015; hlavním cílem disertační práce bylo porovnat efektivitu původních...
|
|
|
Testování antimikrobiální účinnosti nově syntetizovaných látek
Benková, Markéta ; Marek, Jan (vedoucí práce) ; Žemličková, Helena (oponent) ; Hanovcová, Irena (oponent)
V disertační práci jsme se věnovali testování antimikrobiální účinnosti (proti grampozitivním i gramnegativním bakteriím, kvasinkám i vláknitým houbám) nově syntetizovaných látek a sledování vztahu mezi jejich strukturou a právě antimikrobiální účinností. Tyto látky na bázi kvartérních amoniových solí s různými strukturními obměnami byly připraveny v rámci spolupráce s Katedrou toxikologie a vojenské farmacie Fakulty vojenského zdravotnictví Univerzity obrany a Centrem biomedicínského výzkumu Fakultní nemocnice Hradec Králové na společném projektu Agentury pro zdravotnický výzkum. První částí této práce byl výběr metodiky testování antimikrobiální účinnosti. K tomuto byla vybrána standardně používaná mikrodiluční bujónová metoda, která byla na pracovišti úspěšně zavedena. Další fází bylo in vitro testování vybraných syntetizovaných látek proti několika bakteriálním a fungálním kmenům. Několik látek bylo hodnoceno i na inhibici růstu zelených mikrořas (z hlediska šetrnosti k životnímu prostředí). Dále proběhlo testování cytotoxického účinku na savčí buněčné linii pro posouzení, zda jsou látky vhodnější jako antiseptika nebo povrchové dezinfekce. Proti jednotlivým mikroorganismům bylo vždy nalezeno několik účinných látek. Na základě výsledků výše zmíněných základních testování byly vybrány a...
|
|
|
Výskyt LA-MRSA a CA-MRSA v populaci s vyšším rizikem nosičství
Neradová, Kateřina ; Žemličková, Helena (vedoucí práce) ; Karpíšková, Renáta (oponent) ; Melter, Oto (oponent)
Výskyt LA-MRSA a CA-MRSA v populaci s vyšším rizikem nosičství Bakteriální rezistence patří k nejzávažnějším fenoménům moderní medicíny. Staphylococcus aureus je jednou z bakterií, u kterých výskyt antibiotické rezistence představuje závažnou komplikaci při účinné léčbě infekčních onemocnění. Klasicky se meticilin-rezistentní Staphylococcus aureus (MRSA, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) vyskytuje v nemocničním prostředí, kde působí infekční komplikace u hospitalizovaných pacientů. Od typických nemocničních kmenů můžeme odlišit kmeny komunitní, které mají odlišnou genetickou charakteristiku. Vyskytují se u mladých lidí bez anamnestické vazby na zdravotnická zařízení. U zvířat byla prokázána třetí, odlišná skupina MRSA, která představuje pro člověka další epidemiologické riziko. Je prokázáno, že MRSA s vyšší frekvencí kolonizuje jisté skupiny obyvatel. Těsný a častý kontakt se zvířaty činí takovou rizikovou skupinou nejen farmáře nebo chovatele zvířat, zaměstnance jatek a řezníky, ale i pracovníky ve veterinárním lékařství. Cílem této studie bylo zjistit prevalenci kolonizace MRSA u veterinárních odborníků. Na přítomnost MRSA bylo testováno celkem 134 nosních výtěrů od zdravých účastníků veterinární konference konané v Hradci Králové v České republice. Získané kmeny byly dále fenotypově a...
|
|
| |
|
|
Genová exprese porinů a beta-laktamáz během účinku beta-laktamových antibiotik v závislosti na velikosti inokula u klinických izolátů Klebsiella pneumoniae
Hepnar, David ; Žemličková, Helena (vedoucí práce) ; Fišer, Radovan (oponent)
Genová exprese genů porinů a beta-laktamáz během účinku beta- laktamových antibiotik a efekt inokula u klinických izolátů Klebsiella pneumoniae ABSTRAKT V posledních letech narůstá počet publikací, které se zabývají Klebsiella pneumoniae jako jedním z nejvýznamnějších nozokomiálních patogenů a předmětem studií je především narůstající rezistence k širokému spektru antibiotik. Diplomová práce je zaměřena na expresi genů skupiny AmpC - a to β- laktamázy DHA-1 a jejího negativního regulátoru AmpR a současně i porinů OmpK35 a OmpK36 a na efekt inokula. V práci byly použity již dříve charakterizované kmeny Klebsiella pneumoniae. Plazmidy, které byly získány z těchto kmenů byly transformovány do typově odlišných divokých kmenů Klebsiella pneumoniae a následně byla provedena jejich typizace s pomocí pulzní gelové elektroforézy (PFGE) a multilokusové sekvenační typizace (MLST). Pro sledování genové exprese byla použita metoda RT-PCR s použitím specifických primerů a TaqMan sond. Ve většině vzorků byla exprese závislá na přítomnosti induktoru. Vysoce rezistentní kmeny vykazují různý expresní profil, ale exprese blaDHA-1 zůstává indukovatelná cefoxitinem. Různá regulace exprese byla také pozorována u transformantů. Na základě získaných údajů se domníváme, že dříve popsaný regulační mechanismus genů skupiny AmpC není...
|
|
| |
host ::
RSS.