Original title:
Analýza genů z biosyntetické dráhy antokyanů pšenice
Authors:
Sekanina, Petr Document type: Master’s theses
Year:
2014
Language:
cze Abstract:
[cze][eng] Pšenice (Triticum aestivum L.) je nejpěstovanější obilninou na světě. V současné době nabývají na významu genotypy pšenice s odlišným zbarvením obilek a to nejen pro obohacení potravinových zdrojů, ale i pro svůj význam jako funkčí potravina, dodávající tělu zdraví prospěšné látky. Antokyany, flavonoidní látky, jsou zodpovědné za rozdílné zbarvení obilek pšenice seté. Pigmenty tvořené biosyntetickou drahou anthokyanů jsou ukládány v různých částech obilky. Purpurové pigmenty jsou akumulovány v perikarpu a modré pigmenty v aleuronové vrstvě obilky. Z kolekce Agrotestu fyto Kroměříž, s.r.o. byly vybrány vzorky jarní formy pšenice s bílým endospermem (Novosibirskaja 67), purpurovým perikarpem (ANK-28B a Abissinskaja arrasajta), modrým aleuronem (UC66049 a Tschermaks Blaukörniger Sommerweizen), z kterých byla izolována celková RNA pomocí fenol-chloroformové extrakce. Celková RNA byla přepsána reverzní transkripcí do cDNA. Na základě sekvenace PCR produktů byly získány kandidátní sekvence genů pro dihydroflavonol-4-reduktasu (95-100% podobnost) a pro antokyanidinsyntasu (90% podobnost). Variabilita zjištěná mezi studovanými genotypy byla způsobena jednonukleotidovými polymorfismy a indely. Získané sekvence byly lokalizovány v genomu pšenice a následně byla pomocí qPCR studována genová exprese genu pro DFR.Common wheat ( Triticum aestivum L.) is the most commonly grown cereal in the world. In this time wheat genotypes with different colour of kernels have become more important not only to enhance food sources, but also for its importance as a function food, which provides health-promoting substances. Anthocyanins, flavonoid substances in nature, are responsible for the different pigmented caryopsis of common wheat. Pigments formed in anthocyanin biosynthetic pathway are stored in different parts of the caryopsis. Purple pigments are accumulated in the pericarp and blue pigments are accumulated in the aleurone layer of the caryopsis. In this work we use spring forms of common wheat with white endosperm (Novosibirskaya 67), with purple pericarp (ANK - 28B and Abissinskaya Arraseita), and with blue aleurone layer (UC66049 and Tschermaks Blaukörniger Sommerweizen) from Agrotest fyto Kroměříž, s.r.o. collection. Total RNA from this genotypes was isolated using a phenol-chloroform extraction. Total RNA was transcribed into cDNA by reverse transcription. Based on the obtained PCR products sequences were obtained candidate gene sequences for dihydroflavonol-4-reductase (95-100% similarity) and anthocyanidinsynthase (90% similarity). The variability among genotypes in this study was due to single nucleotide polymorphisms and indels. The obtained candidate sequences were localized in the wheat genome and after that was studied gene expression of DFR gene by using qPCR.
Keywords:
antokyanidinsyntasa; antokyany; dihydroflavonol-4-reduktasa; qPCR; T. aestivum L.
guest ::
