Název:
Analýza bílkoviny MRCK alfa pomocí HPLC
Překlad názvu:
Analysis of MRCK alpha protein by HPLC
Autoři:
Srchová, Zuzana ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2013
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Hlavní náplní této diplomové práce bylo analyzovat a posléze získat protein MRCK alfa z biologických vzorků. Pro lepší vizualizaci je příslušná proteinová kináza zfúzována se zeleným fluorescenčním proteinem (GFP), který fluoreskuje zeleně po ozáření ultrafialovým světlem. Jednotlivá měření se realizovala pomocí zařízení HPLC s UV a fluorescenční detekcí. Nutnou součástí bylo provedení řady úkonů zabývajících se charakterizací dostupných biologických vzorků, které se svým obsahem od sebe odlišují. Snahou bylo vyzkoušet širokou škálu různých kolon, pracujících na principu reverzní chromatografie, přes iontově výměnnou až po gelově permeační chromatografii. Dále bylo potřeba nalézt vhodnou mobilní fázi a také optimalizovat podmínky měření pro tuto separaci proteinů. Velkým pomocníkem při identifikaci látek přítomných ve vzorcích se stala i hmotnostní spektrometrie. .The aim of this diploma thesis was to analyze and then obtain MRCK alpha protein from biological samples. For the better visualization is protein kinase fused with green fluorescent protein (GFP), which fluoresces green light, when irradiated with ultraviolet light. Individual measurements were implemented by using the HPLC apparatus with UV and fluorescence detection. A necessary part of the implementation of a series of acts dealing with the characterization of available biological samples, which differ in their content from each other. The aim was to test a wide range of different columns, working on the principle of reverse- phase chromatography, ion exchange chromatography and gel permeation chromatography. Furthermore, it was necessary to find a suitable mobile phase and optimize the measuring conditions for the separation of proteins. Helpful in the identification of compounds present in the samples became mass spectrometry.