Original title: Transkriptomika embryonální genomové aktivace preimplantačního vývoje skotu v podmínkách in vivo a in vitro kultivace
Translated title: Transcriptomics of bovine preimplantation embryo genome activation in vivo and in in vitro culture conditions
Authors: Vodičková Kepková, Kateřina ; Kaňka, Jiří (advisor) ; Petr, Jaroslav (referee) ; Krylov, Vladimír (referee)
Document type: Doctoral theses
Year: 2011
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Cílem práce bylo charakterizovat transkripční profil in vivo a in vitro získaných embryí během bovinní minoritní a majoritní genomové aktivace a dále identifikovat mRNA transkripty, které jsou nově syntetizované během těchto stádií. V naší první studii jsme se zaměřili na studium minoritní aktivace genů ve 4-buněčném stádiu embrya. Pomocí metody supresivní subtraktivní hybridizace (SSH) jsme nalezli 31 amplikonů homologních s již známými geny. Pro podrobnější studium exprese během celého období preimplantačního vývoje jsme vybrali 5 genů: centromere protein, 350/400 kDa (CENPF, mitosin), splicing factor arginine/serine-rich 3 (SRFS3), high mobility group nucleosomal binding domain 2 (HMGN2) protein a eukaryotické translační iniciační faktory EIF4A2 a EIF4E. Všechny tyto geny hrají důležitou roli v raném vývoji embrya. Gen SRFS3 je prvním genem s významnou funkcí, jehož exprese byla nalezena již v průběhu minoritní genomové aktivace, což potvrdila citlivost jeho transkripce k α-amanitinu v tomto stádiu. Pro další studium jsme si vybrali gen CENPF (centromeric protein F, mitosin), jehož funkci během preimplantačního vývoje bovinního embrya jsme podrobně studovali pomocí specifického umlčení injikací double- stranded (dsRNA) do embrya ve stádiu zygoty. Zjistili jsme, že mikroinjekce CENPF dsRNA... The goal of the thesis was to characterize transcriptional profiles of in vivo and in vitro derived embryos during bovine minor and major embryonic genome activation and to identify mRNA transcripts newly synthesized during these stages. In our first work we have concentrated on the study of minor genome activation at the 4-cell stage of embryo. Using SSH, we have identified 31 amplicons homologous with already identified genes. We have selected 5 of these for detailed study of their expression during the whole period of preimplantation development: centromere protein, 350/400 kDa (CENPF, mitosin), splicing factor arginine/serine-rich 3 (SRFS3), high mobility group nucleosomal binding domain 2 (HMGN2) protein and eukaryotic translation initiation factors EIF4A2 a EIF4E. All these genes play an important role in the early embryo development. SRFS3 is the first described gene with an important function in preimplantation development, which is expressed already during bovine minor genome activation, and its transcription is α-amanitin sensitive during this period. We have selected CENPF gene for a more thorough study. By silencing its expression by the injection of CENPF dsRNA into the zygote, we have studied its function throughout the whole preimplantation development of bovine embryo....
Keywords: cDNA microarray; embryonic genome activation; real-time PCR; SSH; cDNA mikročipy; embryonální aktivace genomu; real-time PCR; SSH

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/34892

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-299361


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Doctoral theses