Název:
HPLC metoda pro současné stanovení liposolubilních vitaminů A, D, E
Překlad názvu:
HPLC Method for Simultaneous Determination of Liposolubile Vitamines A, D and E
Autoři:
Nová, Alena ; Matysová, Ludmila (oponent) ; Solich, Petr (vedoucí práce) Typ dokumentu: Rigorózní práce
Rok:
2010
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] V rigorózní práci byla vyvinuta a částečně zvalidována HPLC metoda pro současné stanovení vitaminu D (vitamin D2, D3) a jeho metabolitu 25(OH)D3, vitaminu A (retinolu) a vitaminu E (_-tokoferolu) s využitím vnitrního standardu tokolu. Pro separaci byly použity dvě sériově zapojené monolitní kolony Chromolith Performance RP-18e, 100 x 4,6 mm a Chromolith Performance RP-18e, 50 x 4,6 mm. Detekce analytů byla prováděna pomocí diode array detektoru při vlnových délkách 264 nm pro vitaminy D2, D3 a metabolit 25(OH)D3, 295 nm pro _-tokoferol a vnitrní standard tokol a 325 nm pro retinol. Mobilní fáze byla tvořena A: methanol/voda/2- propanol v objemovém poměru (75/15/10), průtok 3,0 ml/min v case 0,0-3,0 minuty a mobilní fází B: methanol/voda v objemovém poměru (95/5) s průtokem 3,5 ml/min v čase 3,5-6,5 minuty. Celková doba analýzy byla 6,5 minuty včetně ekvilibrace kolony. Nástřik vzorku na kolonu byl 20 μl. Metoda byla vypracována a zvalidována se standardy vitaminu A, D a E.In this work the new HLPC method for simultaneous determination of vitamins D2, D3 and metabolite 25(OH)D3, vitamin A (retinol) and vitamin E (_-tocopherol) using the internal standard was developed. During the suggested assessment the monolith column Chromolith Performance RP-18e, 100 x 4,6 mm and Chromolith Performance RP-18e, 50 x 4,6 mm were used. The detection was carried out with the help of a diode array detector at wavelenght 264 nm for vitamins D2, D3 and metabolite 25(OH)D3, 295 nm for _-tocopherol and the internal standard tocol and 325 nm for retinol. The mixture of methanol : water : 2- propanol (75 : 15 : 10, v/v) was used as the mobile phase A in time 0,0-3,0 minutes. As the mobil phase B the mixture of methanol : water (95 : 5, v/v) was used in flow rate 3,5 ml/min in time 3,0-6,5 minutes. The injection volume of the sample was 20 μl. The total time of the analysis was 6,5 minutes including the equilibration of the column. This method was developed and partially validate. With the method will be continue on biological material.