|
|
Příprava expresních vektorů pro expresi helikasy z virů Zika a Dengue
Daňhelová, Kateřina ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent)
Viry Zika a Dengue se vlivem globalizace rozšiřují do všech kontinentů, které leží aspoň částí v tropickém a subtropickém pásu. S jejich rozšířením souvisí i vzestup vážných onemocnění způsobených těmito viry. Řešením tohoto problému mohou být nová léčiva, jež by byla účinná proti těmto infekcím. Jejich cílem zásahu mohou být různé virové proteiny, mezi nimi i virová helikasa, kterou se zabývá tato bakalářská práce. Tématem této práce bylo připravit expresní konstrukty pro produkci rekombinantních helikas virů Zika a Dengue prostřednictvím vhodného bakteriálního kmene Escherichia coli. Byly připraveny varianty odvozené od plasmidu pET-16b s vloženou helikasou virů Zika a Dengue. Následnou purifikací byla získána helikasa viru Zika, která bude dále využita pro výzkumné účely. Klíčová slova: Flavivirus, virus Zika, virus Dengue, helikasa, exprese, purifikace, enzymová aktivita
|
|
|
Expression of selected membrane transporters in placentas of pregnant women diagnosed for preterm rupture of membranes
Michalská, Martina ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Jirkovský, Eduard (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Martina Michalská Školiteľ: doc. PharmDr. Martina Čečková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Expresia vybraných membránových transportérov v placentách tehotných žien s diagnostikovanou predčasnou ruptúrou plodových obalov Placenta je orgán, ktorý má kľúčovú úlohu počas tehotenstva. Jednou z jej hlavných funkcií je transport látok medzi matkou a plodom. Tento prestup je z veľkej časti uskutočňovaný pomocou membránových transportérov, nachádzajúcich sa na apikálnej alebo bazálnej strane trofoblastu. Ich množstvo je ovplyvňované celu radou fyziologických i patologickými faktorov, mimo iného jich pravdepodobe ovplyvňuje aj infekcia a zápalová reakcia. Zápal je tiež jedným z rizikových faktorov predčasných pôrodov, a preto sa dá domnievať, že počas nich dôjde ku zmene expresie placentárnych prenášačov. Tato štúdia bola uskutočňovaná na 51 placentách, získaných vo Fakultnej nemocnice v Hradci Králové od žien, u ktorých došlo k predčasnému pôrodu, a na 15 placentách žien s pôrodom v termíne. Na experiment bola použitá kvantitatívna RT-PCR metóda. Sledovala sa mRNA expresia membránových prenášačov ABCB1, ABCG2, OATP1A2, OATP1B3, OATP2A1, OATP2B1, OATP3A1, OATP4A1, pričom sa tieto výsledky porovnávali s...
|
|
|
Imunogenetické a hormonální predispoziční markery systémových revmatických onemocnění,zejména systémového lupus erythematodu
Fojtíková, Markéta ; Pavelka, Karel (vedoucí práce) ; Hrnčíř, Zbyněk (oponent) ; Rovenský, Jozef (oponent)
Fojtikova2011 ÚVOD: V multifaktoriální etiopatogenezi systémových revmatických chorob je nezbytná genetická vnímavost. PRL je účinný imunomodulátor, který podporuje rozvoj autoimunity. CÍLE PRÁCE: 1. Zjistit imunogenetický background, HLA II. a I. třídy a alely mikrosatelitového polymorfismu transmembránové části exonu 5 genu MIC-A (dále MIC-A), u SLE a PsA. 2. Zjistit, zda PRL v séru a synoviální tekutině ovlivňuje klinický a laboratorní průběh RA. 3. Zjistit, zda se funkční polymorfismus -1149 G/T SNP mimohypofyzárního promotoru PRL genu podílí na rozvoji a fenotypu SLE, RA, PsA, SSc a zánětlivých myopatií. METODIKA: Genetické analýzy u souborů nemocných se SLE (n=156), RA (n=173), PsA (n=100), SSc (n=75), PM (n=47) a DM (n=68) a 123 zdravých jedinců: PCR-SSP (HLA I. a II. třídy), PCR-fragmentační analýza (MIC-A) a PCR-RFLP (-1149 G/T SNP PRL). Detekce PRL v séru a synoviální tekutině u 29 RA a 26 OA pomocí radioimunometrické analýzy. VÝSLEDKY: 1. Rizikové imunogenetické markery SLE v české populaci jsou alela HLA-DRB1*03 (pc = 0.008; OR 2.5) a haplotyp HLA-DRB1 *03-DQB1*0201 (pc <0.001;OR 4.54). Frekvence MIC-A5.1 je vyšší u SLE než u zdravých (pc =0.005; OR 1.88). MIC-A5.1 spolu s HLA-DRB1*03 výrazně zvyšuje riziko SLE, pc <0.000001; OR 9.71. Alela HLA-Cw*0602 je častější u PsA s psoriázu I....
|
|
|
Vliv vybraných endokrinních disruptorů na cytochromy P450 1B1 a 3A1/2
Holecová, Jana
Mnoho látek exogenního nebo endogenního původu působí jako endokrinní disruptory (EDC), tedy interferují s přirozenou tvorbou, signalizací nebo metabolismem hormonů v organismu. Mezi rozšířené endokrinní disruptory exogenního původu patří benzo(a)pyren (BaP) a 17α-ethinylestradiol (EE2), hojně se v prostředí vyskytuje také endogenní endokrinní disruptor 17β-estradiol (E2). V rámci této diplomové práce byl studován vliv uvedených EDC a jejich kombinací na genovou a proteinovou expresi CYP1B1, 3A1 a 3A2 v játrech, ledvinách a plicích potkanů in vivo. Proteinová exprese byla sledována za použití metody Western blot a specifických protilátek, genová exprese byla sledována pomocí kvantitativní PCR. Dále byl sledován vliv těchto látek na metabolismus benzo(a)pyrenu a na specifickou aktivitu CYP3A (stanovenou jako rychlost tvorby 6β-hydroxytestosteronu) v mikrosomální frakci izolované z jater potkanů. Bylo potvrzeno, že BaP výrazně indukuje expresi CYP1B1 v játrech a plicích jak samostatně, tak v kombinaci s EE2 nebo E2. Premedikace potkanů estradiolem spolu s BaP indukci CYP1B1 BaP ještě posiluje. Naopak premedikace potkanů EE2, E2 nebo jejich kombinací genovou expresi tohoto enzymu snižuje. U potkanů premedikovaných BaP nebo jeho kombinacemi dochází ke zvýšené tvorbě metabolitů BaP v jaterní...
|
|
|
Změny v expresi membránových molekul CD200R, CD95, CD95L a solubilního CD200R regulujících zánětlivou odpověď u pacientů podstupujících kardiochirurgický zákrok
Holmannová, Drahomíra ; Krejsek, Jan (vedoucí práce) ; Brát, Radim (oponent) ; Turánek, Jaroslav (oponent)
Souhrn Srdeční operace jsou spojené s rozvojem komplexní fyziologické reakce s aktivací imunitního systému (SIRS), neurohormonální odpovědí, metabolickými změnami, koagulopatiemi atd. SIRS je spuštěna poškozením tkání, myokardiální ischemií a reperfuzí, použitím anestezie, kardioplegie, využitím mimotělního oběhu aj. Nadměrná aktivace imunitního systému je spojená s progresí SIRS, s rozvojem život ohrožujícího multiorgánové selhání, a tím i se zvýšenou morbiditou a mortalitou v postoperačním období. Odpověď imunitního systému je regulována a ukončována díky buněčným i humorálním regulačním a inhibičním mechanismům, mezi něž patří také změny exprese v naší studii monitorovaných molekul CD200R, sCD200R, CD95 a CD95L. Metody: Studie zahrnovala měření exprese CD95, CD95L, CD200R, a sCD200R na površích granulocytů a monocytů ve vzorcích 30 pacientů, kteří se podrobili srdeční operaci s použitím mimotělního oběhu. Krevní vzorky byly odebírány v preoperačním, bezprostředně po operaci a dále pak 1., 3. a 7. den po operaci a analyzovány pomocí průtokové cytometrie a v případě sCD200R metodou ELISA. Výsledky: Zjistili jsme, že okamžitě po operaci dochází k výraznému relativnímu nárůstu granulocytární populace exprimující protizánětlivou molekulu CD200R, a to z 5 % na 17,8 %. Dle toho, že tato populace je převážně...
|
|
|
Skupina 12/15 a její místo v českém umění po roce 1989
Mayerová, Miroslava ; Bláha, Jaroslav (vedoucí práce) ; Čech, Viktor (oponent)
Miroslava Mayerová Abstrakt Anotace Mayerová, Miroslava: Skupina 12/15 a její místo v českém umění po roce 1989 [Diplomová práce] Praha, 2019. Univerzita Karlova v Praze, Pedagogická fakulta, Katedra výtvarné výchovy. Název diplomové práce: Skupina 12/15 a její místo v českém umění po roce 1989 ABSTRAKT: Cílem diplomové práce je popsat a analyzovat pozici Volného seskupení 12/15 Pozdě, ale přece v období po roce 1989 s důrazem na generační proměny a postmoderní zlom. V didaktické části bylo záměrem ukotvit vědomí o seskupení v žákovských myslích a na základě mezioborových vazeb zopakovat a rozšířit jejich znalosti dobových kontextů. Teoretická část práce vychází z odborné literatury historického, kunsthistorického a socio vědního charakteru. K nejpřesnějšímu dokreslení doby, atmosféry a pozice Volného seskupení 12/15 byly jako metodika použity semistrukturované a nestrukturované rozhovory se samotnými členy skupiny. Diplomová práce ukazuje, že Volné seskupení 12/15 Pozdě, ale přece a jeho generace jsou mostem mezi 2. avantgardou a postmoderním i současným uměním, udržující kontinuitu české výtvarné scény. Didaktická a praktická část poukazuje k důležitosti mezigeneračního setkávání a živého kontaktu žákovské a tvůrčí scény. Klíčová slova postmoderna, umělecké skupiny, kresba, malba, socha, prostor,...
|
|
|
KOMUNIKAČNÍ PROSTŘEDKY V SOUČASNÉ MALBĚ
Kopecká, Marie ; Pfeiffer, Jan (vedoucí práce) ; Kornatovský, Jiří (oponent)
Obsahem této bakalářské práce je komplexní vhled do problematiky komunikace v umění s cílem aplikace konkrétních teoretických principů v umělecké praxi a především estetické výchově. Teoretická část této práce obsahuje dva oddíly. První z nich je zaměřen na historický vývoj role umění ve společnosti, jeho vnímání a východiska, která vedla umělce ke konkrétním krokům. Druhý oddíl se věnuje současnosti. Zmiňuji zde teoretické přístupy k problematice vnímání umění a vizuální komunikace, zabývám se tím, jakou roli hraje v procesu komunikace jeho divák, a rozebírám komunikační strategie vybraných současných českých malířů. V praktické části pojednávám o přístupu ke své vlastní výtvarné činnosti, která je konkrétní aplikací závěrů popsaných v teoretické části práce. V této části práce se komplexněji věnuji procesu vlastní malířské tvorby, volbě jednotlivých námětů, jejich konkrétnímu zpracování a následné reflexi s cílem ověření předem stanovených účinků jednotlivých prostředků, jež by měla být nedílnou součástí každé tvorby. Didaktická část obsahuje teoretická východiska, která mne vedla k vytvoření didaktické řady a samotný návrh didaktické řady pro první stupeň základní školy se zaměřením na výtvarnou výchovu. Tématem didaktické řady jsou emoce, námětem pak vyjadřování emocí pomocí rozdílných...
|
|
|
Příprava vybraných rekombinantních proteinů viru Aichi a dalších kobuvirů
Ludvík, Tomáš ; Bouřa, Evžen (vedoucí práce) ; Petrvalská, Olívia (oponent)
Virová 2Apro zastává mnoho důležitých funkcí v životním cyklu viru. Jedná se o proteasu, jež se podílí na štěpení virového polyproteinu v úseku VP1/2A. Struktura proteinu obsahuje tzv. aktivní místo, díky kterému dokáže protein vázat různé substráty v hostitelské buňce, což je esenciální pro virovou infekci. Pomocí 2Apro dokáže virus obejít imunitní odpověď hostitele a zastavit produkci klíčových hostitelských proteinů. Proto je proteasa 2Apro vhodný cíl pro zásah antivirotiky. V rámci této práce byly připraveny dva rekombinantní proteiny 2Apro z Aichi viru a Coxsackie viru B3. Jedná se o viry z rodiny Picornaviridae, které patří mezi lidské patogeny, jež v některých případech způsobují závažná onemocnění. Aichi virus je původcem gastroenteritidy a Coxsackie virus B3 v nejhorších případech způsobuje dilatační kardiomyopatii. Kardiomyopatie vede ke špatné funkci srdce důsledkem jeho rozšíření, čímž může dojít až k srdečnímu selhání. Klíčová slova: rekombinantní proteiny, 2Apro , Aichi virus, Coxsackie B3 virus
|
|
|
Studium vzájemného působení inhibitoru tyrosinkinas cabozantinibu a cytotoxického alkaloidu ellipticinu na expresi a aktivitu cytochromů P450 1A1, 1A2 a 1B1
Měkotová, Barbora ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Jeřábek, Petr (oponent)
Inhibitory tyrosinkinas jsou v posledních letech stále více využívány pro cílenou léčbu rakoviny, a to díky jejich schopnosti blokovat intracelulární signalizační dráhy, které jsou spojované s vývojem nádorů. Do této skupiny látek patří cabozantinib, který byl schválen pro léčbu karcinomu štítné žlázy a vykazuje účinnost proti několika dalším typům nádorových onemocnění. V protinádorové terapii se však velmi často používá kombinace více léčiv, což může mít za následek jejich vzájemné interakce zprostředkované cytochromy P450, které hrají hlavní roli v jejich metabolismu. Ačkoli tak může dojít k ovlivnění terapeutického účinku a vzniku nežádoucích účinků na organismus, nebylo doposud o vlivu cabozantinibu na biotransformační enzymy mnoho známo. V rámci této práce byl proto studován vliv cabozantinibu nejen samotného, ale také v kombinaci se známým cytostatikem ellipticinem na expresi a aktivitu cytochromů P450 1A1, 1A2 a 1B1 v játrech a ledvinách potkanů in vivo. Pomocí kvantitativní PCR byla nejprve stanovena genová exprese, míra exprese samotného proteinu byla sledována prostřednictvím metody Western blot s následnou imunodetekcí. Specifická aktivita byla sledována za použití specifických markerových reakcí, O-deethylace 7-ethoxyresorufinu pro CYP1A1, O-demethylace 7-methoxyresorufinu pro CYP1A2 a...
|
|
|
Vliv ZnO nanočástic na obsah fenolických látek v Solanum lycopersicum
Zelinka, Radim
Nanočástice oxidu zinečnatého jsou velice variabilní materiály, schopné u rostlin vyvolat pozitivní i negativní odpovědi na jejich působení. Negativní účinky jsou často spojeny s jejich nadměrnou koncentraci, která může u rostlin vyvolat oxidační stres. Vhodné dávky naopak vedou k pozitivním projevům růstu a zlepšení studovaných vlastností. Nanočástice ZnO poskytují rostlinám lépe přijatelnou formu zinku, která je dobře dostupná a snadněji využitelná. Nicméně, informací o jejich možném toxickém účinku v kombinaci s jiným stresovým faktorem je nedostatek. Cílem této práce bylo porovnat a vyhodnotit účinky zinku v podobě nanočástic (ZnO NPs) s účinky zinku vázaného v chelátové vazbě (Zn-EDTA), v kombinaci se stresovým faktorem v podobě UV-C záření u rostlin Solanum lycoperscicum L. Výsledky tohoto pilotního experimentu ukazují, že nanočástice ZnO i Zn-EDTA o koncentraci 10,95 mg Zn2+/l v kombinaci s UV-C zářením vykazují negativní vliv na vitalitu a indukují u ošetřených rostlin oxidační stres. Rozhodující vliv na toxický účinek vycházel z použité koncentrace a také formy aplikovaného zinku. Rozdíly se projevily v hladinách exprese genů ovlivněných oxidačním stresem. Výsledky získané z expresních analýz genů, umožnily sledovat jednotlivé transkripty, sloužící pro odpověď na oxidační stres a také poskytly informace o možném synergickém účinku UV-C záření a zinku v obou studovaných formách (Zn-EDTA a ZnO NPs).
|
host ::
RSS.