|
|
Lipidomická analýza tukové tkáně pacientů s ischemickou chorobou srdeční
Tomášová, Petra ; Vecka, Marek (vedoucí práce) ; Poledne, Rudolf (oponent) ; Neckář, Jan (oponent)
Stále stoupající incidence ischemické choroby srdeční (ICHS) je jedním z nejvýznamnějších zdravotních problémů současné doby v České republice i celosvětově. Rizikovým faktorem rozvoje ICHS je obezita a diabetes mellitus 2. typu (DM2T). Metabolismus lipidů je vlivem těchto onemocnění velmi ovlivněn, přičemž významnou roli v těchto změnách hraje i tuková tkáň, dříve považovaná za pouhé úložiště energie. Dnes je diskutována i jako endokrinní orgán a její vliv na celotělový metabolismus je významný. Pro sledování metabolismu lipidů je účinným nástrojem lipidomická analýza, která spojuje výhody stanovení velkého množství analytů, malého množství vzorku a jeho rychlé přípravy. V první fázi práce jsem optimalizovala HPLC-MS metodu necílené lipidomické analýzy v tukové tkáni. V další fázi jsem metodu využila pro porovnání subkutánní a epikardiální tukové tkáně. Na závěr své práce jsem zhodnotila vliv ICHS a DM2T na lipidový profil subkutánní a epikardiální tukové tkáně. Optimalizace preanalytické fáze umožnila analýzu celkem 206 lipidových molekul v obou typech tukové tkáně. Epikardiální tuková tkáň oproti subkutánní obsahovala vyšší zastoupení fosfatidylcholinů (např. PC(32:0), PC(32:1), PC(36:4)) a nižší množství triacylglycerolů (např. TAG(18:1,18:2,18:1)). Výsledky naznačují, že velikost lipidových...
|
|
|
Mitochondrie jako cíl protinádorové terapie.
Dvořák, Aleš ; Ježek, Petr (vedoucí práce) ; Poučková, Pavla (oponent) ; Vecka, Marek (oponent)
Mitochondriální isocitrát dehydrogenáza 2 (IDH2) katalyzuje reduktivní karboxylaci (RK, reverzní dráhu Krebsova cyklu) a syntézu 2-hydroxyglutarátu (2HG). RK se podílí na proliferaci nádorových buněk ve stížených podmínkách (hypoxie). Ve zkráceném Krebsově cyklu vytváří reverzní reakcí z 2-oxoglutarátu (2-OG) citrát, který může být exportován do cytosolu, kde slouží jako prekurzor mastných kyselin a dalších molekul. Zároveň IDH2 při RK spotřebovává (stejně tak i při syntéze 2HG) NADPH. RK se tak z hlediska výzkumu zdá ještě zajímavější, neboť může ovlivnit produkci ROS a míru oxidačního stresu. 2HG může být syntetizován (krom mitochondrie) také v cytosolu, a v obou kompartmentech se na jeho syntéze podílí (mimo IDH2 a IDH1) i několik dalších enzymů. 2HG je významnou regulační molekulou a v současné době je využíván v diagnostice jako marker akutní myeloidní leukémie. Bývá označován jako možný inhibitor α-ketoglutarát- dependentních dioxygenáz (2OG-DD), jež se podílejí na různých epigenetických změnách a zvyšují malignitu rakovinného fenotypu spojenou se změnou proliferace. V této práci byl pomocí plynové chromatografie s hmotnostní detekcí zkoumán význam RK a syntézy 2HG v buněčných liniích karcinomu prsu a v dalších buňkách, včetně primárních potkaních fibroblastů (F3). U linií prsního karcinomu...
|
|
|
Využití plynové chromatografie pro stanovení mastných kyselin a některých xenobiotik
Jaček, Martin ; Tůma, Petr (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Vecka, Marek (oponent)
Předložená dizertační práce se zabývá využitím plynové chromatografie (GC) pro stanovení mastných kyselin (FA) v klinických vzorcích a studiem vlivu FA na vznik a prevenci vybraných onemocnění. Práce je zaměřena na metabolizmus FA s ohledem na esenciální FA a vysoce prospěšné polynenasycené mastné kyseliny (PUFA) ze skupiny omega-3, jako je kyselina eikosapentaenová (EPA) a dokosahexaenová (DHA), kterých je ve stravě západní populace nedostatek. V experimentální části se zabývá vývojem GC metod pro stanovení FA ve formě jejich methylesterů, a jejich využitím pro analýzu vzorků z intervenční klinické studie OMEGA a VEGGIE-2. Studie OMEGA je zaměřena na inkorporaci prospěšných omega-3 PUFA do potravního řetězce prostřednictvím mikrořas syntetizujících EPA a lněného semínka obsahujícího hlavně α-linolenovou kyselinu. Z těchto zdrojů byla připravena směs pro výkrm drůbeže a následně získaná vejce a kuřecí maso obohacené o omega-3 FA bylo použito jako surovina pro přípravu stravy. Po 8 týdenní dietní intervenci provedené na zdravých dobrovolnících byl nalezen statisticky významný nárůst v zastoupení DHA v erytrocytech, který činil 4,4 % před a 5,1 % po dietní intervenci u testovací skupiny. Zjištěný omega-3 index vykazoval také nárůst z 5,1 % na 5,8 % u testovací a z 5,3 % na 5,8 % u kontrolní skupiny....
|
|
| |
|
|
Mitochondrie jako cíl protinádorové terapie.
Dvořák, Aleš ; Ježek, Petr (vedoucí práce) ; Poučková, Pavla (oponent) ; Vecka, Marek (oponent)
Mitochondriální isocitrát dehydrogenáza 2 (IDH2) katalyzuje reduktivní karboxylaci (RK, reverzní dráhu Krebsova cyklu) a syntézu 2-hydroxyglutarátu (2HG). RK se podílí na proliferaci nádorových buněk ve stížených podmínkách (hypoxie). Ve zkráceném Krebsově cyklu vytváří reverzní reakcí z 2-oxoglutarátu (2-OG) citrát, který může být exportován do cytosolu, kde slouží jako prekurzor mastných kyselin a dalších molekul. Zároveň IDH2 při RK spotřebovává (stejně tak i při syntéze 2HG) NADPH. RK se tak z hlediska výzkumu zdá ještě zajímavější, neboť může ovlivnit produkci ROS a míru oxidačního stresu. 2HG může být syntetizován (krom mitochondrie) také v cytosolu, a v obou kompartmentech se na jeho syntéze podílí (mimo IDH2 a IDH1) i několik dalších enzymů. 2HG je významnou regulační molekulou a v současné době je využíván v diagnostice jako marker akutní myeloidní leukémie. Bývá označován jako možný inhibitor α-ketoglutarát- dependentních dioxygenáz (2OG-DD), jež se podílejí na různých epigenetických změnách a zvyšují malignitu rakovinného fenotypu spojenou se změnou proliferace. V této práci byl pomocí plynové chromatografie s hmotnostní detekcí zkoumán význam RK a syntézy 2HG v buněčných liniích karcinomu prsu a v dalších buňkách, včetně primárních potkaních fibroblastů (F3). U linií prsního karcinomu...
|
|
|
Význam necholesterolových sterolů a profilu mastných kyselin za různých patofyziologických stavů
Vecka, Marek ; Tvrzická, Eva (vedoucí práce) ; Zadák, Zdeněk (oponent) ; Kazdová, Ludmila (oponent)
Disertační práce se zabývala významem stanovení necholesterolových sterolů a mastných kyselin za různých patofysiologických stavů. Metodická část disertační práce se zabývala některými aspekty analysy mastných kyselin a necholesterolových sterolů pomocí plynové chromatografie. Pro analysu minoritních mastných kyselin je důležitý jak druh použité kapilární kolony, tak i možnosti integračního software. Plynová chromatografie přispívá k celkové chybě analysy mastných kyselin nejmenší měrou. Vliv extrakce, tenkovrstevné chromatografie a methylačního procesu je podobný. Porovnání zastoupení mastných kyselin v lipidových třídách lipoproteinů s velmi nízkou a nízkou hustotou odhalilo rozdíly, které ale byly vysoce individuální. Vyšetření profilu mastných kyselin ve fosfatidylcholinech krevního sera ukázalo, že je možno nahradit fosfatidylcholiny sumou všech fosfolipidů. U analys sterolů byla dána přednost acetylaci pro lepší analytické podmínky za podmínek nástřiku typu split. Současné stanovení necholesterolových sterolů vedle cholesterolu v jediné chromatografické analyse nebylo možné, pro kvantitativní stanovení bylo nutné použít metodu dvou vnitřních standardů a různého ředění vzorku, tj. dvou analys. Porovnáním příspěvků jednotlivých kroků analysy necholesterolových sterolů jsme ukázali, že kvantitativní...
|
host ::
RSS.