|
|
Novel biomarkers in patients with renal disease
Zakiyanov, Oskar ; Kalousová, Marta (vedoucí práce) ; Teplan, Vladimír (oponent) ; Průša, Richard (oponent)
Chronické onemocnění ledvin a akutní poškození ledvin patří mezi významné zdravotní problémy v populaci. Je důležité, abychom byli schopni rozpoznat osoby s vysokým rizikem nepříznivého vývoje zdravotního stavu, progresí onemocnění a přidružených kardiovaskulárních komplikací. Cílem disertační práce bylo studium nových perspektivních biomarkerů, jejich vztah k renální funkci, chronickému zánětu, případně zvýšenému kardiovaskulárnímu riziku. Studovány byly: placentární růstový faktor (PlGF), s těhotenstvím asociovaný protein A (PAPP-A), matrixová metalloproteináza 2 (MMP-2), matrixová metalloproteináza 9 (MMP-9), solubilní receptor pro konečné produkty pokročilé glykace (sRAGE), protein vázající vápník S100A12 - nově identifikovaný extracelulární protein vázající se na receptor pro konečné produkty pokročilé glykace (EN-RAGE) a amfoterin (HMGB-1) u pacientů se sníženou funkcí ledvin včetně pacientů s chronickým renálním onemocněním, hemodialyzovaných, pacientů s akutním poškozením ledvin a zdravých kontrol pro srovnání. První studie odhalila, že hladina PlGF je zvýšená u pacientů se sníženou funkcí ledvin. Druhá studie zjistila spojitost hladin MMP-2 a PAPP-A s proteinurií u pacientů s chronickým renálním onemocněním. Sérové hladiny MMP-2, MMP-9 a PAPP-A se výrazně lišily u pacientů s různými nefropatiemi....
|
|
|
Laboratorní vyšetření funkce ledvin
Šálek, Tomáš ; Palička, Vladimír (vedoucí práce) ; Jabor, Antonín (oponent) ; Průša, Richard (oponent)
Souhrn Laboratorní vyšetření funkce ledvin Ve své práci jsem se věnoval především problematice glomerulární filtrace (GFR). GFR je hlavní ukazatel funkce ledvin. Její pokles je asociován se zvýšenou morbiditou a mortalitou. Při poklesu GFR pod 1,0 ml/s/1,73m2 po dobu delší než 3 měsíce mluvíme o chronickém onemocnění ledvin (CKD). Pacientům s CKD je redukována dávka farmakoterapie s farmakokinetikou renálního vylučování a je podávána nefroprotektivní terapie. Proto je nutné včas zjistit tento pokles GFR. Práce porovnává odhady glomerulární filtrace ze sérového kreatininu (eGFRcreatinine) a cystatinu C (eGFRcystatinC) u čtyř různých kohort pacientů: 101 pacientů s monoklonální gamapatií neurčeného významu (MGUS), 13 intoxikovaných metanolem, 1515 diabetiků a 352 pacientů s CKD. Kreatinin byl u všech pacientů stanoven enzymaticky s návazností měření na mezinárodní certifikovaný referenční materiál NIST SRM 967. Cystatin C byl analyzován imunoturbidimetrickou standardizovanou metodou s návazností na DA ERM 471. Pouze u skupiny pacientů s MGUS, což byla první studovaná skupina, nebyla ještě standardizovaná metoda k dispozici. Pro odhad GFR byly použity nejaktuálnější validované rovnice. U pacientů s MGUS byla pro odhad eGFRcreatinine použita MDRD rovnice, pro eGFRcystatinC Grubbova rovnice. U pacientů...
|
|
|
Nové markery jaterní fibrózy
Skřebská, Lenka ; Čepová, Jana (vedoucí práce) ; Průša, Richard (oponent)
Tato bakalářská práce pojednává o problematice jaterní fibrózy. Jedná se o závažné onemocnění jater způsobené chronickým poškozováním jaterní tkáně. Následkem toho je porucha vyrovnaného procesu fibrogeneze a fibrolýzy. Včasná diagnostika jaterní fibrózy je důležitá pro zahájení efektivní léčby. V současné době se k diagnostice jaterní fibrózy nejčastěji používá biopsie jater, která však představuje mnoho rizik a nevýhod pro pacienta, což vede k hledání nových neinvazivních metod. Existuje řada výpočtů, které používají k určení stupně závažnosti fibrotizace specifické i nespecifické markery. Cílem této práce je porovnat nový automatizovaný imunochemický ELF test, používající markery specifické pro jaterní fibrózu, s dosud používanými výpočty APRI a Hepascore. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Katabolická dráha hemu u chronické hepatitidy C
Subhanová, Iva ; Zima, Tomáš (vedoucí práce) ; Průša, Richard (oponent) ; Kráslová, Ivana (oponent)
Předkládaná práce se zabývá významem katabolické dráhy hemu u chronické hepatitidy C. Je zaměřena na objasnění možné asociace exprese/aktivity klíčových enzymů katabolické dráhy hemu, hemoxygenázy (HMOX) a biliverdinreduktázy (BLVRA) v jaterní tkáni a krvi (studie A) a polymorfismů HMOX1 a UDP-glukuronosyltransferázy (UGT1A1) (studie B) s rozdílnými histologickými nálezy a rozdílnou účinností protivirové terapie. Cílem práce bylo nalézt faktory, které by u pacientů s chronickou HCV infekcí mohly predikovat progresi jaterního poškožení a efekt protivirové terapie před jejím zahájením. Pro účely této studie jsme zavedli vysoce citlivou metodiku na stanovení aktivity HMOX v mononukleárech periferní krve (PBMC), která dosud nebyla k dispozici. Zavedli jsme a zvalidovali RealTime PCR metodiku na stanovení exprese HMOX a BLVRA v jaterní tkáni a v periferních leukocytech (PBL). (GT)n a (TA)n varianty promotoru genu pro HMOX1 a UGT1A1 jsme stanovili simultánní fragmentační analýzou, jejíž metodika byla v naší laboratoři nedávno vyvinuta a rovněž publikována. Pomocí uvedených metod jsme neprokázali asociaci exprese/aktivity enzymů katabolické dráhy hemu a polymorfismů HMOX1 a UGT1A1 s histologickou aktivitou v jaterní tkáni. Prokázali jsme však významné rozdíly v expresi BLVRA v PBL mezi pacienty se...
|
|
|
Nastavení optimálního režimu vyšetřování markerů sledovaných klinicky významných infekcí u dobrovolných dárců krve
Dušková, Daniela ; Tesař, Vladimír (vedoucí práce) ; Borovanský, Jan (oponent) ; Průša, Richard (oponent)
Název práce: Nastavení optimálního režimu vyšetřování markerů sledovaných klinicky významných infekcí u dobrovolných dárců krve Autor práce: MUDr. Daniela Dušková Vedoucí práce: prof. MUDr. Vladimír Tesař, Dr.Sc., MBA, FASN Tato disertační práce si klade za cíl přispět k diskuzi o rozšíření rutinního screeningového vyšetřování dárců krve v zařízeních transfuzní služby v České republice zavedením přímého vyšetřování vybraných infekčních agens molekulárně biologickými metodami. V úvodu teoretické části je připomenut stručným pohledem do historie vývoj a přelomové události v transfuzní medicíně. Následuje část věnovaná problematice infekčních chorob souvisejících s transfuzí a obecným vyšetřovacím postupům používaným v transfuzní medicíně při výběru dárců krve. Závěr teoretické části je věnován stávajícím možnostem screeningových testů pro vyšetřování infekčních markerů u dárců krve, včetně přehledu postupů, které jsou používané v České republice, Evropské unii a dalších vybraných státech. V praktické části je popsána prováděná studie, tj. screeningové vyšetřování souboru dárců krve rutinní vyšetřovací metodou (CMIA) a molekulárně biologickými metodami (RT-Real Time PCR) na přítomnost markerů HCV, HBV a HIV. Jsou popsány principy obou metod a vlastní postup vyšetřování v rámci studie. Je uveden souhrn...
|
|
|
Stanovení koncentrace alfa-1-antitrypsinu ve stolici imunoanalytickou metodou
Plačková, Marie ; Kocna, Petr (vedoucí práce) ; Průša, Richard (oponent)
Stanovení koncentrace α1 - antitrypsinu ve stolici je diagnostickým ukazatelem zánětlivých onemocnění tenkého a tlustého střeva, zejména malabsorpčního syndromu. α1 - antitrypsin patří mezi skupinu plazmatických bílkovin s antiproteinázovým účinkem. Je syntetizován především v játrech, v malém množství v makrofázích jako antiproteáza fyziologicky inhibuje serinové proteázy neutrofilů. Z jater je uvolňován do krevního řečiště. α1 - antitrypsin je reaktant akutní fáze. Při zánětlivé reakci je tvorba α1 - antitrypsinu v játrech stimulována protizánětlivými vytokány. Vzestup hladiny v časné fázi zánětu koreluje s CRP a dalšími pozitivními proteiny akutní fáze. Jako spolehlivý senzitivní a specifický marker ztráty proteinů může být clearence α1 - antitrypsinu ve stolici. Stanovení α1 - antitrypsinu ve stolici lze provádět technikami ELISA, což je nekompetitivní enzymoimunoanalýza sloužící k detekci protilátek, u níž je využita schopnost imunoglobulinů vázat se na povrch umělých hmot (např. polystyrenu) a schopnost vázat enzymy na těžké řetězce imunoglobulinových molekul. Cílem práce bylo porovnat komerční sety pro imunoanalytické stanovení koncentrace α1 - antitrypsinu ve stolici metodou ELISA, a to sety firmy Immundiagnostik a Ridascreen. Dále pak zjistit stabilitu α1 - antitrypsinu ve vzorku stolice a...
|
|
|
Studium změn proteinů u pacientů s nefrotickým syndromem a Andersonovo-Fabryho chorobou
Vojtová, Lucie ; Zima, Tomáš (vedoucí práce) ; Teplan, Vladimír (oponent) ; Průša, Richard (oponent)
Úvod: Závažná proteinurie může být způsobena jednak zvýšenou permeabilitou glomerulární bazální membrány, porušením struktury membrány či podocytů, tak také porušením sekrečně-reabsorpčních tubulárních procesů. Metodou 2D elektroforézy jsme analyzovali 60 pacientů s nefrotickou proteinurií a jinými diagnózami (lupusová nefritida, membranózní nefropatie, IgA nefropatie, Wegenerova granulomatóza) a 20 pacientů s Andersonovo-Fabryho chorobou (AFD), jenž je X-vázané genetické onemocnění postrádající aktivitu α-galaktozidázy A. Hlavním cílem této práce bylo nalézt možné rozdíly močových proteinů u nefropatií, mezi zdravými kontrolami a AFD pacienty a identifikovat abnormální proteiny jako potenciální biomarkery nemoci. Metodika: Močové proteiny byly děleny metodou izoelektrické fokusace s použitím polyakrylamidových stripů (pH 3-10 lineární). SDS elektroforéza byla provedena v 12% polyakrylamidovém gelu. Proteiny byly vizualizovány stříbrem a identifikovány MALDI- TOF MS. Gely byly hodnoceny softwarem Phoretix 2D expression verze 2005. Výsledky: Zjistili jsme, že bez přídavku inhibitorů proteáz můžeme detekovat proteolýzu se zvýšeným množstvím proteinů nacházejících se v oblasti kolem 10 kDa a sníženým množstvím proteinů vyskytujících se v oblasti kolem 50 kDa. Odstranění albuminu zlepšilo přehlednost...
|
|
|
Proteiny v těhotenství - molekulárně biologická a biochemická analýza
Muravská, Alexandra ; Kalousová, Marta (vedoucí práce) ; Černá, Marie (oponent) ; Průša, Richard (oponent)
Cílem této disertační práce bylo zavést metodiky analýzy vybraných polymorfizmů genu PAPP-A (Pregnancy-Associated Plasma Protein A) a studovat genetické pozadí genu PAPP-A a sérové koncentrace PAPP-A a PlGF (Placental Growth Factor) ve vztahu k patologickému těhotenství. Dalším cílem bylo zavést metodiku dvourozměrné (2D) elektroforézy plodové vody. Byla zavedena metoda na analýzu deseti polymorfizmů genu PAPP-A. Tyto polymorfizmy, sérové koncentrace PAPP-A a plasmatické koncentrace PlGF byly studovány u celkově 165 těhotných pacientek ve třetím trimestru gravidity s hrozícím předčasným porodem (N=98), preeklampsií (N=35), růstovou retardací plodu IUGR (N=34) a benigní těhotenskou cholestázou (N=15). 114 zdravých těhotných žen sloužilo jako kontroly. V rámci této práce byla zavedena 2D elektroforéza plodové vody. U pacientek s preeklampsií jsme nalezli signifikantně častější výskyt genotypu TT polymorfizmu Cys327Cys (C/T) genu PAPP-A v porovnání s kontrolami. Pacientky s těhotenskou cholestázou vykazovaly trend k zvýšeným hladinám PAPP-A, kdežto u pacientek s hrozícím předčasným porodem byly tyto hodnoty spíše nižší. U pacientek s těhotenskou cholestázou a hrozícím předčasným porodem se hladiny PlGF nelišily od kontrolní skupiny. Pozitivní korelace PlGF s hladinami PAPP-A byla nalezena u skupiny...
|
|
|
Význam stanovení SAA a porovnání s CRP a prokalcitoninem
Daňková, Michaela ; Zadina, Jiří (vedoucí práce) ; Průša, Richard (oponent)
Bakalářská práce se zabývá významem stanovení sérového amyloidu A (SAA) u vybraných skupin pacientů a porovnání s C-reaktivním proteinem (CRP) a prokalcitoninem (PCT). SAA, CRP a PCT jsou proteiny akutní fáze, které vykazují významný vzestup koncentrace v krvi během několika hodin po zánětovém stimulu. Syntéza probíhá v játrech a je vyvolána prozánětlivými cytokiny. CRP je nejstarší a v rutinní praxi nejpoužívanější reaktant akutní fáze. SAA a hlavně prokalcitonin patří mezi novější ukazatele zánětu. SAA není tak často využívaný v diagnostice, přestože je stejně senzitivním reaktantem akutní fáze jako CRP, protože teprve v nedávné době byla vyvinuta metoda vhodná k rutinnímu stanovení. Teoretická část práce stručně popisuje proteiny akutní fáze a podrobněji se soustředí na charakteristiku a srovnání SAA, CRP a PCT. V další části jsou popsány metody stanovení jednotlivých analytů. Experimentální část je zaměřena na charakteristiku vybraného souboru pacientů a metodiku měření SAA imunonefelometrickou metodou na biochemickém analyzátoru Immage 800. Získaná data u tří vybraných skupin pacientů byla statisticky vyhodnocena. Cílem práce bylo zhodnotit korelaci zánětlivých markerů u dvou vybraných skupin a u třetí skupiny porovnat hladiny CRP a SAA u obézních pacientek a zdravé kontrolní skupiny.
|
|
|
Stanovení interindividuelní variability ELISA testu pankreatické elastázy ve stolici.
Mrňák, David ; Kocna, Petr (vedoucí práce) ; Průša, Richard (oponent)
Hlavním zájmem této práce je určení hodnot pankreatické elastázy 1 ve stolici. Určení hodnot pankreatické elastázy 1 je důležité pro zjištění funkčnosti exokrinního pankreatu a má vysokou specificitu i senzitivitu. Je využívána k dlouhodobému sledování pacientů s chronickou insuficiencí pankreatu, dále jako screeningový test onemocnění pankreatu a u diferenciální diagnostiky malabsorbčního syndromu. Hodnotu pankreatické elastázy 1 ve stolici můžeme stanovit pomocí ELISA metody. Princip metody ELISA(enzyme linked immunoassay) je založen na sandwichové reakci se dvěma monoklonálními protilátkami vysoce specifickými proti lidské pankreatické elastáze 1. Cílem této práce je zjistit míru variability hodnot pankreatické elastázy 1 u skupiny zdravých jedinců. Tato studie bude prováděna na čtyřech jedincích a jejich vzorky stolice budou v měsíčních intervalech po dobu půl roku vyšetřovány pomocí metody ELISA. ELISA metoda byla zpracována pomocí setu od firmy ScheBo®. Po zpracování celého půlročního testu je jasné, že výkyvy hodnot pankreatické elastázy 1 u dané skupiny jsou velké. Hodnoty rozdílu mezi jednotlivými měřeními u dvou vyšetřovaných osob přesáhly hranici 70 procent. Variační koeficient se u vyšetřovaných pohyboval v rozmezí od 16,6 % do 27,7 % s průměrem 22,7 % a mediánem 23,3 %. Druhá část této...
|
host ::
RSS.