Národní úložiště šedé literatury Nalezeno 152 záznamů.  1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam: Hledání trvalo 0.00 vteřin. 
Detailní charakterizace chirálních stacionárních fází na bázi makrocyklických glykopeptidů v SFC
Folprechtová, Denisa ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent) ; Kohout, Michal (oponent)
Mezi klíčové faktory úspěšné enantioseparace v chromatografických metodách patří především volba vhodné chirální stacionární fáze. Makrocyklické glykopeptidy jsou chirální selektory, které vzhledem ke své unikátní struktuře umožňují interagovat s analytem různými typy interakcí současně, což přispívá k jejich komplexnímu retenčnímu a enantiodiskriminačnímu mechanismu. Makrocyklické glykopeptidy jsou hojně využívanými chirálními stacionárními fázemi v kapalinové chromatografii, ale dosud nebyly podrobně testovány v systémech sub/superkritické fluidní chromatografie, která v současnosti patří k významným separačním technikám z hlediska chirálních analýz. Proto je cílem této disertační práce podrobná charakterizace enantiodiskriminačních a retenčních mechanismů chirálních stacionárních fází na bázi makrocyklických glykopeptidů vázaných na "core-shell" částicích, tj. TeicoShell, VancoShell a NicoShell kolon v systémech sub/superkritické fluidní chromatografie. Nejprve byl podrobně studován vliv složení mobilní fáze, především typ a množství organických modifikátorů a aditiv, na jednotlivé chromatografické parametry, tj. retence, rozlišení enantiomerů a tvary píků prostřednictvím vybrané sady strukturně odlišných biologicky významných chirálních sloučenin a materiálů. Na základě získaných výsledků byl...
On-line derivatizace sacharidů v kapilární elektroforéze
Mareš, Vít ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Sacharidové řetězce glykoproteinů mohou podléhat různým chybám při jejich bi- osyntéze, které ovlivňují jejich biologické funkce, proto jich může být využito v diagnóze některých onemocnění nebo kontrole kvality biofarmaceutik, konkrét- ně monoklonálních protilátek, které také obsahují tetramerní glykoproteiny. Při diagnóze těchto poruch má potencionální využití kapilární elektroforéza. V této práci byla vyvíjena metoda on-line derivatizace sacharidů v křemenné kapiláře o délce 50 cm a o vnitřním průměru 50 µm. Jako modelová molekula byla použita glukóza, která byla značena fluorescenčním derivatizačním činidlem, 7-aminonaftalen-1,3-disulfonovou kyselinou. Metodu derivatizace glukózy a její separaci bylo potřeba optimalizovat. Nejprve byla zjištěna elektroforetická po- hyblivost derivatizačního činidla v 0,5; 1,0 a 2,5M koncentracích kyseliny octové a v 20mM fosfátovém pufru, pH = 3,5. Jako rozpouštědlo pro 7-aminonaftalen- 1,3-disufonovou kyselinu byly vyzkoušeny 2,5M kyselina octová i 20mM fosfátový pufr se záměrem sjednotit reakční a separační prostředí, což se ukázalo jako ne- realizovatelné. Byly zjištěny efektivní pohyblivosti ve zmíněných roztocích. Nej- lépe probíhala reakce s glukózou v prostředí kyseliny octové. Pro separaci bylo zjištěno, že nejvhodnějším základním elektrolytem je naopak...
Stanovení glutathionu v rostlinných vzorcích pomocí kapilární elektroforézy
Skála, Michael ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato práce vychází z dříve publikované metody pro stanovení obou forem glutathionu pomocí kapilární zónové elektroforézy opatřené UV spektrometrickým detektorem. Teoretická část popisuje biologické a biochemické funkce glutathionu. Dále teoretická část shrnuje historické metody stanovení glutathionu, jejich přesnost, správnost a spolehlivost se speciálním zaměřením na metody elektroforetické, a zvláště pak na kapilární zónovou elektroforézu. Je popsán princip kapilární zónové elektroforézy. Také řeší problematiku různých typů vzorků, speciálně pak rostlinné vzorky. Na závěr uvádí metodu pro stanovení redukované a oxidované formy glutathionu, ze které tato práce vychází. V praktické části je popsán postup vývoje a optimalizace samotné metody. Nejprve bylo testováno složení základního elektrolytu, jeho iontová síla, byly porovnávány dva elektrolyty - s NaCl a bez NaCl, byly pozorovány minimální rozdíly, proto byl NaCl ze základního elektrolytu vyloučen. Dále byla určována optimální koncentrace hexadimethrin bromidu. Byl sledován vliv koncentrace hexadimethrin bromidu na rychlost elektroosmotického toku. Byla sestavena kalibrační křivka pro různé koncentrace analytů ve vodě, byla zjištěna opakovatelnost, LOD a LOQ. Následně byla určována pozice píků v elektroferogramech reálného vzorku extraktu z...
Stanovení bitrexu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Fuková, Kateřina ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
V rámci této práce byla vyvinuta metoda pro stanovení bitrexu (denatonium benzoát) pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Pro stanovení byla použitá kolona Kinetex C18 (Phenomenex) s rozměry 100×2,1 mm a velikostí částic 1,7 μm. Jako mobilní fáze byla použita směs acetonitrilu s 0,1 % kyselinou mravenčí (složka A) a deionizované vody s 0,1 % kyselinou mravenčí (složka B). Poměr obou složek se v průběhu separace měnil na základě gradientového programu. Nejlepší separace bylo dosaženo při gradientovém programu: 0-2 min: 20 % → 70 % A (obj. %); 2-3 min: 70 % A (obj. %); 3-3,5 min: 70 % → 20 % A (obj. %); 3,5-5 min: 20 % A (obj. %). Teplota kolony během separace byla 40 řC a průtok mobilní fáze byl 0,3 ml/min. Metoda byla následně částečně validována. Byly proměřeny kalibrační křivky, byla měřena opakovatelnost, byla ověřena linearita metody při objemu nástřiku vzorku 1 μl a 5 μl. Poté byl pro stejné objemy nástřiku určen limit detekce a limit stanovitelnosti. Pomocí vyvinuté metody byly proměřeny reálné vzorky obsahující biterex. Tyto vzorky se však lišily v matrici. Jednalo se o pět chladicích kapalin, čistič na sklo a prací gel na černé prádlo. V chladicí kapalině Carline Antifreeze G13 (výrobce OMA CZ) byla koncentrace bitrexu experimentálně stanovena na hodnotu 23,4 ppm. V chladicí...
Modifikace vnitřního povrchu kapilár pro elektroforetické separace liposomů
Píplová, Renata ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Čokrtová, Kateřina (oponent)
Elektroosmotický tok je jedním z hlavních faktorů, jež ovlivňují rozlišení separací v kapilární elektroforéze a často je nutná jeho modifikace. Jedním ze způsobů modifikace elektroosmotického toku je dynamické nebo permanentní pokrývání vnitřního povrchu kapiláry. Při separacích liposomů může taková modifikace navíc zmírnit jejich tendenci adsorbovat se na povrch kapiláry. Cílem práce bylo najít stabilní pokrytí, které bude dostatečně eliminovat elektroosmotický tok a otestovat jeho vliv na separace liposomů. Nejprve bylo testováno dynamické pokrytí kapiláry polymery Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidon K30, polydialyldimethylamonium chlorid, polyethylenglykol a polyvinyalkohol pomocí čtyř různých metod pokrývání. Jednotlivé polymery a metody se lišily mírou potlačení elektroosmotického toku i stabilitou pokrytí. Z dynamických modifikací byla pro další testování separací liposomů zvolena pokrytí polymery Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidon K30 a polydialyldimethylamonium chlorid. Liposomy s fluorescenční značkou byly separovány kapilární elektroforézou s laserem indukovanou fluorescenční detekcí a v jednotlivých pokrytích pak byla určena jejich mobilita. Nejvhodnější pro separace liposomů se jevilo pokrytí polymerem polyvinylpyrrolidon K30, ve kterém docházelo k nejmenším interakcím s liposomy v...
Chemická modifikace glykopeptidů a predikce jejich retenčního chování při hydrofilní kapalinové chromatografii
Pála, Anastasie ; Ječmen, Tomáš (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
4 Abstrakt Glykoproteiny jsou nedílnou součástí mnoha buněčných dějů, bez kterých by komplexní život vyšších organismů nebyl možný. Glykoproteiny mají význam také pro klinické účely, neboť změny fyziologického stavu způsobené nemocemi vyvolávají změny v proteinové glykosylaci. Změny v hojnosti glykosylace či strukturách syntetizovaných glykanů jsou asociované s mnoha nemocemi jako Alzheimerova choroba či rakovina, a mohou proto sloužit jako diagnostické biomarkery. Pro studium glykoproteinů se užívá několika analytických postupů. Jedním z nich je analýza glykopeptidů proteolyticky štěpených glykoproteinů. Tento postup umožňuje analýzu glykoproteinů i v komplexních směsí, jako jsou biologické vzorky, neboť glykanové zbytky jsou stále připojené na svá glykosylační místa. Je tedy možné identifikovat glykoproteiny včetně jejich glykanových struktur, což v případě jiných analytických postupů není vždy možné. Pro analýzu glykopeptidů se hojně využívá kapalinová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií. Jako separační mód je v glykoproteomice pro schopnost rozdělovat glykopeptidy s odlišnými glykanovými strukturami hojně užívaná hydrofilní interakční chromatografie. V této práci byl separační mód využit pro separaci glykopeptidů modelových glykoproteinů imunoglobulinu G1 a G1. Peptidová páteř glykopeptidů...
Vliv elučního roztoku na obohacení a přečištění glykopeptidů pomocí SPE-HILIC
Chobotová, Michaela ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Změny v glykosylaci proteinů souvisejí s různými nemocemi jako je rakovina nebo Alzheimerova choroba. Bohužel, analýza glykoproteinů zůstává obtížným úkolem kvůli nízkému podílu glykopeptidů ve srovnání s peptidy získanými po štěpení glykoproteinu. V důsledku toho je téměř nemožné analyzovat glykopeptidy bez specifických kroků obohacení. Vhodnou metodou na obohacení glykopeptidů je extrakce na pevné fázi (SPE) využívající princip hydrofilní interakční kapalinové chromatografie (HILIC). Jelikož výběr rozpouštědla významně ovlivňuje obohacení glykopeptidů, cílem této diplomové práce bylo porovnat vliv různých rozpouštědel na účinnost extrakce glykopeptidů pomocí SPE-HILIC. Extrakce byla prováděna na kolonce s oxidem křemičitým modifikovaným aminopropylovými skupinami. Modelovými analyty byly glykopeptidy získané tryptickým štěpením lisdkého IgG. Při porovnání acetonitrilu, methanolu a isopropanolu byl jako vhodné eluční rozpouštědlo vybrán acetonitril. Při kondicionačním a promývacím kroku byl měněn obsah acetonitrilu (65%, 75% a 85%), přičemž se snižujícím se množstvím acetonitrilu se zrychluje eluce glykopeptidů. V elučním kroku byla zkoumána účinnost různého obsahu acetonitrilu (5%, 10% a 20%), kdy k nejrychlejší eluci docházelo při nejvyšším obsahu acetonitrilu v elučním roztoku. Zkoumání různého...
Produkce a charakterizace nových aryl-sulfotransferas a jejich využití v bioanalytice
Petránková, Barbora ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Polyfenolové látky jsou nejrozšířenější přírodní látky nacházející se v potravě. Největší skupinu tvoří flavonoidy, fenolové kyseliny a katecholy. Polyfenoly jsou v organismu metabolizovány v rámci II. fáze biotransformace, můžou být sulfatovány, glukuronylovány nebo methylovány. Pro studium biotransformace je potřeba mít definované standardy. Sulfatované polyfenoly můžeme připravit pomocí enzymové sulfatace, která má mnohem mírnější reakční podmínky oproti chemické. Prokaryotické sulfotransferasy využívají k sulfataci jako donor sulfátu 3'-fosfoadenosin-5'-fosfosulfát (PAPS), který je však velmi drahý a obtížně se regeneruje. Alternativou jsou bakteriální aryl-sulfotransferasy (EC 2.8.2.22), které katalyzují přenos sulfátové skupiny z fenolového donoru na fenolový akceptor. V literatuře byly doposud popsány dvě bakteriální aryl-sulfotransferasy z Desulfitobacterium hafniense a Escherichia coli. Předkládaná práce se zabývá produkcí, purifikací a biochemickou charakterizací dvou nových bakteriálních aryl-sulfotransferas z Desulfosporosinus sp. HMP52 a Salmonela bongori. Enzymy byly heterologně exprimovány v E. coli a purifikovány pomocí afinitní chromatografie. V rámci biochemické charakterizace bylo stanoveno jejich pH a teplotní optimum, stabilita v organických rozpouštědlech a různých teplotách a...
Rozšíření umělé inteligence DeepReI a její aplikace v praxi
Hurychová, Nikola ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Diplomová práce se zabývá rozšířením umělé inteligence DeepReI o predikci retenčních indexů látek v plynové chromatografii pro standardní nepolární a polární stacionární fázi. V teoretické části je obecně popsána umělá inteligence, konvoluční neuronové sítě a princip učení neuronových sítí. Je zde i stručný přehled aplikací neuronových sítí v analytické chemii. V experimentální části byl původní model DeepReI rozšířen o predikci retenčních indexů látek pro standardní nepolární a polární stacionární fáze. Dále bylo dosaženo přesnější predikce retenčních indexů látek pro semistandardní nepolární stacionární fázi oproti dostupným modelům. Aplikovatelnost modelu při identifikaci neznámých látek byla ověřena necílenou analýzou nealkoholických piv pomocí plynové chromatografie s hmotnostní detekcí.
Srovnání detekčních technik pro analýzu sacharidů kapilární elektroforézou
Vlčková, Nikol ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Cílem této práce bylo porovnat detekční techniky kapilární elektroforézy pro stanovení sacharidů. Byly porovnávány bezkontaktní vodivostní detekce, přímá a nepřímá UV detekce a fluorescenční detekce. Sacharidy, které byly stanovovány byly glukóza, sacharóza a fruktóza. Měření s bezkontaktní vodivostní detekcí byla prováděna na kapiláře dlouhé 50 cm s vnitřním průměrem 20 µm. Napětí vložené na kapiláru bylo 15 kV a její teplota byla 25 řC. Jako základní elektrolyt byl použit 40mM NaOH. Kalibrační závislost byla měřena v koncentračním rozmezí 0,005 - 0,5 mg/ml. Opakovatelnost pro plochy píků a migrační časy a výtěžnost byly měřeny ve dvou koncentračních hladinách (0,02 a 0,2 mg/ml). Hodnoty RSD pro opakovatelnosti ploch píků a migračních časů se pohybovaly v rozmezí 0,01 - 8,64 %. Hodnoty pro limity detekce a kvantifikace se pohybovaly v rozmezí 1,0 - 5,8 µg/ml. Odchylky výtěžnosti od skutečné koncentrace analytů se pohybovaly mezi 7 - 22 %. Metody s UV nebo fluorescenční detekcí byly prováděny v kapilárách o vnitřním průměru 50 µm. Při metodě s nepřímou UV detekcí bylo napětí vložené na kapiláru 28 kV a její teplota byla 30 řC. Vlnová délka měření byla 207 nm a jako základní elektrolyt byl použit 50mM glycylglycin o pH 12,8. Kalibrační závislost byla měřena v koncentračním rozmezí 0,1 - 1 mg/ml....

Národní úložiště šedé literatury : Nalezeno 152 záznamů.   1 - 10dalšíkonec  přejít na záznam:
Viz též: podobná jména autorů
15 Křížek, Tomáš
Chcete být upozorněni, pokud se objeví nové záznamy odpovídající tomuto dotazu?
Přihlásit se k odběru RSS.