|
|
VÝVOJ METOD VYSOKOÚČINNÉ KAPALINOVÉ CHROMATOGRAFIE KE STANOVENÍ VÝZNAMNÝCH SLOŽEK TABÁKU
Rozkovcová, Lucie ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Záměrem této práce bylo vytvoření metody kapalinové chromatografie s DAD detekcí pro stanovení nikotinu v tabáku. Jako kontrolní metoda byla zvolena plynová chromatografie s upraveným pracovním postupem podle Světové zdravotnické organizace. Kapalinová chromatografie s optimalizovanými podmínkami je vhodnou metodou pro stanovení nikotinu v tabáku. Bylo dosaženo limitu detekce 0,0003 mg/ml a limitu stanovitelnosti 0,0010 mg/ml. Významnou částí práce byla optimalizace přípravy vzorku tabáku pro stanovení nikotinu. Oproti používaným postupům byl vytvořen relativně nenáročný pracovní postup přípravy vzorku. Stanovení nikotinu probíhalo z reálných vzorků tabáku, metoda byla také vyzkoušena na nikotinové náplni do elektronických cigaret, cigaretovém tabáku a na hrubém dýmkovém tabáku. U všech typů vzorků bylo dosaženo uspokojivých relativních směrodatných odchylek stanovení. Dále byla studována metoda stanovení polyfenolických látek vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s detektorem diodového pole. Z vybraných pěti analytů kyseliny chlorogenové, kyseliny kávové, rutinu, skopoletinu a quercitrinu metoda vykazovala největší citlivost pro kyselinu chlorogenovou a kyselinu kávovou. Pro všechny analyty bylo dosaženo nízkých limitů detekce a stanovitelnosti. Klíčová slova Kapalinová chromatografie, tabák,...
|
|
|
Stanovení kyseliny barbiturové pomocí techniky SIA se spektrofotometrickou detekcí
Horáková, Jana ; Hraníček, Jakub (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Předložená diplomová práce se zabývá stanovením kyseliny barbiturové pomocí průtokové injekční analýzy a sekvenční injekční analýzy se spektrofotometrickou detekcí. Pro stanovení kyseliny barbiturové byly vybrány dva postupy, ve kterých byly zjištěny optimální podmínky pro její stanovení. U průtokové injekční analýzy byly zjišťovány optimální koncentrace reagencií, optimální průtoková rychlost, optimální objem dávkovaného vzorku a optimální objem reakční cívky. V případě sekvenční injekční analýzy byly zjišťovány stejné parametry s výjimkou optimálního objemu reakční cívky, který byl nahrazen optimální dobou setrvání v mísící cívce. Při stanovení kyseliny barbiturové pomocí reakce s o-nitroanilinovou směsí bylo za optimálních podmínek dosaženo lineární závislosti v rozmezí 2,0.10-6 až 1,2.10-4 mol dm-3 při použití FIA metody a 3,9.10-6 až 6,2.10-5 mol dm-3 v případě použití SIA metody. Při stanovení kyseliny barbiturové pomocí inhibice rozkladu methyloranže vznikajícími halogeny bylo dosaženo za optimálních podmínek lineární závislosti v rozmezí 5.10-6 až 3.10-5 mol dm-3 při použití FIA metody a 2.10-5 až 1.10-4 mol dm-3 při použití SIA metody. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Elektroforéza v krátké kapiláře s duální detekcí.
Kaliba, David ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Kapilární zónová elektroforéza je analytická metoda, která je hojně využívána v laboratořích při řešení řady analytických problémů. Tato diplomová práce popisuje jedno z mnoha využití kapilární elektroforézy v unikátní instrumentální sestavě tvořené krátkou kapilárou a duálním detektorem kombinujícím bezkontaktní vodivostní a optickou UV detekci v jednom místě separační kapiláry. V první části byla laboratorní sestava testována separací jednoduchých anorganických a organických iontů. Testovány byly obě části duálního detektoru pomocí sodných, draselných, tyraminových a histidinových iontů. Experimentálně zjištěné mobility použitých iontů byly srovnány s mobilitami vypočtenými z tabelovaných hodnot. V druhé části byla sestava vyzkoušena při analýze látek ve složitějších reálných matricích, tvořených lékovými formami Acylcoffinu a B-komplexu od společnosti Zentiva, a.s. Z každé lékové formy byl vybrán jeden analyt, kofein z Acylcoffinu a thiamin z B-komplexu, u kterého byla některou z kalibračních metod stanovena jeho koncentrace. Koncentrace vybraného analytu byla následně srovnána s deklarovanou hodnotou uvedenou výrobcem lékové formy. Klíčová slova: kapilární elektroforéza; krátká kapilára; bezkontaktní vodivostní detekce; UV detekce; biologicky aktivní látky.
|
|
|
Optimalizace podmínek pro stanovení trimethylsilylfosfátů pomocí GC-MS
Blechová, Karolína ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Fosfolipidy jsou důležitou součástí buněčných membrán, kde vytváří dvojvrstvy, které jsou charakteristické pro jednotlivé skupiny bakterií. Vlivem prostředí se mohou měnit růstové a produkční vlastnosti bakterie, které je možné sledovat změnou zastoupení fosfolipidů v membráně. K identifikaci a stanovení bakteriálních fosfolipidů se běžně využívá tenkovrstvá nebo kapalinová chromatografie. Pro stanovení polárních částí fosfolipidů byla použita plynová chromatografie. Metoda slouží jak k identifikaci, tak k určení celkového zastoupení polárních částí (fosfát, fosfoglycerol, fosfoethanolamin a fosfoserin) v molekule. Před vlastní analýzou je nutné polární části derivatizovat. Princip zvolené derivatizace spočívá v použití dvou různých silylačních činidel. K nalezení optimálních podmínek přípravy vzorků byl použit chemometrický postup označovaný jako experimentální design, který umožňuje určit faktory a jejich kombinace, které mají na zkoumanou odpověď největší vliv. Cílem bakalářské práce je vývoj a statistická optimalizace přípravy vzorku pro identifikaci standardů fosfátu a fosforylovaných sloučenin (fosfoglycerol, fosfoethanolamin a fosfoserin) z cytoplazmatické membrány bakterie Bacillus subtilis. Klíčová slova optimalizace, derivatizace, silylace, biologicky významné fosfáty, plynová chromatografie
|
|
|
Využití HPLC a LC-MS/MS metod v diagnostice dědičných metabolických poruch
Bártl, Josef ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
V rámci této disertační práce byly vyvinuty a optimalizovány metody kapalinové chromatografie (HPLC) a tandemové hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS) a následně využity pro diagnostiku dědičných metabolických poruch. První tematický okruh popisuje zavedení komplexního laboratorního postupu pro diagnostiku pacientů s dědičnou xanthinurií využívající kvantifikaci klíčových biochemických markerů a stanovení aktivity enzymu v plazmě. Pro tyto účely byla zavedena HPLC metoda s detekcí diodového pole pro kvantifikaci hypoxanthinu, xanthinu, allopurinolu a oxypurinolu v moči a plazmě a metoda pro stanovení pterinu a isoxanthopterinu v plazmě využívající HPLC separaci a detekci látek fluorimetrickým detektorem. Tyto metody byly úspěšně aplikovány v klinické praxi při diagnostice dvou pacientů s xanthinurií I. typu. Druhý tematický okruh je věnován vývoji a klinické aplikaci LC-MS/MS metody pro kvantitativní stanovení celkového homocysteinu (tHcy), methioninu (Met) a cystathioninu (Cysta) v suché krevní kapce a plazmě. Bylo prokázáno, že tato metoda dokáže detekovat pacienty s homocystinurií a zároveň rozlišit na základě koncentračních poměrů jednotlivých analytů, zda je porucha v transsulfurační či remethylační části metabolismu homocysteinu. Díky jednoduchému odběru a transportu vzorku suché krevní kapky...
|
|
|
Identifikace a kvantifikace biomarkerů chorob zažívacího traktu pomocí hmotnostní spektrometrie
Pospíšilová, Veronika ; Španěl, Patrik (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
7 Abstrakt Tématem této diplomové práce je identifikace a stanovení těkavých metabolitů v dechu, jež by mohly sloužit jako biomarkery refluxní choroby jícnu. Byl proveden experiment, kdy zvířecí tkáň byla vystavena podmínkám napodobujícím prostředí žaludku za účelem identifikace specifických těkavých látek, které by byly dále vybrány pro stanovení v reálném čase v dechu pacientu trpících gastroezofageálním refluxem a to za použití hmotnostní spektrometrie v proudové trubici s vybranými ionty. Headspace vzorku bylo analyzováno technikou mikroextrakce na tuhé fázi a plynovou chromatografií s hmotnostně spektrometrickou detekci. Byla pozorována zvýšená hladina koncentrace kyseliny octové, která byla vybrána jako potencionální biomarker. Její koncentrace byla stanovena pomocí SIFT-MS v dechu pacientu s GERD a v dechu kontrolní skupiny pro zjištění jejího fyziologického rozsahu v dechu. Medián koncentrace kyseliny octové v dechu pacientu (85 ppbv) byl výrazně vyšší v porovnání s kontrolní skupinou (31 ppbv), což poukazuje na to, že by kyselina octová mohla sloužit jako užitečný marker při diagnostice a monitoringu refluxní choroby jícnu.
|
|
|
Stanovení vybraných komponent v lidské moči elektroforézou v krátké kapiláře.
Makrlíková, Anna ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Kapilární zónová elektroforéza má široké uplatnění v různých analýzách. V této práci byl navržen hydrodynamický způsob zavedení vzorku do krátké elektroforetické kapiláry řízený tlakovým pulsem. Separační pufr promývá dávkovací smyčku šesticestného ventilu a zóna vzorku je nesena k dávkovacímu konci kapiláry. V čase, kdy se zóna vzorku nachází u vstupu do kapiláry, je v toku elektrolytu generován krátký tlakový puls, což vede k nadávkování vzorku do kapiláry. Následně je tok elektrolytu zastaven a současně je zapnuto separační napětí. Množství nadávkovaného vzorku je závislé na době trvání tlakového pulsu. Tato nově vyvinutá metoda byla testována pro stanovení amonných iontů, histidinu, kreatininu, kyseliny močové a kyseliny hippurové v lidské moči a pro rychlé sledování anorganických iontů v mozkomíšním moku a krevní plazmě. Stanovení bylo provedeno v kapiláře o celkové délce 10,5 cm a vyzkoušeny byly dva separační elektrolyty - 50 mM MES + 5 mM NaOH (pH 5,10) a 1 M kyselina octová + 1,5 mM crown ether 18-crown-6 (pH 2,40). Použitím duální detekce, bezkontaktní vodivostní a spektrometrické UV detekce, bylo možno současně detegovat anorganické i organické látky ve vzorku. Klíčová slova Kapilární elektroforéza, krátká kapilára, hydrodynamické dávkování, duální detekce, amonné ionty, histidin,...
|
|
|
Use of the modern separation techniques for the analysis of insect pheromones
Žáček, Petr ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
(ČJ) Komunikace zprostředkovaná chemickými sloučeninami (semiochemikáliemi) je hlavní způsob dorozumívání se u hmyzu, zvláště pak hmyzu společenského. Metody plynové chromatografie v jednorozměrném, dvourozměrném komprehensivním a preparativním uspořádání spojené s hmotnostním a/nebo elektroantenografickým detektorem byly použity ke studiu těkavých nebo středně těkavých semiochemikálií u různých druhů hmyzu. V rámci této práce byla zkoumána biosyntéza pohlavního feromonu u samců čmeláků druhů Bombus terrestris, B. lucorum a B. lapidarius pomocí aplikace předpokládaných biosyntetických prekurzorů feromonů (octan sodný, vyšší mastné kyseliny) izotopicky značených atomy 2 H a 14 C. Pro tento účel bylo zkoumáno chromatografické chování a možnosti detekce izotopicky značených sloučenin v jednorozměrném a dvourozměrném komprehensivním systému (2 H, 13 C). U všech testovaných kolon byl pro sloučeniny značené oběma izotopy potvrzen "inverzní izotopický efekt". Vyvinuté analytické postupy byly aplikovány na reálné vzorky čmeláků. Analýza extraktů tkání čmeláků druhů B. terrestris a B. lucorum po in vitro inkubaci se značeným octanem sodným dokázala přítomnost značených metabolitů a potvrdila tak možnost de novo biosyntézy feromonu přímo v labiální žláze. Značené metabolity byly nalezeny i v případě in vivo...
|
|
|
Kapilární elektroforéza s duální optickou a bezkontaktní vodivostní detekcí.
Kadlecová, Tereza ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Tato práce se zabývá duální detekcí organických a anorganických analytů po separaci kapilární zónovou elektroforézou. V první části se testují dva typy dávkování vzorku. Standardní hydrodynamické dávkování, používané v laboratorních elektroforetických aparaturách nejčastěji, spočívající ve zvednutí nádobky se vzorkem v níž je ponořen dávkovací konec kapiláry, a nový způsob hydrodynamického dávkování pomocí zvýšeného tlaku na hladinu vzorku bez pohybu kapiláry. Toto dávkování minimalizuje činnost experimentátora, protože je ovládáno softwarově. Experimentátor pouze vyměňuje nádobku se vzorkem při dávkování za nádobku se separačním elektrolytem při separaci. Hledá se nejlepší dávkovací čas a tlak pro separaci tak, aby bylo dosaženo co nejvyšší účinnosti a dostatečné citlivosti detekce. V druhé části diplomové práce je vyvinutá metoda testována při separaci aminokyselin v biologickém vzorku (moči).
|
|
|
Elektroforetické separace sacharidů v krátké kapiláře.
Vochyánová, Blanka ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Byl vyvinut nový laboratorní systém pro rychlé elektroforetické separace anorganických a organických iontů. Použita byla křemenná kapilára v kombinaci s bezkontaktní vodivostní detekcí. Základní funkce systému byly ověřeny na směsi anorganických iontů. Systém byl dále použit k separacím neutrálních mono- a disacharidů. Modelová směs obsahovala pět sacharidů (sacharózu, laktózu, glukózu, fruktózu a ribózu). Vyvinutá metoda byla použita ke stanovení sacharózy, glukózy a fruktózy v energetických nápojích.
|
host ::
RSS.