|
|
Studium vlivu overexprese ABC lékových transportérů na antiproliferační schopnosti vybraných konvenčních cytostatik
Malečová, Lucie ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Lucie Malečová Školitel: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vlivu overexprese ABC lékových transportérů na antiproliferační schopnosti vybraných konvenčních cytostatik Overexprese ABC lékových transportérů je jedním z mechanizmů rozvoje mnohočetné lékové rezistence, která je příčinou selhávání terapie u nádorových onemocnění. ABC transportéry jako ABCB1, ABCG2a ABCC1 mají široké spektrum substrátů, mezi kterými je i řada konvenčních cytostatik. Cílem této práce bylo popsat možný vliv overexprese zmíněných efluxních transportérů na antiproliferační účinky docetaxelu, etoposidu, paklitaxelu, methotrexátu, pemetrexedu, topotekanu a vinblastinu. Výsledky byly získány pomocí MTT testů prováděných na buněčných liniích MDCKII a A431 se/bez zvýšenou(é) expresí(e) studovaných transportérů. U pěti ze sedmi testovaných cytostatik byl pozorován pokles cytotoxicity v buňkách se zvýšenou expresí, pokaždé alespoň u jednoho z transportérů. Pouze topotekan byl vyhodnocen jako oběť rezistence zprostředkované všemi třemi testovanými transportéry. Pro ověření využitelnosti získaných výsledků jsem topotekan použila jako modelové cytostatikum v následné kombinační studii. V rámci této studie byly v...
|
|
|
Stanovení cytotoxicity léčiv s využitím různých testů buněčné viability
Kaňková, Kateřina ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlíková, Magdaléna (oponent)
V ČESKÉM JAZYCE Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Kateřina Kaňková Školitel: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Školitel-konzultant: doc. PharmDr. Ondřej Soukup, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení cytotoxicity léčiv s využitím různých testů buněčné viability V současné době metody buněčné viability jsou důležitou součástí preklinických studií. Existuje široké spektrum metod na různé bázi, které lze pro tyto účely použít. Cílem této práce je porovnání některých základních metod, jejich přesnost a selektivitu, výhody a nevýhody aplikace. Šest různých léčiv bylo proměřováno pěti metodami buněčné viability - kolorimetrické metody (MTT, krystalová violeť), fluorimetrické (propidium jodid, calcein-AM) a luminometrické (ATP) na CHO-K1 buněčné linii. Výstupem všech metod jsou hodnoty IC50 pro daná léčiva kvantifikující jejich cytotoxicitu vč. grafického znázornění měření a směrodatné odchylky. Na závěr jsou jednotlivé metody porovnány na základě získané zkušenosti při práci a informací získaných při teoretickém průzkumu literatury. Mezi nejvhodnější metody lze zařadit MTT a ATP esej. Kvůli problémům při měření (např. nevhodnost použití u adherentních linií) se jako méně vhodná metoda jeví calcein- AM. Jako nejméně vhodné metody se potom...
|
|
|
Studium interakcí vybraných cílených léčiv s ABC lékovými transportéry
Svobodová, Markéta ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Čečková, Martina (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Markéta Svobodová Školitel: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Studium interakcí vybraných cílených léčiv s ABC lékovými transportéry Nádorová onemocnění patří mezi jednu z nejčastějších příčin úmrtí a jejich výskyt se neustále zvyšuje. Léčba zahrnuje především kombinaci medikamentózní terapie s chirurgickou léčbou a radioterapií. Jedním z novějších přístupů s obrovským potenciálem je použití tzv. cílené protinádorové léčby, která specificky interaguje s nádorovými buňkami, čímž omezuje negativní dopady klasické chemoterapie. I přes nepřetržitý intenzivní výzkum nových přístupů v terapii se stále potýkáme s nedostatečnou odpovědí na léčbu. Hlavní příčinou selhání terapie je zejména vznik mnohočetné lékové rezistence (MDR) a tvorba metastáz. MDR fenomén souvisí nejčastěji s nadměrnou expresí ATP binding cassette (ABC) transportérů, které jsou zodpovědné nejen za nadměrný eflux protinádorových léčiv z buněk, ale také zásadním způsobem ovlivňují jejich farmakokinetiku. Inhibicí těchto transportérů dochází ke zvýšení intracelulární koncentrace cytostatika a možnosti modulovat MDR. Právě proto bylo jedním z cílů této práce prozkoumat inhibiční aktivitu třech nízkomolekulárních...
|
|
|
Stanovení cytotoxicity léčiv s využitím různých testů buněčné viability
Kaňková, Kateřina ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlíková, Magdaléna (oponent)
V ČESKÉM JAZYCE Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Kateřina Kaňková Školitel: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Školitel-konzultant: doc. PharmDr. Ondřej Soukup, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení cytotoxicity léčiv s využitím různých testů buněčné viability V současné době metody buněčné viability jsou důležitou součástí preklinických studií. Existuje široké spektrum metod na různé bázi, které lze pro tyto účely použít. Cílem této práce je porovnání některých základních metod, jejich přesnost a selektivitu, výhody a nevýhody aplikace. Šest různých léčiv bylo proměřováno pěti metodami buněčné viability - kolorimetrické metody (MTT, krystalová violeť), fluorimetrické (propidium jodid, calcein-AM) a luminometrické (ATP) na CHO-K1 buněčné linii. Výstupem všech metod jsou hodnoty IC50 pro daná léčiva kvantifikující jejich cytotoxicitu vč. grafického znázornění měření a směrodatné odchylky. Na závěr jsou jednotlivé metody porovnány na základě získané zkušenosti při práci a informací získaných při teoretickém průzkumu literatury. Mezi nejvhodnější metody lze zařadit MTT a ATP esej. Kvůli problémům při měření (např. nevhodnost použití u adherentních linií) se jako méně vhodná metoda jeví calcein- AM. Jako nejméně vhodné metody se potom...
|
|
|
Studium vlivu overexprese ABC lékových transportérů na antiproliferační schopnosti vybraných konvenčních cytostatik
Malečová, Lucie ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Lucie Malečová Školitel: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vlivu overexprese ABC lékových transportérů na antiproliferační schopnosti vybraných konvenčních cytostatik Overexprese ABC lékových transportérů je jedním z mechanizmů rozvoje mnohočetné lékové rezistence, která je příčinou selhávání terapie u nádorových onemocnění. ABC transportéry jako ABCB1, ABCG2a ABCC1 mají široké spektrum substrátů, mezi kterými je i řada konvenčních cytostatik. Cílem této práce bylo popsat možný vliv overexprese zmíněných efluxních transportérů na antiproliferační účinky docetaxelu, etoposidu, paklitaxelu, methotrexátu, pemetrexedu, topotekanu a vinblastinu. Výsledky byly získány pomocí MTT testů prováděných na buněčných liniích MDCKII a A431 se/bez zvýšenou(é) expresí(e) studovaných transportérů. U pěti ze sedmi testovaných cytostatik byl pozorován pokles cytotoxicity v buňkách se zvýšenou expresí, pokaždé alespoň u jednoho z transportérů. Pouze topotekan byl vyhodnocen jako oběť rezistence zprostředkované všemi třemi testovanými transportéry. Pro ověření využitelnosti získaných výsledků jsem topotekan použila jako modelové cytostatikum v následné kombinační studii. V rámci této studie byly v...
|
|
|
Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2
Ďurišová, Markéta ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Mgr. Markéta Ďurišová Konzultant: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název rigorózní práce: Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2. Primárním místem absorpce je u perorálně podávaných léčiv tenké střevo. Enterocyty, tvořící střevní bariéru, exprimují značné množství transportérů, a to zástupce jak ATP-vázajících (ABC) tak i "solute carrier" (SLC) transportérů, které mohou významně ovlivnit farmakokinetiku léčiv, které jsou jimi přenášeny. I z toho důvodu je v současnosti FDA a EMA kladen důraz na studium těchto interakcí a jejich vlivu na permeabilitu léčiv. Cílem předkládané práce bylo studium, zda se ekvilibrační nukleosidové transportéry (ENTs), patřící mezi SLC transportéry, podílejí na absorpci nukleosidů (adenosinu a thymidinu) a následně i nukleosidového antiretrovirotika abakaviru (ABC). K experimentu byla využita in vitro transportní metoda, která byla provedena na monovrstvě polarizovaných Caco-2 buněk, jež byly kultivovány na mikrporózních membránových filtrech. Statistickou analýzou námi naměřených hodnot bylo zjištěno, že ačkoliv exprese ENTs byla na apikální straně membrány Caco-2 buněk...
|
|
|
Testing of the cytotoxicity of potential drugs in the cell lines together with the measurement of their passage through the blood brain barrier by the PAMPA method
Šinaľová, Lucia ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Jansová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Lucia Šinaľová Školiteľ: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Názov diplomovej práce: Testovanie cytotoxicity potenciálnych liečiv na bunkových líniách spoločne s meraním ich priechodu cez hematoencefalickú bariéru pomocou metódy PAMPA V tejto diplomovej práci sme sa zaoberali prechodnosťou derivátov takrínu cez hematoencefalickú bariéru a stanovením ich cytotoxicity. Konkrétne sme testovali takrín- benzotiazolové a takrín-tiachinazolínové deriváty ako potenciálne liečivá na liečbu Alzheimerovej choroby. Dôvodom testovania nových derivátov takrínu je snaha nájsť látky s rovnakým účinkom a nižšou toxicitou, kvôli ktorej bol samotný takrín vyradený z klinického používania. Pravdepodobnú permeabilitu testovaných látok sme stanovili in vitro metódou PAMPA. Na základe zistených hodnôt permeačného koeficientu Pe sme z 9 testovaných derivátov takrínu určili, že benzotiazolové deriváty A-D (Pe= 8,31-16,9×10-6 cm/s) a takrín- tiachinazolínové deriváty 1, 3, 4 (Pe= 8,59-14,9×10-6 cm/s) sú cez HEB prechodné, takrín- tiachinazolínový derivát 2 (Pe= 3,79×10-6 cm/s) mal neistú permeabilitu a takrín- tiachinazolínový derivát 5 (Pe= 2,0×10-6 cm/s) bol testovaním určený ako neprechodný. V rámci predklinického hodnotenia...
|
|
|
Příprava savčích vektorů kódujících vybrané mikrosomální SDR enzymy
Slezák, Jan ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických v d Kandidát: Jan Slezák kolitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: P íprava sav ích vektor kódujících vybrané mikrosomální SDR enzymy Mikrosomální dehydrogenasy/reduktasy s krátkým et zcem DHRS1, DHRS7 a HSD11b1 (SDR19C1, SDR34C1, SDR26C1) jsou membránov vázané NAD(P)H-dependentní enzymy metabolizující iroké spektrum substrát nesoucích karbonylovou skupinu. Tyto enzymy z nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým et zcem zprost edkovávají metabolismus endogenních látek, jako jsou glukokortikoidy, retinoidy, sfingolipidy stejn jako r zná xenobiotika. Mimo jejich biologické role se podílejí na rozvoji záva ných onemocn ní (nap . nádorová onemocn ní, Alzheimerova choroba, obesita aj.). Znalost inhibi ní a substrátové specifity m e vést k lep ímu pochopení funkcí t chto enzym v organismu a k novým terapeutickým p ístup m. Cílem této práce bylo p ipravit sav í vektory kódující DHRS1, DHRS7 a HSD11b1. Prvním krokem byl návrh primer a amplifikace cDNA. Primery nesly sekvence rozeznávané restrik ními endonukleasami sou asn obsa ené v mnoho etném klonovacím míst pCI plasmidu, co umo nilo vytvo ení lepivých konc a následné spojení insertu s plasmidem pomocí ligace. Takto p ipravené vektory byly...
|
|
|
Reporter gene studies for nanoparticle mediated DNA and siRNA delivery.
Kovářová, Barbora ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biochemických věd University of Vienna, Faculty center for Pharmacy, Department of Pharmaceutical Chemistry, Laboratory of MacroMolecular Cancer Therapeutics Kandidát: Barbora Kovářová Školitel (Univerzita Karlova): PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Školitel (University of Vienna): Univ. Prof. Dipl. Ing. Dr. Manfred Ogris Konzultant (University of Vienna): Dr. Haider Sami, Ph.D. Název diplomové práce: Studie nanočásticemi zprostředkovaného dopravování DNA a siRNA založené na reportérovém genu Klíčová slova: transfekce, plasmidová DNA, siRNA, nanočástice Genová terapie je nadějný obor, který nabízí potenciál k léčbě mnoha nevyléčitelných chorob. Je zprostředkována modulací genové exprese ve specifických buňkách pomocí dopravení exogenní nukleové kyseliny do těchto buněk. Jednou ze současných výzev dopravování nukleových kyselin je výzkum syntetických vektorů, které mají potenciál překonat nevýhody běžně používaných vektorů virových. Tato práce je zaměřena na různé typy nanočástic založených na polyethyleniminu pro dopravování plasmidové DNA (pDNA) a small interfering RNA (siRNA). Spojení kontrastních zobrazovacích činidel se systémy pro dopravování genů nabízí mnoho výhod pro sledování procesu dopravování genů jak in vivo tak i in...
|
|
|
Interakce vybraných protinádorových látek ze skupiny inhibitorů MAPK/ERK signalizační kaskády s ABC lékovými transportéry
Slatinský, Lukáš ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Lukáš Slatinský Školitel: doc. PharmDr. Martina Čečková, Ph.D. Název diplomové práce: Interakce vybraných protinádorových látek ze skupiny inhibitorů MAPK/ERK signalizační kaskády s ABC lékovými transportéry ABCB1 (Pgp, P-glycoprotein) a ABCG2 (BCRP, breast cancer resistance protein) patří mezi membránové efluxní transportéry závislé na ATP, tzv. ATP-binding cassettes (ABC). Fyziologicky jsou exprimovány v buněčné membráně a chrání tkáně před potencionálně toxickými xenobiotiky, včetně léčiv. Tím, že jsou schopny odčerpávat širokou škálu cytotoxických léčiv, představují také jeden z obranných mechanismů nádorových buněk, což vede k selhávání léčby. BRAF protein má důležitou regulační a signální roli v MAPK/ERK signalizační kaskádě ovlivňující buněčné dělení, diferenciaci a sekreci. Mutace BRAF vedou k nadměrné aktivitě MAPK/ERK kaskády v mnoha nádorových buňkách a stávají se tak cílem protinádorové terapie. Kobimetinib a dabrafenib jsou relativně nové protinádorové látky, inhibují uvedenou signální dráhu a používají se v léčbě melanomu s mutacemi BRAF. Cílem této práce bylo zjistit, jestli inhibitory kináz kobimetinib a dabrafenib mohou inhibovat efluxní transportéry ABCB1 a ABCG2 a překonávat tak...
|
host ::
RSS.