|
|
Využití separačních a hmotnostně-spektrometrických technik v diagnostice Alzheimerovy choroby
Lebertová, Lucie ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu kovalentně zesítěných oligomerních forem amyloidu beta a jejich analýzu pomocí SDS-PAGE a MALDI-TOF. Kovalentně zesítěné oligomerní formy Aβ(1-42) byly tvořeny pomocí chemické a enzymatické reakce. Prokřížení řetězců amyloidu beta vzniká přes aminokyselinový zbytek tyrosinu za vzniku kovalentní vazby, přičemž takovéto kovalentní zesítění vede ke stabilizaci oligomerní struktury, což umožňuje zlepšení analýzy oligomerů amyloidu beta. Vývoj metod pro detekci a kvantifikaci oligomerů amyloidu beta může být značným přínosem pro diagnostiku Alzheimerovy choroby, protože právě oligomerní formy amyloidu beta jsou nejvíce spojovány s patologií Alzheimerovy choroby. V teoretické části je popsána Alzheimerova choroba s uvedenými problémy v časné diagnostice a terapii. Dále jsou uvedeny základní informace o amyloidu beta a popsány analytické metody separace a detekce amyloidu beta používané ve výzkumu. Experimentální část se zabývá optimalizací analytických metod MALDI-TOF a SDS-PAGE. V metodě MALDI-TOF byly pro stanovení Aβ(1-42), jako vhodné matrice, vybrány matrice kyselina 2,5-dihydroxybenzoová a kyselina sinapová. Nejvhodnější metoda nanášení vzorku na MALDI desku pro analýzu Aβ(1-42) byla metoda vyschlé kapky. Optimalizací metody SDS-PAGE bylo zjištěno, že...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
A new method for double bond characterization in lipids by ultraviolet photodissociation mass spectrometry
Rumlová, Barbora ; Strmeň, T. ; Cvačka, Josef
Lipids are structurally diverse biomolecules with vital functions in biological systems. Some of these functions are closely associated with the specific location of the carbon-carbon double bond in the lipid acyl chains. The chain length and the number of unsaturated carbon-carbon bonds can be determined using conventional MS/MS-based structural elucidation methods employing low or higher energy collision-induced dissociation. However, these dissociation techniques do not provide more subtle structural details, for example, the position of unsaturated bonds. Another type of activation method – ultraviolet photodissociation can be used for this purpose. In this study, a new method for characterization of double bond location in lipids acyl chain was developed using 193 nm ultraviolet photodissociation implemented on Orbitrap Fusion Lumos mass spectrometer. This approach is based on the derivatization of the double bond with bis-(5-iodo-[2]pyridyl)-disulfide, subsequent specific cleavages provide a unique diagnostic pair bearing information about the double bond position.
|
|
| |
host ::
RSS.