|
|
Testování a optimalizace on-line SPE HPLC podmínek pro stanovení mykotoxinu patulinu v jablečných nápojích
Holznerová, Anežka ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Solich, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Anežka Holznerová Školitel: Doc. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Název diplomové práce: Testování a optimalizace on-line SPE HPLC podmínek pro stanovení mykotoxinu patulinu v jablečných nápojích. K vývoji metody, kterou by bylo možno detekovat mykotoxin patulin v jablečných nápojích a džusech, bylo využito vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) ve spojení s on-line extrakcí na tuhou fázi (SPE) pomocí techniky přepínání kolon pro úpravu vzorku. Vzorek džusu o objemu 250 µl byl přímo dávkován do systému. Po nástřiku vzorku došlo k extrakci patulinu z matrice džusu na extrakční předkoloně. Kovová extrakční předkolona o rozměrech 25 x 3 mm, byla naplněna Supel MIP Patulin sorbentem, který je specifickým "molekulárně vtištěným polymerem" (MIP) určeným pro selektivní extrakci patulinu z jablečné matrice. Jako promývací fáze pro odstranění balastní matrice byl vybrán 1% roztok NaHCO3, který protékal MIP kolonkou rychlostí 2 ml/min po dobu 2,5 minuty. Po uplynutí této doby došlo k přepnutí ventilu a zbytkové látky matrice zachycené na extrakční předkoloně společně s patulinem byly dále separovány na analytické koloně Kinetex Biphenyl 150 x 4,6 mm (velikost částic 5µm). Mobilní fáze o složení 20 %...
|
|
| |
|
|
Quantum-Dots částice jako zesilovače při chemiluminiscenčním stanovení v SIA systému
Bártová, Zuzana ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Zuzana Bártová Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Quantum-Dots částice jako zesilovače při chemiluminiscenčním stanovení v SIA systému Quantum-Dots částice (QDs) byly testovány jako zesilovače chemiluminiscenčního (CL) signálu pomocí sekvenční injekční analýzy (SIA). K testování bylo využito CL reakce, při které byl luminol (5-aminoftalylhydrazid) v bazickém prostředí oxidován peroxidem vodíku, QDs vystupovaly jako zesilovač CL signálu. Při reakci byly vyzkoušeny následující koncentrace roztoků: peroxid vodíku v rozsahu 1.10-1 až 1.10-7 mol.l-1 , a to bez QDs a s QDs s emisními maximy 520, 575, 603 a 636 nm a ředěním 10 µl/10 ml (0,1% roztok), 200 µl/10 ml (2% roztok) a 200 µl/1 ml (20% roztok). CL signál byl detekován dvěma způsoby. Pro reakce s koncentrovanějším roztokem peroxidu vodíku (1.10-1 až 1.10-3 mol.l-1 ) byla použita CL cela navržená na Katedře analytické chemie FaF UK v HK - a jako detektor fotonásobič Hamamatsu (Japonsko), který umožňuje sledovat CL signál od začátku chemické reakce včetně jeho časového záznamu. Pro reakce se zředěnějším roztokem peroxidu vodíku (1.10-3 až 1.10-7 mol.l-1 ) fotonásobič fluorimetru Schoeffel (Německo) se spirální...
|
|
|
Využití moderních chromatografických přístupů a úprav vzorků v analýze biologicky aktivních látek
Brabcová, Ivana ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Karlíček, Rolf (oponent) ; Tolarová, Jitka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Ivana Brabcová Školitel: Doc. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Název disertační práce: Využití moderních chromatografických přístupů a úprav vzorků v analýze biologicky aktivních látek Předkládaná disertační práce se zabývá moderními trendy v kapalinové chromatografii v analýze biologicky aktivních látek. Kapalinová chromatografie je významnou analytickou technikou, která umožňuje rychlou separaci a kvantifikaci látek. Trendy v kapalinové chromatografii se v současnosti týkají především vývoje nových stacionárních fází a zlepšení jejich stávajících vlastností. Dále se zabývají miniaturizací chromatografických systémů a tak zvanou "zelenou" chromatografií, která se snaží o přístup šetrnější k životnímu prostředí. Vlastní chromatografické analýze předchází příprava vzorku. Jedná se o významný krok, na kterém závisí správnost výsledku celé analýzy. V současné době dochází k vývoji mnoha nových moderních technik úpravy vzorků. Vývoj těchto technik směřuje především k miniaturizaci, automatizaci a mnohonásobnému zakoncentrování cílových analytů. Teoretická část disertační práce je rozdělena do několika okruhů, ve kterých se zabývá výše popsanými trendy. V první části jsou popsány trendy v oblasti...
|
|
|
Vývoj GC metody pro stanovení acetátu vitamínu E v potravních doplňcích
Kymlová, Helena ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Helena Kymlová Konzultant: Doc. RNDr. Dalibor Šatínský, PhD. Název rigorózní práce: Vývoj GC metody pro stanovení acetátu vitamínu E v potravních doplňcích Byla vyvinuta GC metoda pro stanovení obsahu vitamínu E acetátu v potravních doplňcích. Metoda byla optimalizována a validována. Pro analýzu byla použita kolona Capillary GC, Equity Columns, Equity TM - 5 poly (5 % bifenyl / 95 % dimethylpolysiloxan); 0,32 mm ID x 30 m; 1,0 mm dr. Jako nosný proud bylo použito helium. Dělicí poměr byl 1 : 100. K detekci byl použit plamenoionizační detektor. Optimální podmínky pro analýzu: teplota kolony 340 řC, teplota nástřiku 340 řC, teplota detektoru 320 řC, průtoková rychlost 2 ml/min. Jako vnitřní standard byl zvolen fenoxykarb. Metoda byla využita pro analýzu vitamínu E acetátu v potravních doplňcích Geladrink Forte práškový nápoj - ananas a Chondrotin MSM 2600. Stanovený obsah vitamínu E acetátu byl přepočítán na obsah vitamínu E, který deklaruje výrobce.
|
|
|
Hodnocení vybraných obsahových látek v ovoci metodou HPLC-DAD-CAD
Košková, Stanislava ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Stanislava Košková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: Ing. Radek Vávra, Ph.D. (VŠÚO Holovousy) Název diplomové práce: Hodnocení vybraných obsahových látek v ovoci metodou HPLC-DAD-CAD Tato diplomová práce byla zaměřena na stanovení obsahu sedmi fenolických látek, konkrétně kyseliny gallové, kyseliny chlorogenové, epikatechinu, rutinu, floridzinu, kvercetinu a floretinu v jablkách 20 odrůd, které byly dodány Výzkumným a šlechtitelským ústavem ovocnářským Holovousy s.r.o. K tomuto účelu byla použita HPLC separace v reverzním módu využívající kolonu Luna Omega Polar C18 (150 mm x 4,6 mm; 5 µm). Jako mobilní fáze byla použita směs ultra čisté vody okyselené kyselinou octovou na pH 2,8 a acetonitrilu. Byl zvolen lineární gradient s postupným zvyšováním podílu organické složky z počátečních 10 % na 50 % během 10 min separace. Následovala ekvilibrace kolony - do 12,50 min při 10 % organické složky. Celková délka separace byla 12,5 min při průtokové rychlosti 1 ml/min. Teplota kolonového prostoru byla nastavena na 30 řC. Detekce byla provedena pomocí DAD (254, 280, 320 nm) a CAD detektoru (teplota nebulizéru 25 řC). Součástí této práce je test způsobilosti chromatografického systému,...
|
|
| |
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení účinných látek a nečistoty v přípravku Valetol
Maroušková, Alena ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Tato práce navazuje na diplomovou práci (1) , ve které byly nalezeny optimální chromatografické podmínky pro stanovení účinných látek léčivého přípravku Valetol, paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu, a nečistoty p-aminofenolu, metodou HPLC. Součástí rigorózní práce bylo nalezení vhodného vnitřního standardu pro přesnou kvantifikaci účinných látek a nečistoty, kyseliny benzoové. Následně byla provedena validace analytické metody, včetně testu vhodnosti chromatografického systému. V rámci testu vhodnosti chromatografického systému byla testována: účinnost kolony vyjádřená počtem teoretických pater N asymetrie chromatografických píků vyjádřená faktorem T rozlišení chromatografických píků opakovatelnost vyjádřená relativní směrodatnou odchylkou V rámci validace analytické metody byla testována: přesnost linearita správnost selektivita robustnost stabilita Test robustnosti prokázal citlivost analýzy na změnu složení mobilní fáze. Byly testovány dva parametry mobilní fáze: pH a změna obsahu triethylaminu. Bylo dokázáno, že změna pH mobilní fáze má vliv především na retenční časy p-aminofenolu a kyseliny benzoové. Změna obsahu triethylaminu v mobilní fázi má výrazný vliv jak na retenční čas p-aminofenolu, tak na velikost plochy píku p-aminofenolu (na jeho kvantifikaci). Požadavek na...
|
|
| |
|
|
Aplikace technologie nových stacionárních fází v HPLC analýze biologicky aktivních látek - stanovení vitamínu E
Plíšek, Jiří ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Bc. Jiří Plíšek, 2008 Aplikace technologie nových stacionárních fází v HPLC analýze biologicky aktivních látek - stanovení vitaminu E (Abstrakt) Cílem diplomové práce bylo nalézt vhodnou stacionární fázi pro úpravu biologického materiálu (krevní plazmy) technikou SPE k izolaci vitaminu E (α-tokoferolu) a jeho následného stanovení HPLC analýzou pomocí vyvinuté metody. SPE tak měla nahradit užívanou techniku LLE. Při vlastní práci jsem také použil standard vitaminu A (retinolu), jelikož je možnost současného stanovení obou vitaminů pro laboratoř GMK FN HK výhodnou kombinací. Hlavní důraz byl ale kladen na vitamin E. Příprava vzorku - optimalizovaný postup SPE metody: Krev byla odebrána z periferní žíly po dvanácti hodinovém lačnění. Vzorky pak byly centrifugovány (1600×g, 10 min, 4řC) a plazma oddělena. 250 μl plazmy bylo deproteinováno čistým ethanolem (650 μl, 10 mim, 4řC). Po centrifugaci (1600×g, 15 min, 4řC) byl supernatant oddělen a nanesen na SPE kolonku. Před aplikací vzoru byla kolonka aktivována 1 ml methanolu a pak promyta 1 ml vody. Po nanesení vzorku byl precipitát rozpuštěn v 625 l čistého ethanolu, centrifugován (1900×g, 25 minut, 4řC) a všechen supernatant byl opět aplikován na SPE kolonku. 2 ml n-hexanu bylo použito jako eluční činidlo. N-hexan byl odpařen při 45řC, odparek rozpuštěn v 250...
|
host ::
RSS.