|
Modulation of cholesterol and bile acid metabolism via soluble endoglin and pharmacotherapy
Igreja e Sá, Ivone Cristina ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Vítek, Libor (oponent) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Školicí pracoviště Katedra biologických a lékařských věd Doktorský studijní program Farmakologie a toxikologie Kandidátka / kandidát M.Sc. Ivone Cristina Igreja e Sá Školitelka / školitel prof. Pharm.Dr. Petr Nachtigal, Ph.D. Konzultantka / konzultant Název disertační práce Modulace metabolismu cholesterolu a žlučových kyselin prostřednictvím solubilního endoglinu a farmakoterapie Endoglin (Eng, CD105) je transmembránový glykoprotein a koreceptor receptorového komplexu pro transformující růstový faktor β (TGFβ). Zvýšená exprese Eng se podílí na endotelové dysfunkci, poškození jater a rozvoji jaterní fibrózy. Když je Eng odštěpen metaloproteinázou-14 (MMP14), uvolňuje se do oběhu jeho rozpustná forma označovaná jako solubilní endoglin (sEng, sCD105). Zvýšené plazmatické hladiny sEng byly pozorovány nejen u pacientů s kardiovaskulárními a metabolickými onemocněními spojenými s hypercholesterolemií (např. aterosklerózou), ale byly dány do souvislosti s rozvojem metabolického syndromu (např. arteriální hypertenzí). Přímá role sEng v ovlivnění jaterního metabolismu a jaterních funkcí za fyziologických nebo patologických podmínek však dosud nebyla zkoumána. Cílem této disertační práce bylo proto ověřit hypotézu, že sEng hraje roli v modulaci...
|
|
Interindividuální variabilita exprese vybraných membránových transportérů a jejich vliv na prognózu a terapii pacientů s akutní myeloidní leukémií.
Nálevková, Karolína ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Karolína Nálevková Školitelka: doc. PharmDr. Martina Čečková, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Aleš Šorf, Ph.D. Název diplomové práce: Interindividuální variabilita exprese vybraných membránových transportérů a jejich vliv na prognózu a terapii pacientů s akutní myeloidní leukémií. Akutní myeloidní leukémie je maligní nádorové onemocnění hematopoetického systému. Dostupná léčba stále nepřináší dostatečné výsledky, jelikož pěti let od stanovení diagnózy se dožívá pouze necelých 30 % pacientů. Základní indukční terapii už dlouhá desetiletí tvoří kombinace cytarabinu s antracyklinem, nazývaná také jako "7+3" terapie. Díky karyotypizaci a imunofenotypizaci pacientů se v posledních pár letech potvrdila velká heterogenita onemocnění, což podpořilo i rozvoj cílených léčiv. Na výsledek terapie mohou mít vliv i další faktory, například transportéry podílející se na přestupu léčiv či esenciálních molekul přes buněčné membrány. V této práci jsem se proto věnovala zejména vlivu vybraných membránových přenašečů OCTN1, OCTN2 a ABCC4 na prognózu onemocnění a terapii pacientů. Nejprve jsme si na mononukleárních buňkách izolovaných z krve de novo diagnostikovaných pacientů s AML pomocí RT-PCR a ddPCR metody určili...
|
|
Migraine and its treatment
Petríková, Andrea ; Jirkovský, Eduard (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmakológie a toxikológie Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Eduard Jirkovský, Ph.D. Autor: Andrea Petríková Názov diplomovej práce: Migréna a jej liečba Migréna patrí k primárnym bolestiam hlavy, ktoré sa prejavujú v opakovaných atakoch silnej jednostrannej a pulzujúcej bolesti hlavy obvykle trvajúcich 4-72 hodín. Sú sprevádzané jedným z týchto príznakov: fotofóbia, fonofóbia, odorofóbia, nauzea, vomitus. Od jedného záchvatu k druhému sa nemocný cíti ako zdravý pacient. V mojej práci popisujem súčasné farmakoterapeutické postupy v liečbe migrény. V prvej časti diplomovej práce som podala literárny prehľad migrény, ktorý začína klasifikáciou bolesti hlavy. Ďalej pokračujem s definíciou migrény, históriou, klasifikáciou migrény, patofyziológiou, prevalenciou a diagnostickými kritériami migrény. V druhej časti popisujem jednotlivé typy liečby s ich postupmi a liekmi, ktoré sa používajú. Na základe našich znalostí o patofyziológii migrény, boli vyvinuté nové lieky pre liečbu akútnych záchvatov migrény, ktoré sú cielené na calcitonin gene-related peptid (CGRP) a sérotonínové 5-HT1F receptory. Venujem sa popisovaniu ich mechanizmu, ktoré lieky boli vyvinuté, ako pôsobia. Prvým dôležitým krokom je správne určená diagnóza. Od nej...
|
|
The impact of SIRT1 inhibition on zebrafish morphology and behavior
Faustová, Zuzana ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Mladěnka, Přemysl (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Zuzana Faustová Školitel: Prof. Doutor Jorge Miguel de Ascenção Oliveira PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D Název diplomové práce: Vliv inhibice SIRT1 na morfologii a chování Dánia pruhovaného Po objevu spojitosti mezi Silent Information Regulator 2 (Sir2) a jeho schopností ovlivnit délku života v kvasinkách, se Sir2 a jeho sedm savčích ortologů stalo velice zajímavým cílem. Byly nazvány sirtuiny a patří do rodiny histon deacetyláz. Funkce sirtuinů je jedinečná, jako kofaktor mají nikotinamid adenin dinukleotid a jejich aktivita může být ovlivněna vnějšími faktory. Cílem této práce bylo zjistit více o Sirtuinu 1 (SIRT1), který by měl být ze všech savčích sirtuinů nejvíce podobný Sir2 kvasinek. Nejprve jsme testovali vliv inhibice SIRT1 na raný vývoj embrya a larvy Dánia pruhovaného (Danio rerio). Zjistili jsme, že SIRT1 je důležitý pro normální vývoj a že jeho nedostatek způsobí poruchy kardiovaskulárního charakteru, zpoždění ve vývoji až smrt. Dále jsme se snažili zjistit více o spojitosti SIRT1 s Parkinsonovou chorobou, tím že jsme kombinovali netoxické dávky EX527, inhibitoru SIRT1, a 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP+ ), látkou využívanou k indukci symptomů Parkinsonovy choroby. Nicméně...
|
|
Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2
Ďurišová, Markéta ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Mgr. Markéta Ďurišová Konzultant: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název rigorózní práce: Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2. Primárním místem absorpce je u perorálně podávaných léčiv tenké střevo. Enterocyty, tvořící střevní bariéru, exprimují značné množství transportérů, a to zástupce jak ATP-vázajících (ABC) tak i "solute carrier" (SLC) transportérů, které mohou významně ovlivnit farmakokinetiku léčiv, které jsou jimi přenášeny. I z toho důvodu je v současnosti FDA a EMA kladen důraz na studium těchto interakcí a jejich vlivu na permeabilitu léčiv. Cílem předkládané práce bylo studium, zda se ekvilibrační nukleosidové transportéry (ENTs), patřící mezi SLC transportéry, podílejí na absorpci nukleosidů (adenosinu a thymidinu) a následně i nukleosidového antiretrovirotika abakaviru (ABC). K experimentu byla využita in vitro transportní metoda, která byla provedena na monovrstvě polarizovaných Caco-2 buněk, jež byly kultivovány na mikrporózních membránových filtrech. Statistickou analýzou námi naměřených hodnot bylo zjištěno, že ačkoliv exprese ENTs byla na apikální straně membrány Caco-2 buněk...
|
|
Využití deep-sequencing při studiu závislostí průběhu lentivirové infekce na variabilitě receptorů přirozené imunity.
Zelníková, Jana ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Jana Zelníková Využití deep sequencing při studiu závislostí průběhu lentivirové infekce na variabilitě receptorů přirozené imunity Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem práce bylo zjistit za použití modelu SIV infekce u makaků, tedy jediném současném modelu HIV infekce u lidí, jak se liší dvě skupiny makaků rhesus infikovaných virem SIV239, nebo SHIV clade C s odlišnou virovou náloží, v expresi haplotypů MHC molekul I. třídy pomocí nové metody pyrosekvenování. Metody: Pomocí reverzní transkriptázy jsme vzorky RNA z leukocytů makaků převedli na cDNA a provedli jsme PCR pro úsek 190 bp MHC I. třídy s fúzními primery s identifikátory MID pomocí FastStart High Fidelity Taq DNA polymerázy. Dále jsme postupovali dle protokolu od GS Junior System a vzorky jsme pyrosekvenovali na přístroji GS Junior System (Roche). Získaná data jsme analyzovali sadou skriptů v jazyce Python použitím řady filtračních kroků a pomocí softwaru DNA Star LaserGene 11. Alely jsme identifikovali pomocí programu ncbi-blast+ 2.2.25. Výsledky: Nalezli jsme 98 známých a 11 nových alel MHC I. třídy. Analýzou jsme nalezli alely, u kterých předpokládáme rychlý, nebo pomalý průběh onemocnění SIV. Alely s pomalým průběhem onemocnění: Mamu - A1*004, A1*007, A1*019,...
|
|
Neurogenetický potenciál kmenových buněk u myší
Slabá, Barbora ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Neurální kmenové buňky (NKB) se vyskytují v dospělém nervovém systému savců, nacházejí se ve dvou specifických oblastech: subventrikulární zóna předního mozku a subgranulární zóna gyrus dentatus v hipokampu. NKB získávají své specifické vlastnosti, vyzrávají a integrují se do funkčních celků, předtím než se mohou funkčně zapojit do nervového systému. Stále víme málo o mechanismech, které kontrolují tyto procesy a o funkci nově vznikajících neuronů v dospělém mozku. Velké množství faktorů na molekulární úrovni a vliv prostředí, to vše se může podílet na regulaci proliferace, vývoje a diferenciace somatických kmenových buněk v dospělém nervovém systému. NKB dávají vznik třem hlavním typům nervových buněk: neuronům, astrocytům a oligodendrocytům. Ukazuje se, že astrocyty mohou hrát klíčovou roli v regulaci neurogeneze: v neporušeném funkčním dospělém mozku i po jeho poškození. Pro odhalení funkce astrocytů v regulaci neurogeneze na molekulární úrovni, je nezbytným krokem nejprve porozumět regulaci neurogeneze v dospělém CNS. Abychom zjistili, jak se projeví odstranění genů intermediálních filament astrocytů (GFAP, vimentin) na počtu NKB, a jak zásah ovlivní vlastnosti neurálních kmenových buněk myší, analyzovali jsme neurosféry neurálních kmenových buněk. Neurosféry sloužili k porovnání charakteristik...
|
|
Studování příčin rezistence a identifikace bakteriálních izolátů pomocí širokého spektra laboratorních metod
Bavlovič, Jan ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Mladěnka, Přemysl (oponent)
Karlova Univerzita v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Jan Bavlovič Školitelé: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Prof. Doutora Luísa Peixe Konzultanti: Doutora Ângela Novais Doutora Ana Freitas Název diplomové práce: Charakterizace multirezistentních izolátů Klebsiella pneumoniae a Enterococcus faecium spektroskopickými a genotypickými metodami Stále se zvyšující antimikrobiální rezistence je v současné době celosvětovým problémem. Mezi významné metody charakterizace antimikrobiální rezistence patří tradičně genomické postupy. Cílem této studie bylo zhodnotit potenciál metody Fourier transform infrared spectroscopy se zeslabeným kompletním odrazem (FTIR-ATR) pro identifikaci multirezistentních karbapenemasu produkujících K. pneumoniae a E. faecium izolátů. Analyzovali jsme 20 klinických K. pneumoniae izolátů získaných z různých laboratoří v Portugalsku v období od března 2014 do září 2015 a 143 dříve popsané vankomycin-rezistentní E. faecium izoláty získaných od lidí, zvířat a životního prostředí v 26 zemích mezi lety 1992 a 2015. Izoláty byly primárně charakterizovány genotypovými metodami, včetně testování antimikrobiální citlivosti, detekce karbapenemáz a betalaktamáz s rozšířeným spektrem (ESBLs), identifikace odolnosti vůči antibiotikům...
|
|
Interakce MRP2 transportéru s vybranými antiepileptiky
Garajová, Katarína ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Interakce MRP2 transportéru s vybranými antiepileptiky Epilepsie je časté neurologické onemocnění postihující přibližně 1-2% populace. U většiny epileptických pacientů jsou záchvaty účinně kontrolovány v současnosti dostupnými antiepileptiky (AED - anti-epileptic drugs). Uvádí se, že přibližně 30% pacientů nedochází k zastavení záchvatů, navzdory pečlivě optimalizované léčbě. Většina těchto pacientů s farmakorezistentní epilepsií neodpovídá na léčbu různými AED s různými mechanismy účinku, což naznačuje, že rezistence u epilepsie je multifaktoriálním fenoménem nezávislým od použitého léčiva. Na základě experimentálních a klinických studií byly předloženy dvě hlavní teorie vysvětlující vznik farmakorezistence. První z nich je hypotéza cílových struktur, která se zabývá změnami ve vlastnostech cílových struktur pro AED jako příčinami jejich snížené farmakosenzitivity. Druhou je transportérová hypotéza, která hovoří o zvýšené expresi efluxních multi-drug transportérů v mozku jako příčině snížení přístupu AED k cílovým strukturám. Největší a nejvýznamnější rodinou multidrug-transportérů exprimovaných v mozku a pravděpodobně odpovědných za snížení účinné koncentrace mnohých AED v mozkové tkáni je nadrodina ABC (ATP- binding cassete) transportérů. Jedním z transportérů této rodiny, kterým byla v současnosti...
|
|
Příprava rekombinantní cDNA některých lékových transportérů
Hadrabová, Zdeňka ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Pro následnou přípravu buněčné linie se zvýšenou expresí transportéru MRP3 byl připraven vhodný plazmid obsahující kódující sekvenci pro tento transportér. Experimentálně bylo stanoveno složení reakční směsi a teplotní profil PCR pro amplifikaci sekvence kódující transportér MRP3. Připojením adenosinu byl PCR produkt upraven pro klonování do plazmidu pCR® -XL-TOPO® . Plazmid pCR® -XL-TOPO® se zaklonovanou sekvencí a plazmid pZeoSV2(-) byly štěpeny restrikčními endonukleázami EcoRV a SpeI. Následně bylo možné díky komplementárním koncům vyštěpenou kódující sekvenci MRP3 zaklonovat do plazmidu pZeoSV2(-), který je vhodný pro transfekci eukaryotní buněčné linie. Klonování bylo úspěšné.
|