|
|
Purifikace rekombinantních proteinů pomocí afinitní chromatografie
Zemek, Ondřej ; Mácha, Jaroslav (vedoucí práce) ; Hrdý, Ivan (oponent)
Izolace a purifikace rekombinantních proteinů je základním předpokladem pro studium jejich strukturních a funkčních vlastností. Mezi nejdůležitější metody, které jsou k tomuto účelu využívány patří afinitní chromatografie. V této práci jsou shrnuty v literatuře publikované vlastnosti a zkušenosti s využitím nejpoužívanějších afinitních tagů. Zde probrané tagy zahrnují:CBP, MBP, GST, polyhistidinové a polyargininové tagy, FLAG-tag, Strep-tag II a SpA a některé jejich modifikace. U jednotlivých tagů je probrán jejich původ a vlastnosti, vliv na formu a lokalizaci fúzního proteinu, způsob jeho vazby a eluce ze substrátu a možnosti jeho odstranění nebo využití v jiných metodách. Klíčová slova: afinitní chromatografie, rekombinantní protein, purifikace, afinitní tag
|
|
| |
|
|
Organofosforové deriváty pro "click-chemistry"
Zemek, Ondřej ; Kotek, Jan (vedoucí práce) ; Veselý, Jan (oponent)
Řešitel: Ondřej Zemek Organofosforové deriváty pro "click-chemistry" V této diplomové práci byly syntetizovány dva makrocyklické ligandy - fosfinová analoga 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetraoctové kyselina. Tyto látky tvoří pevné komplexy s lanthanoidy, čehož se využívá při aplikaci gadolinitých iontů jako kontrastní MRI látky. Pevné komplexy Gd3+ nepůsobí, na rozdíl od volných iontů, v organismu toxicky navíc je možné vhodným návrhem ligandu dosáhnout kumulace kontrastní látky v některých tělních strukturách - zvýšit jeho specifitu. První v řešení práce syntetizovaný ligand má přes fosfinátovou skupinu vázanou terminální acetylenickou skupinu, která umožňuje připojení ke široké škále molekul, funkcionalyzovaných azidovou skupinou, přes takzvanou "click reakci". Tedy dipolární [1,3] cykloadici terminální acetylenové skupiny s azidovou skupinou, při které vzniká 1,2,3-triazol. Druhý syntetizovaný ligand pak má přes fosfinátovou skupinu navázán 4-azidobenzyl který umožňuje komplementární reakci s terminálním alkynem. Během řešení práce bylo, kromě vlastních ligandů také připraveno několik nových látek (fosfinových kyselin), které byly charakterizovány. V rámci práce byl také připraveny komplexy ligandů s Gd3+ , které budou dále použity k připojení na funkční molekuly či částice a ke studiu takto...
|
|
|
Purifikace rekombinantních proteinů pomocí afinitní chromatografie
Zemek, Ondřej ; Mácha, Jaroslav (vedoucí práce) ; Hrdý, Ivan (oponent)
Izolace a purifikace rekombinantních proteinů je základním předpokladem pro studium jejich strukturních a funkčních vlastností. Mezi nejdůležitější metody, které jsou k tomuto účelu využívány patří afinitní chromatografie. V této práci jsou shrnuty v literatuře publikované vlastnosti a zkušenosti s využitím nejpoužívanějších afinitních tagů. Zde probrané tagy zahrnují:CBP, MBP, GST, polyhistidinové a polyargininové tagy, FLAG-tag, Strep-tag II a SpA a některé jejich modifikace. U jednotlivých tagů je probrán jejich původ a vlastnosti, vliv na formu a lokalizaci fúzního proteinu, způsob jeho vazby a eluce ze substrátu a možnosti jeho odstranění nebo využití v jiných metodách. Klíčová slova: afinitní chromatografie, rekombinantní protein, purifikace, afinitní tag
|
host ::
RSS.