|
|
Identification of new neuroactive steroids that are able to interact with allosteric binding sites on purinergic P2X receptors
Sivčev, Sonja ; Zemková, Hana (vedoucí práce) ; Vyklický, Vojtěch (oponent) ; Stojilkovic, Stanko S. (oponent)
(CZ) Purinergní P2X receptory jsou ATP-aktivavané iontové kanály, které mají mnoho fyziologických rolí a nově představují důležité terapeutické cíle v řadě nemocí. P2X podjednotky se skládají ze dvou transmembránových α-helixů (TM1 a TM2), extracelulární ATP-vazebné domény a intracelulárních N- a C- konců. Sedm různých P2X podjednotek (P2X1-7) se může složit a vytvořit homotrimérní nebo heterotrimérní iontové kanály propustné pro monovalentní kationty a vápník. P2X receptory se vyskytují prakticky ve všech tkáních, v mozku mají největší zastoupení podjednotky P2X2, P2X4 a P2X7. Aktivita P2X nezávisí jen na přítomnosti ATP, ale také alosterických modulátorů, které mohou inhibovat nebo zvyšovat aktivitu těchto kanálů. Našim cílem bylo identifikovat nové molekuly, které mohou interagovat s alosterickými vazebnými místy na P2X receptorech, navrhnout a syntetizovat nové analogy neurosteroidů a určit kritické receptorové domény nebo aminokyseliny, které jsou důležité pro vazbu neurosteroidu. Pomocí patch-clamp elektrofyziologické techniky jsme snímali ATP- evokované proudy z HEK293T buněk transfekovaných potkaními P2X2, P2X4 a P2X7, a z buněk předního laloku hypofýzy nebo hypotalamických neuronů, které tyto receptory přirozeně exprimují. Nalezli jsme, že 17β-ester deriváty testosteronu, především...
|
|
|
In situ luminiscenční detekce singletního kyslíku
Vyklický, Vojtěch ; Dědic, Roman (vedoucí práce) ; Mojzeš, Peter (oponent)
The thesis summarises already published results of singlet oxygen luminiscence detection in relation to photodynamic therapy treatment. The spectroscopic and photosensitising properties of the photosensitizer TMPyP and their comparison with already published properties of TPPS4 are presented. Also the inuence of phosphatidylcholine on photosensitising properties of TPP and singlet oxygen lifetime was investigated. The thesis is mainly focused on adaptation and optimisation of experimental setup for singlet oxygen luminescence deteciton from the surface of solid samples with time and spectral resolution using optical fibres with luminescence probe. The usability was tested on polymer matrix (PMMA or polystyrene) containing protoporphyrine IX. Finally, the kinetics of singlet oxygen phosphorescence measured from surface of thin layer of 3T3 murine fibroblasts containing TPPS4 or TMPyP are presented. Thereby the feasibility of singlet oxygen detection in situ was demonstrated using this setup.
|
|
|
Studium funkčních a molekulárních vlastností NMDA receptorů
Vyklický, Vojtěch ; Vyklický, Ladislav (vedoucí práce) ; Chvátal, Alexandr (oponent) ; Tureček, Rostislav (oponent)
N-methyl-D-aspartátové (NMDA) receptory patří mezi ionotropní glutamátové receptory, které zprostředkovávají rychlý synaptický přenos v centrální nervové soustavě savců a hrají klíčovou roli v synaptické plasticitě. Jejich nadměrná aktivace vede k buněčné smrti, která je příčinou vzniku řady závažných neurologických a psychiatrických onemocnění. Cílem našeho výzkumu bylo nalézt nové látky, které by zabránily dlouhodobé a nadměrné aktivaci NMDA receptorů. Testováním nově syntetizovaných steroidních látek na rekombinantních receptorech jsme ukázali vztah mezi strukturou derivátů přirozeně se vyskytujícího neurosteroidu pregnanolon sulfátu a jejich schopností modulovat NMDA receptory. Výsledky našich pokusů ukazují, že sulfátová a acetylová skupina na molekule pregnanolon sulfátu hrají významnou roli v jeho inhibičním působní. Analýzou proudových odpovědí jsme ukázali, že náhradou substituentů na C3 a C17 uhlíkatého skeletu steroidního jádra lze výrazně zvýšit účinnost steroidních látek a příznivě ovlivnit poměr mezi inhibicí receptorů, které jsou ve stacionárním a nestacionárním stavu aktivace. Tyto dva stavy odrážejí situaci, kdy jsou receptory aktivovány dlouhodobě (tonicky) a synapticky (fazicky). Pomocí elektrofyziologických a optických metod v kombinaci s metodami matematického modelování jsme ukázali,...
|
|
|
In situ luminiscenční detekce singletního kyslíku
Vyklický, Vojtěch
Tato práce shrnuje dosud publikované výsledky luminiscenční detekce singletního kyslíku v souvislosti s léčbou fotodynamickou terapií. Jsou zde prezentovány spektroskopické a fotosenzibilizační vlastnosti fotosenzibilizátoru TMPyP a jejich srovnání s dříve publikovanými vlastnostmi TPPS4. Rovněž je studován vliv fosfatidylcholinu na fotosenzibilizační vlastnosti TPP a dobu života jím generovaného singletního kyslíku. Dále se práce věnuje úpravě a optimalizaci aparatury pro sběr luminiscence singletního kyslíku z povrchu pevných vzorků s časovým i spektrálním rozlišením pomocí světlovodu s luminiscenční sondou. Její funkčnost byla testována na vyrobených polymerních matricích z PMMA a polystyrenu obsahujících protoporfyrin IX. V závěru jsou prezentovány kinetiky fosforescence singletního kyslíku měřené z povrchu tenké vrstvy 3T3 myších fibroblastů obsahujících TPPS4 resp. TMPyP, čímž byla ověřena možnost luminiscenční detekce singletního kyslíku touto upravenou aparaturou in situ.
|
|
| |
|
|
Studium funkčních a molekulárních vlastností NMDA receptorů
Vyklický, Vojtěch ; Vyklický, Ladislav (vedoucí práce) ; Chvátal, Alexandr (oponent) ; Tureček, Rostislav (oponent)
N-methyl-D-aspartátové (NMDA) receptory patří mezi ionotropní glutamátové receptory, které zprostředkovávají rychlý synaptický přenos v centrální nervové soustavě savců a hrají klíčovou roli v synaptické plasticitě. Jejich nadměrná aktivace vede k buněčné smrti, která je příčinou vzniku řady závažných neurologických a psychiatrických onemocnění. Cílem našeho výzkumu bylo nalézt nové látky, které by zabránily dlouhodobé a nadměrné aktivaci NMDA receptorů. Testováním nově syntetizovaných steroidních látek na rekombinantních receptorech jsme ukázali vztah mezi strukturou derivátů přirozeně se vyskytujícího neurosteroidu pregnanolon sulfátu a jejich schopností modulovat NMDA receptory. Výsledky našich pokusů ukazují, že sulfátová a acetylová skupina na molekule pregnanolon sulfátu hrají významnou roli v jeho inhibičním působní. Analýzou proudových odpovědí jsme ukázali, že náhradou substituentů na C3 a C17 uhlíkatého skeletu steroidního jádra lze výrazně zvýšit účinnost steroidních látek a příznivě ovlivnit poměr mezi inhibicí receptorů, které jsou ve stacionárním a nestacionárním stavu aktivace. Tyto dva stavy odrážejí situaci, kdy jsou receptory aktivovány dlouhodobě (tonicky) a synapticky (fazicky). Pomocí elektrofyziologických a optických metod v kombinaci s metodami matematického modelování jsme ukázali,...
|
|
|
In situ luminiscenční detekce singletního kyslíku
Vyklický, Vojtěch
Tato práce shrnuje dosud publikované výsledky luminiscenční detekce singletního kyslíku v souvislosti s léčbou fotodynamickou terapií. Jsou zde prezentovány spektroskopické a fotosenzibilizační vlastnosti fotosenzibilizátoru TMPyP a jejich srovnání s dříve publikovanými vlastnostmi TPPS4. Rovněž je studován vliv fosfatidylcholinu na fotosenzibilizační vlastnosti TPP a dobu života jím generovaného singletního kyslíku. Dále se práce věnuje úpravě a optimalizaci aparatury pro sběr luminiscence singletního kyslíku z povrchu pevných vzorků s časovým i spektrálním rozlišením pomocí světlovodu s luminiscenční sondou. Její funkčnost byla testována na vyrobených polymerních matricích z PMMA a polystyrenu obsahujících protoporfyrin IX. V závěru jsou prezentovány kinetiky fosforescence singletního kyslíku měřené z povrchu tenké vrstvy 3T3 myších fibroblastů obsahujících TPPS4 resp. TMPyP, čímž byla ověřena možnost luminiscenční detekce singletního kyslíku touto upravenou aparaturou in situ.
|
|
|
In situ luminiscenční detekce singletního kyslíku
Vyklický, Vojtěch ; Dědic, Roman (vedoucí práce) ; Mojzeš, Peter (oponent)
The thesis summarises already published results of singlet oxygen luminiscence detection in relation to photodynamic therapy treatment. The spectroscopic and photosensitising properties of the photosensitizer TMPyP and their comparison with already published properties of TPPS4 are presented. Also the inuence of phosphatidylcholine on photosensitising properties of TPP and singlet oxygen lifetime was investigated. The thesis is mainly focused on adaptation and optimisation of experimental setup for singlet oxygen luminescence deteciton from the surface of solid samples with time and spectral resolution using optical fibres with luminescence probe. The usability was tested on polymer matrix (PMMA or polystyrene) containing protoporphyrine IX. Finally, the kinetics of singlet oxygen phosphorescence measured from surface of thin layer of 3T3 murine fibroblasts containing TPPS4 or TMPyP are presented. Thereby the feasibility of singlet oxygen detection in situ was demonstrated using this setup.
|
host ::
RSS.