|
|
Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů
Hlaváčová, Veronika ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Hlaváčová Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro analýzu hlavních obsahových látek doplňku stravy, ve kterém jsou zastoupeny následující rostlinné extrakty: semeno pískavice řecké seno, kořen rozchodnice růžové, kořen všehoje ženšenového a list pantaly rozkladité. K analýze byla využita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením (UHPLC-HRMS). Dalším cílem bylo určit, zda v doplňku stravy není přítomen nedeklarovaný testosteron. Měření probíhalo na přístroji ACQUITY UPLC I-Class System. K hmotnostní detekci byl využit kvadrupól ve spojení s analyzátorem doby letu SYNAPT G2-Si. Byla sbírána kontinuální data. Ke sběru dat byla využita metoda datově nezávislého skenu (DIA). Po vytvoření knihovny MS spekter očekávaných látek byly jako majoritní látky identifikovány ginsenosidy. V prvním kroku byla optimalizována příprava vzorků doplňku stravy. Jako rozpouštědlo byla testována voda, acetonitril, methanol, ethanol a ethylacetát. V dalším kroku byla provedena optimalizace...
|
|
|
Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů
Hlaváčová, Veronika ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Hlaváčová Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro analýzu hlavních obsahových látek doplňku stravy, ve kterém jsou zastoupeny následující rostlinné extrakty: semeno pískavice řecké seno, kořen rozchodnice růžové, kořen všehoje ženšenového a list pantaly rozkladité. K analýze byla využita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením (UHPLC-HRMS). Dalším cílem bylo určit, zda v doplňku stravy není přítomen nedeklarovaný testosteron. Měření probíhalo na přístroji ACQUITY UPLC I-Class System. K hmotnostní detekci byl využit kvadrupól ve spojení s analyzátorem doby letu SYNAPT G2-Si. Byla sbírána kontinuální data. Ke sběru dat byla využita metoda datově nezávislého skenu (DIA). Po vytvoření knihovny MS spekter očekávaných látek byly jako majoritní látky identifikovány ginsenosidy. V prvním kroku byla optimalizována příprava vzorků doplňku stravy. Jako rozpouštědlo byla testována voda, acetonitril, methanol, ethanol a ethylacetát. V dalším kroku byla provedena optimalizace...
|
|
|
Vývoj metody úpravy vzorku pro stanovení vybraných ochratoxinů v moči pomocí UHPLC-MS/MS
Šejvlová, Barbora ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Bc. Barbora Šejvlová Školitel: Vývoj metody úpravy vzorku pro stanovení vybraných ochratoxinů v moči Cílem práce bylo vyvinout metodu pro stanovení ochratoxinů A, B, C a moči s co nejnižším a následně provést validaci této metody, která by byla aplikovatelná vysokoúčinné kapalinové ci přípravy vzorku b fázi pomocí pipetovacích špiček PT), metoda ředění (DAS), extrakce z nosiči (SLE) a jako poslední extrakce Byla hodnocena výtěžnost metody, interference matrice a také limit kvantifikace dané Následně byla provedena validace na koloně ACQUITY UPLC BEH C18 1,7 μm, 2,1 x rozmezí od 68 do 122 % pro všechny analyty a přesnost metody u všech analytů měla RSD menší než 20 %. Byl stanoven LLOQ, pro OTA byl stanoven 0,01 ng/ml, pro OTB a 0,05 ng/ml. ULOQ byl pro všechny analy testování matricových efektů, kdy podmínky byly splněny pouze pro OTA na obou koncentračních hladinách 5 a 20 ng/ml a OTB pouze u 5 ng/ml. Pro řádech stove Klíčová slova: ochratoxiny, moč, příprava vzorku k
|
|
|
Reprodukční analýza plemenic skotu ve stádě s tržní produkcí mléka
Vlčková, Hana
Předkládaná diplomová práce byla zpracována v ZD Nížkov. Do sledování v letech 2019 – 2021 bylo zapojeno průměrně 368 plemenic, jak českého strakatého skotu, tak různě podílových kříženců plemen holštýnského skotu a plemene brown swiss. Byly hodnoceny vybrané reprodukční ukazatele – inseminační interval, servis perioda, mezidobí a inseminační index. Hodnocené ukazatele se analyzovaly za jednotlivé roky, v rámci ročních období, podle pořadí laktace a plemenného založení jedinců. Získané hodnoty byly vyhodnoceny v programu Microsoft Excel a Statistica12., byly vypočteny základní statistické údaje – aritmetický průměr, směrodatná odchylka a variační koeficient. V programu Statistica12 se vybrané faktory zpracovaly pomocí ANOVY a následně se vyhodnotily post hoc analýzou s využitím Tukeyho testu. V roce 2019 byla délka inseminačního intervalu 62,52 dní, servis periody 117,117 dnů, mezidobí 397,17 dnů a hodnota inseminačního indexu byla 2,31. V roce 2020 délka inseminačního intervalu trvala 55,19 dnů, servis perioda 118,17 dnů, mezidobí 398,17 dnů a hodnota inseminačního indexu činila 2,61. V roce 2021 byla délka inseminačního indexu 58,83 dnů, servis periody 113,25 dnů, mezidobí 393,25 dnů a hodnota inseminačního indexu 2,59. V případě inseminačního intervalu byl prokázán vysoce průkazný vliv plemenné skupiny a průkazný vliv pořadí laktace. Taktéž byl prokázán vysoce průkazný vliv plemenné skupiny na délku servis periody.
|
|
|
Vývoj MEPS metody pro UHPLC-MS/MS stanovení entekaviru v ultrafiltrátu ledvin
Janák, Jaroslav ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
1 Abstrakt Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jaroslav Janák Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj MEPS metody pro UHPLC-MS/MS stanovení entekaviru v ultrafiltrátu ledvin Diplomová práce se zabývala vývojem a validací metody úpravy vzorků pro stanovení entekaviru v ultrafiltrátu ledvin, pomocí techniky MEPS, tj. mikroextrakce tuhým sorbentem. K analýze byla využita již dříve vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda pro stanovení entekaviru v potkaní moči. Pro jeho stanovení byla využita hydrofilní interakční chromatografie na koloně Acquity BEH Amide za použití izokratické eluce. Složení mobilní fáze acetonitril - 5 mM octan amonný pH 4,0 bylo v poměru 75:25 (v:v). Jako vnitřní standard byl použit entekavir C2 13 N15 . Ionizace analytu byla provedena elektrosprejem v pozitivním módu a jako detektor byl zvolen trojitý kvadrupól. Ke kvantifikaci analytu bylo využito SRM přechodů entekaviru a vnitřního standardu. Na základě optimalizace MEPS metody byl jako nejvhodnější tuhá fáze zvolen porézní grafitický uhlík vhodný pro analýzu polárních látek. Jako eluční činidlo byl zvolen roztok acetonitril a vody v poměru 75:25 (v:v) a jako promývací činidlo čistá voda. Metoda byla validována. Ověřena byla zejména linearita, přesnost,...
|
|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS metody pro stanovení pravastatinu, rosuvastatinu a jejich metabolitů
Mikšová, Alena ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Alena Mikšová Školitel: Doc. PharmDr. Lucie Nováková, PhD. Název diplomové práce: Vývoj UHPLC-MS/MS metody pro stanovení pravastatinu, rosuvastatinu a jejich metabolitů Tato diplomová práce se zabývá vývojem UHPLC-MS/MS metody určené pro stanovení pravastatinu, rosuvastatinu a jejich metabolitů. Byly optimalizovány základní parametry pro MS detekci - desolvační teplota, iontová optika (napětí na hexapolu a na extraktoru), průtok dusíku na vstupním kuželu, napětí na kapiláře, průtok dusíku a napětí na vstupním kuželu, které je specifické pro každou látku. K separaci analytů byla použita kolona BEH C18 (2,1 x 100 mm, 1,7µm). Jako detektor byl použit trojitý kvadrupól. Ionizace byla provedena elektrosprejem v negativním i pozitivním modu. Kvantifikace analytů byla provedena pomocí SRM (monitorování vybrané reakce). Prekurzorovým iontem pro všechny stanovované statiny v pozitivním modu byl vybrán iont [M+H]+ , který byl v hmotnostním spektru nejintenzivnější. U pravastatinu laktonu byl dále vybrán amonný adukt [M+NH4]+ . V negativním modu byl u všech stanovovaných statinů vybrán iont [M-H]- . U pravastatinu laktonu a rosuvastatinu laktonu byl rovněž vybrán acetátový adukt [M-H+CH3COO]- . Při zvolených...
|
|
| |
|
|
Vývoj Stage tips-UHPLC-MS/MS metody pro stanovení statinů v lidském séru
Otoupal, Lukáš ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Lukáš Otoupal Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj Stage tips-UHPLC-MS/MS metody pro stanovení statinů v lidském séru. Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody pro stanovení klinicky významných statinů v lidském séru. Pro extrakci statinů byla zvolena a optimalizována extrakce s využití Stage tips pipetovacích špiček. Statiny byly proměřeny na ultra- vysokoúčinné kapalinové chromatografii ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem typu trojitého kvadrupólu. Byl optimalizován nejen postup extrakce, ale také základní parametry hmotnostního spektrometru. Chromatografická separace byla převzata z dříve publikované práce. Optimalizace parametrů hmotnostního spektrometru byla započata výběrem prekurzorových iontů, následně optimalizací jednotlivých parametrů iontového zdroje a v konečné fázi volbou vhodného ionizačního módu, SRM přechodu a kolizní energie pro každý analyt. Pro ověření vhodnosti LC-MS metody byla změřena opakovatelnost metody (RSD ≤ 1 pro retenční čas a RSD ≤ 10 pro plochu píku), linearita (korelační koeficient ≥ 0,997) a citlivost (LOQ v rozsahu 5 x 10-10 - 1 x 10-9 g/ml). Při vývoji Stage tips metody byla provedena nejprve optimalizace na směsném...
|
|
|
Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích
Štětková, Kateřina ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Štětková Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph. D. Název diplomové práce: Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích Tato diplomová práce se zabývá vlivem koncentrace ACN, pH a koncentrace pufru v mobilní fázi na retenci a selektivitu kolon Atlantis HILIC Silica (3 μm, 2,1 mm x 100 mm) a Luna NH2 (3 μm, 2,0 mm x 100 mm). Ke studii bylo vybráno celkem 35 analytů, které zahrnují látky neutrální, bazické a kyselé. Detekce byla provedena pomocí PDA detektoru při vlnové délce 245 nm. Všechna měření probíhala za podmínek izokratické eluce při průtoku 0,4 ml.min-1 s využitím směsi acetonitril/voda (pufr) jako mobilní fáze. Teplota na koloně byla nastavena na 30 řC, teplota autosampleru na 4 řC a použitý nastřikovaný objem byl 2 μl. Pro vyhodnocení výsledků byly z naměřených hodnot sestrojeny grafy a tabulky, které sloužily k hodnocení kolon z hlediska selektivity a retence jednotlivých skupin analytů. Kolona Atlantis HILIC Silica vykazovala chování typické pro HILIC chromatografii, tj. retence stoupala se zvyšující se koncentrací ACN v mobilní fázi a to především od >85% ACN. Kolona Luna NH2 kromě HILIC chování navíc vykazovala silnou retenci...
|
|
|
Využití alternativních mobilních fází pro metodu Hydrofilní interakční chromatografie
Münsterová, Barbora ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Barbora Münsterová Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití alternativních mobilních fází pro metodu Hydrofilní interakční chromatografie Tato diplomová práce se zabývala možnostmi využití 1,3-dioxolanu jako alternativní organické složky mobilní fáze v hydrofilní interakční chromatografii. Byly porovnávány změny v selektivitě a účinnosti separace při použití dioxolanu a acetonitrilu jako organických složek mobilní fáze. Jako vodná složka pro klasickou HILIC byl použit 0,5 % roztok kyseliny octové nebo 50 mM octan amonný pH 3,8, pH 6,8 a pH 9,8. Pro nevodnou HILIC bylo testováno složení mobilní fáze acetonitril- dioxolan, accetonitril-dioxolanový roztok 0,5 % kyseliny octové a acetonitril-dioxolan modifikovaný vodným roztokem 50 mM octanu amonného pH 6,8. Pro měření na koloně ACQUITY UPLC BEH Amide (1,7 µm, 2,1 mm x 100 mm, Waters) bylo využito 5 různých skupin látek, a to fenolických kyselin, purinových a pyrimidinových bází, derivátů pyridinu, vitaminů rozpustných ve vodě a skupiny betablokátorů. Byla hodnocena retence, selektivita a rychlost separace. Měření probíhalo na přístroji ACQUITY Ultra Performance LC za detekce pomocí PDA detektoru při vlnové délce...
|
host ::
RSS.