|
|
Nové možnosti aplikace nittrilas v biokatalýze a bioremediaci
Veselá, Alicja Barbara ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Weignerová, Lenka (oponent)
Nitrilasy jsou enzymy, jež katalyzují hydrolýzu nitrilů na karboxylové kyseliny. Pro svou chemo- a enantioselektivitu mají tyto enzymy velký potenciál pro využití v biokatalýze, např. při syntéze kyseliny mandlové a mandelamidu, nebo bioremediaci míst kontaminovaných organickými nitrily. V této práci byla studována nitrilasová aktivita rekombinantních kmenů E. coli exprimujících hypotetické fungální nitrilasy z hub Giberella moniliformis a Nectria haematococca mpVI 77-13-4 a schopnost bakterií rodu Rhodococcus a Nocardia hydrolyzovat benzonitrilové herbicidy dichlobenil (2,6-dichlorbenzonitril), ioxynil (3,5-dijod- 4-hydroxybenzonitril) a bromoxynil (3,5-dibrom-4-hydroxybenzonitril). Hypotetické fungální nitrilasy byly exprimovány jako funkční enzymy. Nitrilasa z G. moniliformis vykazovala nejvyšší aktivitu k benzonitrilu (30,9 U/mg proteinu); při kultivaci byla získána aktivita 2560 U/l buněčné suspenze. Preferovaným substrátem enzymu z N. haematococca byl fenylacetonitril (12,3 U/mg prot.), celkem bylo získáno 28050 U/l buněčné suspenze. Nitrilasa z N. haematococca byla schopna hydrolyzovat mandelonitril (5,9 U/mg prot.). Půdní bakterie Rhodococcus rhodochrous PA-34, Nocardia globerula NHB-2 a Rhodococcus sp. NDB 1165 hydrolyzovaly herbicidy ioxynil, bromoxynil a chlorovaný analog 3,5-dichlor-4-...
|
|
|
Study of function and molecular architecture of fungal nitrilases applicable in biocatalysis
Veselá, Alicja Barbara ; Martínková, Ludmila (vedoucí práce) ; Macek, Tomáš (oponent) ; Teisinger, Jan (oponent)
Nitrilasy jsou enzymy katalyzující hydrolýzu nitrilů na příslušné karboxylové kyseliny a amonné ionty. Tyto enzymy mohou nalézt využití v biokatalýze a bioremediaci pro vyšší nenáročnost, bezpečnost a jednoduchost takto katalyzovaných reakcí před konvenčními metodami hydrolýzy nitrilů. V této práci byly pomocí metody prohledávání databazí vybrány sekvence hypotetických fungálních nitrilas. Jako templáty posloužily aminokyselinové sekvence fungálních nitrilas již dříve charakterizovaných v naší laboratoři. Následně byly nové syntetické geny spolu se zbylými geny z naší nitrilasové knihovny exprimovány v E. coli a poté byly porovnány jejich substrátové specifity a podobnost sekvencí. Arylacetonitrilasy z hub Arthroderma benhamiae (NitAb) a Nectria haematococca (NitNh) byly purifikovány a charakterizovány; byly stanoveny jejich substrátové specifity, kinetické parametry, pH a teplotní profily a velikost podjednotek. NitAb a NitNh spolu s dalšími rekombinantními fungálními nitrilasami byly použity pro hydrolýzu vysokých koncentrací (R,S)-mandelonitrilu v jedné dávce nebo s postupným dávkováním substrátu. Ze studovaných enzymů nitrilasa z Aspergillus niger vykázala nejlepší enantioselektivitu (e.e. pro (R)-mandlovou kyselinu až 97,6 %) a produktivitu enzymu v sušině (až 40 g gsuš -1 ). NitAb byla pouze mírně...
|
|
|
Nové možnosti aplikace nittrilas v biokatalýze a bioremediaci
Veselá, Alicja Barbara ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Weignerová, Lenka (oponent)
Nitrilasy jsou enzymy, jež katalyzují hydrolýzu nitrilů na karboxylové kyseliny. Pro svou chemo- a enantioselektivitu mají tyto enzymy velký potenciál pro využití v biokatalýze, např. při syntéze kyseliny mandlové a mandelamidu, nebo bioremediaci míst kontaminovaných organickými nitrily. V této práci byla studována nitrilasová aktivita rekombinantních kmenů E. coli exprimujících hypotetické fungální nitrilasy z hub Giberella moniliformis a Nectria haematococca mpVI 77-13-4 a schopnost bakterií rodu Rhodococcus a Nocardia hydrolyzovat benzonitrilové herbicidy dichlobenil (2,6-dichlorbenzonitril), ioxynil (3,5-dijod- 4-hydroxybenzonitril) a bromoxynil (3,5-dibrom-4-hydroxybenzonitril). Hypotetické fungální nitrilasy byly exprimovány jako funkční enzymy. Nitrilasa z G. moniliformis vykazovala nejvyšší aktivitu k benzonitrilu (30,9 U/mg proteinu); při kultivaci byla získána aktivita 2560 U/l buněčné suspenze. Preferovaným substrátem enzymu z N. haematococca byl fenylacetonitril (12,3 U/mg prot.), celkem bylo získáno 28050 U/l buněčné suspenze. Nitrilasa z N. haematococca byla schopna hydrolyzovat mandelonitril (5,9 U/mg prot.). Půdní bakterie Rhodococcus rhodochrous PA-34, Nocardia globerula NHB-2 a Rhodococcus sp. NDB 1165 hydrolyzovaly herbicidy ioxynil, bromoxynil a chlorovaný analog 3,5-dichlor-4-...
|
|
| |
|
|
Seeking Novel Nitrilase Enzyme (Nitrile Aminohydrolase, EC 3.5.5.1)
Martínková, Ludmila ; Kaplan, Ondřej ; Veselá, Alicja Barbara
Our research group has created a library of novel nitrilases. In general, the enzymes are available from heterologous producers in amounts ranging from 10 to 20 mg of protein exhbiting 25-50 % purity. The enzymes differ from each other in substrate specificity, temperature optimum, enantioselectivity (arylacetonitrilases) etc. Preferential substrates are phenylacetonitrile, (R,S)-mandelonitrile, benzonitrile or cyanopyridines (depending on the enzyme).
|
host ::
RSS.