|
|
Modifikace sorbentu pro SPE
Mrenková, Nikola ; Lochman, Lukáš (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ Katedra farmaceutickej chémie a farmaceutickej analýzy Kandidát: Nikola Mrenková Školiteľ: PharmDr. Lukáš Lochman, Ph.D. Názov diplomovej práce: Modifikácia sorbentu pre SPE Úprava vzorku patrí medzi najkritickejší bod v chromatografickej analýze vzoriek biologického materiálu, závisí na nej celkový úspech chromatografickej analýzy. Komplexný charakter biologických vzoriek a nízka koncentrácia cieľových analytov viedli k vývoju rôznych techník selektívnych úprav vzoriek. Pre svoju univerzálnosť a selektivitu je extrakcia na pevnej fáze (SPE) jednou z najrozšírenejších metód. Grafén pre svoje unikátne vlastnosti (veľký špecifický povrch, delokalizovaný systém π elektrónov, hydrofóbny charakter) sa stal jedným z vhodných kandidátov ako látka pre vývoj nového typu sorbentu pre SPE. Diplomová práca bola zameraná na štúdium vlastností modifikovanej stacionárnej fáze pre SPE založenej na graféne. Konkrétne sa jednalo o naviazanie grafén-oxidových (GO) plátov na aminosilikagél prostredníctvom amidovej väzby medzi karboxylovými skupinami GO a aminoskupinami aminosilikagélu, s následnou hydrazínovou redukciou na redukovaný grafén-oxid (rGO). Pre štúdium vlastností pripraveného sorbentu boli vybrané modelové analyty s rozdielnymi fyzikálno-chemickými...
|
|
|
Stanovení metabolitů tyrosinu III
Licková, Gabriela ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMACEUTICKÉ CHEMIE A FARMACEUTICKÉ ANALÝZY Kandidát: Gabriela Licková Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Konzultant: Ing. Daniel Heblík Název diplomové práce: Stanovení metabolitů tyrosinu Tématem diplomové práce bylo stanovení metabolitů tyrosinu (adrenalin, noradrenalin, dopamin, L-DOPA) s využitím derivatizační reakce a následnou analýzou za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenčním detektorem. Stěžejním krokem celé práce byla optimalizace podmínek derivatizační reakce. Jako derivatizační činidlo byl použit FMOC-Cl (fluorenylmethyloxykarbonyl chlorid), který reagoval s katecholaminy v přítomnosti borátového pufru. Nejprve byla stanovena vhodná koncentrace činidla (2,7 mM), čas (15 min) a teplota (40 řC) reakce. Dále byla optimalizována koncentrace (100 mM) a pH (8,0) borátového pufru. Pro účinnou separaci bylo nutné nastavit vhodné podmínky. Kolona byla použita silikagelová Kinetex EVO C18 s částicemi s pevným jádrem. Složení mobilní fáze bylo nutné optimalizovat a výsledná mobilní fáze se skládala z kyseliny mravenčí (20 mM) a acetonitrilu v poměru 32:68. Výsledná použitá průtoková rychlost činila 0,6 ml/min. Kolona byla temperována na 40 řC. Nástřikový objem byl 5 μl a doba celé analýzy...
|
|
|
Sledování oxidačního stresu HPLC metodami
Kalíšková, Tereza ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Reaktivní formy kyslíku a dusíku mají v organismech svou fyziologickou úlohu, ale jejich nadměrná tvorba poškozuje buňky a může vyústit v řadu onemocnění. Interakcí reaktivních forem kyslíku a dusíku s biomolekulami dochází k jejich poškození. Poškozené molekuly lipidů, proteinu i DNA poté slouží jako biomarkery oxidačního stresu a umožňují jeho hodnocení. Oxidační stres může být vyvolán také vnějšími faktory například léčivy, ten se poté může projevit jako nežádoucí a toxické účinky. Pro sledování bezpečnosti léčiv je tedy důležité sledovat schopnost léčiva vyvolat oxidační stres. Pro stanovení malondialdehydu z buněčné pelety jako biomarkeru lipoperoxidace byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometii. Největší pozornost byla věnována optimalizaci úpravy vzorku pomocí deproteinace, derivatizace a extrakce na tuhou fázi. Metoda byla validována s přijatelnou specifitou, přesností, precizností výtěžnosti i matricovými efekty a vyhovuje tak požadavkům Evropské lékové agentury na validaci bioanalytických metod. Metodou lze stanovit intracelulární malondialdehyd v rozmezí koncentrací 0,1-2 μmol∙dm-3. Metoda byla úspěšně použita na analýzu biologických vzorků z in vitro experimentu, kde bylo hodnoceno množství malondialdehydu v HepG2 buňkách...
|
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu
Knoblochová, Dominika ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominika Knoblochová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu 3-hydroxykynurenin je jedním z metabolitů tryptofanu a je studován zvláště pro svoji oxidačně modulační aktivitu, díky které má schopnost chránit buňky před oxidačním stresem. Je tvořen z kynureninu katalýzou enzymu kynurenin 3-monooxygenasa, jehož aktivita je sledována na Katedře farmakologie a toxikologie. Pro její studování je třeba kvantitativně stanovit 3-hydroxykynurenin v biologické matrici. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout HPLC metodu pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a následně metodu validovat. Během vývoje bylo testováno několik mobilních fází s různými hodnotami pH. Výsledná mobilní fáze byla tvořena 100mM kyselinou mravenčí (pH = 2,25) a methanolem (95:5). Byly také zkoušeny různé typy stacionárních fází, z nichž byla nakonec zvolena kolona YMC TRIART PFP s rozměry 15 × 3 mm a rozměrem částic 5 µm. K detekci 3-hydroxykynureninu byl zvolen UV-VIS detektor, na němž byla nastavena vlnová délka 370 nm. Byla...
|
|
|
Optimalizace podmínek derivatizační reakce pro GC-MS analýzu vybraných látek
Jan, Tomáš ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Kandidát: Tomáš Jan Název diplomové práce: Optimalizace podmínek derivatizační reakce pro GC-MS analýzu vybraných látek Chinolinová kyselina je endogenní molekula vznikající kynurenátovou cestou jako meziprodukt při metabolické přeměně aminokyseliny L-tryptofanu. Chinolinová kyselina působí jako agonista na NMDA receptorech, jejichž nadměrná aktivace vede k buněčné smrti neuronů. Současné výzkumy přisuzují zvýšené hladině chinolinové kyseliny vyšší riziko rozvoje neurodegenerativních chorob a poruch chování. Hladina kyseliny může být zvýšena větším příjmem tryptofanu (např. doplňky stravy pro zklidnění a podporu duševního zdraví) nebo probíhajícím zánětem v organismu. Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro stanovení chinolinové kyseliny v různých matricích za využití GC/MS a doplnit tak metody, kterými jsou stanovovány ostatní metabolity tryptofanu. Úspěšně byla vyzkoušena derivatizace alkylchloroformiáty. Selektivita byla testována na koloně RTX-5MS s nepolární stacionární fází a na polární koloně SLB-IL59 využívající iontové kapaliny. Analyty byly detekovány na hmotnostním spektrometru typu jednoduchého kvadrupólu...
|
|
|
Stanovení fyzikálně-chemických a farmakokinetických vlastností sloučenin ze skupiny potenciálních antituberkulotik
Nevosadová, Lenka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Diplomová práce se zaměřuje na stanovení fyzikálně−chemických a stabilitních vlastností vybraných látek ze skupiny potenciálních antituberkulotik označovaných jako T−, K−, LV− a G− látky Cílem této práce bylo rozšířit o těchto sloučeninách portfolio informací nezbytných k výběru látek pro následné preklinické testování nových potenciálních léčiv. Teoretická část práce přináší seznámení s celosvětově rozšířeným závažným infekčním onemocněním, tuberkulózou, a vznikající rezistencí kmenů Mycobacterium tuberculosis na nynější léčiva. Dále jsou zde uvedeny vývojové směry nových potenciálních antituberkulotik a popis analytických metod použitých v experimentální části - spektrofotometrie, kapalinová chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Experimentální část práce se věnuje popisu jednotlivých postupů, které byly použity pro stanovení vlastností vybraných látek. Jmenovitě se jedná o rozpustnost látky v 5 % DMSO, stabilitu v plasmě a Šulově půdě, mikrosomální stabilitu a experimentální stanovení logP/logD. Z výsledků experimentů je velmi dobře patrné, jak jednotlivé strukturní obměny v molekulách látek ovlivnily některé farmakokinetické či fyzikálně-chemické vlastnosti dané sloučeniny. Například snížení plasmatické stability, v důsledku začleněním síry do uhlíkového spojovacího řetězce, nebo snížení...
|
|
|
LC-MS/MS studie 1. fáze in vitro biotransformace potenciálních léčiv působících v terapii Alzheimerovy nemoci.
Kuřátková, Aneta ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Doposud nebyla nalezena léčba, která by zcela zastavila progresi Alzheimerovy nemoci. Dříve používaný takrin měl v terapii Alzheimerovy choroby dobré výsledky, nicméně dlouhodobé užívání vedlo k chronické hepatotoxicitě způsobené jeho metabolity. Tato diplomová práce se zabývá sloučeninou 7-fenoxytakrin, která je jedním z nadějných substituovaných derivátů takrinu a mohla by být jedním z kandidátů pro potenciální využití v terapii Alzheimerovy choroby. Z důvodu vzniku hepatotoxických metabolitů takrinu po biotransformaci v játrech se jeví jako nezbytné u molekuly 7-fenoxytakrinu identifikovat jeho vznikající metabolity. V rámci diplomové práce byla provedena in vitro biotransformační studie 7-fenoxytakrinu za použití lidských jaterních mikrosomů. Pro stanovení parentní látky a vznikajících sedmnácti metabolitů byla využita technika vysokoúčinné kapalinové chromatografie spojená s tandemovou hmotnostní spektrometrií. Výsledky ukázaly vznik šesti monohydroxylovaných a jedenácti dihydroxylovaných metabolitů 7-fenoxytakrinu. Hydroxylace je tedy hlavní metabolická reakce po in vitro mikrosomální biotransformaci. Kromě identifikace metabolitů byla v rámci této diplomové práce provedena i kvantifikační a mikrosomálně stabilitní studie zahrnující stanovení úbytku parentní látky v čase. Dále byl stanoven...
|
|
|
Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech
Salvová, Šárka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Autor: Šárka Salvová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Nela Váňová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech Gilteritinib, léčivo ze skupiny antineoplastik, se využívá k cílené protinádorové terapii. Řadí se k inhibitorům tyrosinkinázových receptorů. Jeho struktura je založena na pyrazinkarboxamidovém skeletu. Doposud byl chromatograficky stanovován v biologickém materiálu pouze z plazmy. V této diplomové práci byl gilteritinib stanovován z buněčného média Opti-MEM za účelem využití pro in vitro transportní experimenty a následně byla optimalizovaná a validovaná metoda LC-MS/MS. V průběhu vývoje a optimalizace LC- MS/MS metody byla u hmotnostního spektrometru Thermo Finnigan LCQ Advantage Max Ion Trap s narůstajícím počtem nástřiků pozorována zvyšující se suprese signálu pro gilteritinib i jeho vnitřní standard (maravirok), která dosahovala až 75 % po pouhých 30 nástřicích. Také byla viditelná kontaminace vstupu na iontransferovou kapiláru, ke které je iontový zdroj (elektrosprej) umístěn diagonálně. Dále bylo testováno, zdali jiná konstrukce iontového zdroje (ortogonální poloha elektrospreje) problém nevyřeší. Po transferu metody na...
|
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu
Knoblochová, Dominika ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominika Knoblochová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu 3-hydroxykynurenin je jedním z metabolitů tryptofanu a je studován zvláště pro svoji oxidačně modulační aktivitu, díky které má schopnost chránit buňky před oxidačním stresem. Je tvořen z kynureninu katalýzou enzymu kynurenin 3-monooxygenasa, jehož aktivita je sledována na Katedře farmakologie a toxikologie. Pro její studování je třeba kvantitativně stanovit 3-hydroxykynurenin v biologické matrici. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout HPLC metodu pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a následně metodu validovat. Během vývoje bylo testováno několik mobilních fází s různými hodnotami pH. Výsledná mobilní fáze byla tvořena 100mM kyselinou mravenčí (pH = 2,25) a methanolem (95:5). Byly také zkoušeny různé typy stacionárních fází, z nichž byla nakonec zvolena kolona YMC TRIART PFP s rozměry 15 × 3 mm a rozměrem částic 5 µm. K detekci 3-hydroxykynureninu byl zvolen UV-VIS detektor, na němž byla nastavena vlnová délka 370 nm. Byla...
|
|
|
Optimalizace podmínek derivatizační reakce pro GC-MS analýzu vybraných látek
Jan, Tomáš ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Kandidát: Tomáš Jan Název diplomové práce: Optimalizace podmínek derivatizační reakce pro GC-MS analýzu vybraných látek Chinolinová kyselina je endogenní molekula vznikající kynurenátovou cestou jako meziprodukt při metabolické přeměně aminokyseliny L-tryptofanu. Chinolinová kyselina působí jako agonista na NMDA receptorech, jejichž nadměrná aktivace vede k buněčné smrti neuronů. Současné výzkumy přisuzují zvýšené hladině chinolinové kyseliny vyšší riziko rozvoje neurodegenerativních chorob a poruch chování. Hladina kyseliny může být zvýšena větším příjmem tryptofanu (např. doplňky stravy pro zklidnění a podporu duševního zdraví) nebo probíhajícím zánětem v organismu. Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro stanovení chinolinové kyseliny v různých matricích za využití GC/MS a doplnit tak metody, kterými jsou stanovovány ostatní metabolity tryptofanu. Úspěšně byla vyzkoušena derivatizace alkylchloroformiáty. Selektivita byla testována na koloně RTX-5MS s nepolární stacionární fází a na polární koloně SLB-IL59 využívající iontové kapaliny. Analyty byly detekovány na hmotnostním spektrometru typu jednoduchého kvadrupólu...
|
host ::
RSS.