|
|
Komparativní studium kmenů Trichomonas vaginalis s různou mírou rezistence k metronidazolu
Havelka, Michal ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Kopáček, Petr (oponent)
Trichomonas vaginalis je anaerobní prvok způsobující lidské onemocnění trichomoniázu. Nejčastěji užívaným lékem v boji proti trichomoniáze je metronidazol. Metronidazol má vysokou účinnost, přesto se v některých případech setkáváme u T. vaginalis s rezistencí k tomuto léčivu. U T. vaginalis se rezistence k metronidazolu dělí na dva typy podle podmínek, ve kterých se projevuje - aerobní a anaerobní rezistence. Oba typy rezistence jsou spojené se změnami ve fyziologii parazita. Cílem této práce bylo charakterizovat změny v hydrogenozomu a cytosolu spojené s rezistencí k metronidazolu na úrovni proteomu aerobně rezistentních klinických izolátů, aerobně rezistentní linie MR3 a anaerobně rezistentní linie MR100. Práce si zároveň kladla za cíl charakterizovat funkci hybrid-cluster proteinu a pokusit se objasnit jeho úlohu při vzniku rezistence, jelikož jeho produkce výrazně stoupá u aerobně i anaerobně rezistentních kmenů T. vaginalis. Tato práce přispěla k identifikaci několika potenciálních proteinů, jež by mohly hrát roli při vývoji rezistence k metronidazolu, a vytvořila opěrný bod pro další metabolomické a biochemické studie kmenů T. vaginalis rezistentních k metronidazolu.
|
|
|
Biogeneze a funkce peroxisomů u parazitických prvoků
Nguyen, Thu Duong ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Verner, Zdeněk (oponent)
Peroxisomy se nachází u velké většiny eukaryot a zřejmě pochází od společného předka všech eukaryot, neboť proteiny spojené s biogenezí peroxisomů jsou evolučně vysoce konzervované. Na rozdíl od jejich biogeneze je enzymatický obsah peroxisomů velmi rozmanitý a metabolická aktivita peroxisomů se tak může lišit i na základě buněčného typu stejného organismu. Peroxisomy jsou funkčně spjaté s mitochondriemi a tyto dvě organely se navzájem ovlivňují. Peroxisomy u jednobuněčných eukaryot jsou velmi různorodé. Například u kinetoplastidů (skupina Discoba) je charakteristická kompartmentalizace enzymů glykolýzy do peroxisomů, zvané glykosomy. U alveolátů dochází u určitých zástupců ke ztrátám peroxisomů a u anaerobních prvoků skupiny Metamonada nejsou peroxisomy přítomné. Tzv. anaerobní peroxisomy, které byly nalezeny u skupiny Archamoeba, jsou metabolicky zcela odlišné od aerobních peroxisomů. Je zřejmé, že vlastnosti těchto peroxisomů souvisí s životním stylem těchto prvoků. V této práci jsou stručně shrnuty informace ohledně biogeneze peroxisomů a jejich funkcích, dále je popsána jejich funkční souvislost s mitochondrií, a nakonec jsou shrnuty poznatky o peroxisomech u parazitických prvoků.
|
|
|
Vliv patogenních agens na vaginální mikrobiom
Procházková, Jana ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Smutná, Tamara (oponent)
Lidské tělo je hojně osídleno nejrůznějšími mikroorganismy. Tyto mikroorganismy tvoří ucelená společenství, které v kontaktu s konkrétními lidskými orgány vytváří tzv. mikrobiomy. Každý mikrobiom je unikátní ve svém složení. Studium mikrobiomů napomáhá nejen odhalit jejich složení, ale i pochopit komplexní interakce, které vznikají mezi mikroorganismy a člověkem. Metody analýzy mikrobiomů se stále zlepšují. Ke studiu mikrobiomů se v současnosti nejvíce používá sekvenování nové generace, které například napomáhá identifikovat jednotlivé zástupce, kteří se v mikrobiomech vyskytují. Je již známo, že bakterie rodu Lactobacillus u většiny žen tvoří dominantní složku zdravého vaginálního mikrobiomu. Zdravý vaginální mikrobiom má nezastupitelný význam v udržování homeostáze a správného fungování urogenitálního traktu žen. Hraje také důležitou roli v jeho ochraně před patogenními agens. Mezi tyto patogenní agens patří viry, bakterie, archea a eukaryota. V rámci této bakalářské práce je vybráno několik zástupců z domén Bacteria a Eukaryota, kteří primárně napadají urogenitální trakt žen. Dle statistických odhadů vyplývá, že Trichomonas vaginalis je celosvětově nejrozšířenějším patogenním agens urogenitálního traktu žen, a proto je studium obranyschopnosti vaginálního mikrobiomu vůči tomuto parazitovi velmi důležité....
|
|
|
Anaerobic fungi and herbivores
Pristašová, Paulína ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Hrdý, Ivan (oponent)
Anaeróbne huby Neocallimastigomycotina patria k anaeróbnym symbiontom bachorového mikrobiómu. Táto špecifická skupina húb patrí k bazálnym líniám ríše Fungi, odlišujúca sa od aeróbnych zástupcov húb v mnohých aspektoch, vrátane prítomnosti hydrogenozómov a tvorbou celulozómov. V bachore prebieha ich kompletný životný cyklus, zahrňujúci pohyblivé zoospóry, ktoré po kolonizácií rastlinnej biomasy vyklíčia vo vegetatívnu stielku, tvoriacu sporangium. V ekosystéme bachoru patria k primárnym kolonizátorom rastlinnej biomasy, kedy pomocou extracelulárnych multienzýmovych komplexov- celulozómov, degradujú odolnú bunkovú stenu rastlín. Schopnosť tvoriť celulozómy, doposiaľ pozorovanú len u prokaryot, získali horizontálnym génovým prenosom od bachorových baktérií. Výsledkom ich spoločnej koevolúcie sú taktiež pozorované syntrofické reakcie s metanogénmi, ktoré využívajú hubovými hydrogenzómami vytvorený H2. Ich potencionálne biotechnologické využitie zahrňuje tvorbu bioplynu, či zefektívnenie zisku z potravy hospodárskeho dobytka. Kľúčové slová: anaeróbne huby, bachor, hydrogenozóm, celulozóm
|
|
|
Effect of endosymbionts on composition and properties of Trichomonas vaginalis exosomes
Zdrha, Alois ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent)
Trichomonas vaginalis je parazit lidského reprodukčního systému a je původcem nejrozšířenější nevirové sexuálně přenosné nemoci trichomoniázy. Tato nemoc má většinou mírný průběh, ačkoli dokáže způsobit i závažné zdravotní komplikace. Průběh onemocnění je závislý na imunitním systému pacienta, mikrobiomu a virulenci parazita. Je však důležité, že virulence T. vaginalis je značně variabilní a je závislá na sekretovaných a povrchových molekulách. Mezi ně patří proteázy a adheziny, které mohou být sekretované v sekretomu nebo v extracelulární váčcích (EV). Dalšími potenciálními faktory virulence jsou: Trichomonas vaginalis virus (TVV) a Mycoplasma hominis. Ačkoliv se vlivem TVV na virulenci T. vaginalis zabývalo mnoho studií, vědci se dosud neshodli. Tato práce analyzuje vliv TVV na složení proteinů a RNA v exosomech a dopad TVV na sekreci cytokinů. Klíčová slova endosymbionti, dsRNA virus, TVV, exosomy, paraziti, Trichomonas vaginalis, bioinfor- matika
|
|
|
Prvoci osídlující ústní dutinu člověka a domácích zvířat
Brixí, Kateřina ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Rada, Petr (oponent)
V ústní dutině člověka a domácích zvířat se mohou vyskytovat různé druhy prvoků, jako je Entamoeba gingivalis, Trichomonas tenax, Trichomonas gallinae, Trichomonas stableri, Trichomonas gypaetinii, Trichomonas equibuccalis, Trichomonas brixi, Tetratrichomonas canistomae, Tetratrichomonas felistomae a Tetratrichomonas empyemagena. Ve většině případů jsou tito prvoci označováni za komenzály a je jim věnována poměrně malá pozornost, protože nebývají primární příčinou závažných zdravotních potíží. Na základě shrnutí dosavadních poznatků ovšem lze usoudit, že výstižnější označení pro Entamoeba gingivalis a Trichomonas tenax je oportunní patogen, zatímco Trichomonas gallinae je primárním patogenem. O ostatních prvocích existuje jen velmi málo studií a poznatků o jejich patogenitě, nelze proto jednoznačně posoudit jejich význam pro hostitele. Prvoci z ústní dutiny by nicméně neměli být opomíjeni, protože v některých případech mohou u svého hostitele způsobit vážné zdravotní komplikace.
|
|
|
Paraziti včely medonosné a jejich vliv na mikrobiom zažívacího traktu.
Řezníková, Johanka ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Votýpka, Jan (oponent)
Vzhledem k velikému ekologickému i ekonomickému významu včely medonosné je zdravotní stav včelstev předmětem intenzivního výzkumu. Přesto jsou odpovědi na některé otázky stále nejasné. V současnosti čelíme rozsáhlým ztrátám včelích kolonií o jejichž pochopení se vědecká komunita usilovně snaží. Oslabení včelstev mohou působit například insekticidy, počasí, špatné složení stravy, narušení mikrobiomu, některé bakterie, viry a parazité. A právě včelím parazitům je věnována tato práce. O jednotlivých stresorech víme hodně. Méně je však známo o interakcích, k nimž mezi nimi dochází. Tato práce je proto zaměřena na shrnutí informací o některých vybraných parazitech včely medonosné s přihlédnutím k jejich vlivu na mikrobiom zažívacího traktu. Vybráno bylo šest nejvýznamnějších nebo často diskutovaných druhů parazitů: Nosema apis a Nosema ceranae, Crithidia mellificae a Lotmaria passim, Varroa destructor a Acarapis woodi. První kapitola je věnována včele medonosné, jejímu taxonomickému zařazení, anatomii, životu ve včelstvu a ochraně před patogeny. V druhé kapitole je podrobněji rozebrán střevní mikrobiom včel, jeho složení, funkce a narušení. Následující části jsou zaměřeny na jednotlivé včelí parazity a jejich vliv na střevní mikrobiom hostitele.
|
|
|
Proteomická analýza organel parazitických protist
Jedelský, Petr ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Kolářová, Libuše (oponent) ; Půta, František (oponent)
Rozvoj technologií pro sekvencování DNA přinesl technologický zlom, díky němuž bylo možné provést analýzu kompletních genomů, včetně parazitických protist Trichomonas vaginalis a Giardia intestinalis , které jsou tradičně studovány nejen z důvodu jejich klinického významu, ale rovněž z evolučního úhlu pohledu pro jejich adaptaci na anaerobní způsob metabolismu. Samotné dokončení sekvencování genomu a anotace predikovaných proteinových sekvencí nepřineslo detailní vhled do fungování organel odvozených od mitochondrie, jimiž jsou v případě G. intestinalis mitosomy, které se nepodílejí na energetickém metabolismu, a v případě T. vaginalis hydrogenosomy, které produkují molekulární vodík a produkují ATP substrátovou fosforylací. Tradiční metody výzkumu těchto organel založené na frakcionaci pomocí ultracentrifugace v hustotním gradientu a následné biochemické a enzymologické analýzy byly doplněny o metody jedno a dvoudimenzionální elektroforézy s následnou identifikací proteinů pomocí hmotnostní spektrometrie. V této práci byly použity metody...
|
|
|
Evoluce eukaryotických ABC transportérů
Žárský, Vojtěch ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Doležal, Pavel (oponent)
V posledních dvaceti letech probíhal intenzivní výzkum v oblasti ABC transportérů. Zájem o tyto membránové transportéry je zapříčiněn především tím, že některé ABC transportéry hrají roli v rezistenci rakovinných buněk a patogenů vůči používaným léčivům. Tento lékařský aspekt ABC transportérů byl ve výzkumu pochopitelně výrazně upřednostňován. Z pohledu obecných fyziologických funkcí a evoluce byly pak ABC transportéry přehlíženy. V této práci se proto zaměřuji na evoluci eukaryotických ABC transportérů, přehled ABC transportérů parazitických protist a na mitochondriální ABC transportéry, které jsou nejkonzervativnějšími eukaryotickými ABC transportéry.
|
|
|
Proteomic Analysis of Trichomonas vaginalis hydrogenosone
Campo Beltran, Neritza ; Tachezy, Jan (vedoucí práce) ; Nohýnková, Eva (oponent) ; Yarlett, Nigel (oponent)
Trichomonas vaginalis je lidský parazit, který ročně ohrožuje přibližně 258 milionů lidí. U tohoto parazita byla popsána organela mitochondriálního původu nazvaná hydrogenosom, která je schopná vytvářet energii v podobě ATP za anaerobních podmínek. Zkoumání a popisování nových proteinů, vyskytujících se v této organele, může přispět k objevení nových cílů pro antiparazitární léčbu. Zároveň nám tento výzkum pomůže porozumět fungování a evolučnímu původu této odvozené organely. Dostupnost již popsaných protokolů pro izolaci hydrogenosomů společně s kompletně zmapovaným genomem T. vaginalis umožňuje studovat tyto organely pomocí moderních metod hmotnostní spektrometrie a bioinformatických analýz. V rámci našeho výzkumu jsme použili různé přístupy umožňující popsat proteiny v těchto organelách. Jednalo se o transkriptomické a proteomické analýzy zjišťující buněčnou odpověď parazita T. vaginalis na změny koncentrace železa v prostředí. A dále změny v obsahu proteinů hydrogenosomů u T. vaginalis rezistentních na metronidazol. Organely byly v obou případech izolovány pomocí diferenciální centrifugace gradientu OptiPrepu. Takto připravené hydrogenosomy byly analyzovány hmotnostním spektrometrem pomocí nano-RP- HPLC/MALDI-TOF/TOF. Zároveň jsme pomocí Tritonu X-114 oddělili membránové a matrixové proteiny a...
|
host ::
RSS.