|
|
Struktura funkce vaniloidního receptoru TRPV1
Sušánková, Klára ; Vlachová, Viktorie (vedoucí práce) ; Kršiak, Miloslav (oponent) ; Chvátal, Alexandr (oponent)
ZAVER S využitím elektrofyziologické techniky "patch clamp" jsme zjistili, že redukční a oxidační látky senzitizují aktivaci teplem u vaniloidního receptoru. Pomocí cílené mutageneze jsme určili cystein 621, který se významně podílí na potenciaci odpovědí vyvolaných teplem působením redukční látky dithiothreitol. Ukázali jsme, že extracelulární cysteiny (C616, C621 a C634) TRPV1 receptoru se neúčastní senzitizace odpovědí na teplo vlivem oxidačních látek. Pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie jsme prokázali, že oxidační látky ovlivňují koncentraci agonistů TRPV1 receptoru. Prokázali jsme, že oxidační komplex 1,10-fenantrolinu s měďnatými kationty (Cu:Phe) je blokátorem TRPV1 iontového kanálu. Inhibiční účinek Cu:Phe je vratný, koncentračně a napěťově závislý a není zprostředkován extracelulárními cysteiny. Ukázali jsme, že Cu:Phe blokuje i příbuzný iontový kanál TRPM8. Pomocí analýzy funkčních vlastností C-zkrácených variant TRPVI receptoru ahomologního modelu jsme popsali úlohu C-konce vaniloidního receptoru. Ukázali jsme, že se zkracující se C-terminálou TRPV1 receptoru klesají amplitudy membránových proudů vyvolaných aplikací všech testovaných podnětů (kapsaicin, snížené pH, depolarizační napětí a bolestivé teplo). Odstranění 31 aminokyselin vedlo významnému snížení teplotního prahu aktivace,...
|
host ::
RSS.