|
|
Voltammetric and amperometric determination of homovanillic, vanillylmandelic, and 5-hydroxyindole-3-acetic acid
Němečková, Anna ; Barek, Jiří (vedoucí práce) ; Labuda, Ján (oponent) ; Skopalová, Jana (oponent)
Předložená disertační práce je zaměřena na vývoj elektrochemických metod stanovení biomarkerů nádorových onemocnění: homovanilové (HVA), vanilmandlové (VMA) a 5-hydroxy-3-indoloctové (5-HIAA) kyseliny. V první části práce bylo zkoumáno elektrochemické chování těchto analytů ve vsádkovém uspořádání pomocí diferenční pulsní voltametrie (DPV) na sítotiskových uhlíkových elektrodách (SPCEs). Bylo prokázáno, že toto stanovení je dostatečně citlivé pro sledování těchto biomarkerů a že může být použito i pro stanovení HVA a VMA ve směsi. Získané meze detekce (LOD) byly 0,24 µmol·L-1 pro HVA, 0,06 µmol·L-1 pro VMA a 0,12 µmol·L-1 pro 5-HIAA. Požadavky na zrychlení analýzy a zároveň snížení její ceny byly impulsem pro stanovení vybraných analytů v průtoku. Nejprve byla studována průtoková injekční analýza s amperometrickou detekcí pro stanovení všech tří biomarkerů na stejných SPCE, poté bylo podobné stanovení pro strukturně podobnější látky, HVA a VMA, v průtoku provedeno i na borem dopované diamantové elektrodě (BDDE). Po optimalizaci metod byly dosaženy následující LOD: s použitím SPCE 0,07 µmol·L-1 pro HVA, 0,05 µmol·L-1 pro VMA a 0,03 µmol·L-1 pro 5-HIAA; s použitím BDDE 0,44 µmol·L-1 pro HVA a 0,34 µmol·L-1 pro VMA. Dále bylo studováno stanovení sledovaných biomarkerů v lidské moči metodou HPLC s...
|
|
|
Voltammetric Determination of Tumor Biomarkers using Flow Injection Analysis with Amperometric Detection
Němečková-Makrlíková, Anna ; Matysik, F.-M. ; Navrátil, Tomáš ; Barek, J. ; Vyskočil, V.
Three tumor biomarkers (homovanillic acid, vanillylmandelic acid, and 5-hydroxyindole-3-acetic acid) have been determined by flow injection analysis with amperometric detection at screen-printed carbon electrodes in optimum medium of Britton-Robinson buffer (0.04 mol l(-1), pH = 2.0). Dependences of the peaks current on the concentration of biomarkers were linear in the tested concentration region from 0.05 to 100 mu mol l(-1), with the limits of detection of 0.065 mu mol l(-1) for homovanillic acid, 0.053 mu mol l(-1) for vanillylmandelic acid, and 0.033 mu mol l(-1) for 5-hydroxyindole-3-acetic acid (calculated from heights), and 0.024 mu mol l(-1) for homovanillic acid, 0.020 mu mol l(-1) for vanillylmandelic acid, and 0.012 mu mol l(-1) for 5-hydroxyindole-3-acetic acid (calculated fromareas), respectively.
|
|
|
HPLC-ED/UV for determination of vanillylmandelic acid in human urine after solid phase extraction
Němečková-Makrlíková, Anna ; Dejmková, H. ; Navrátil, Tomáš ; Barek, J. ; Vyskočil, V.
HPLC with electrochemical and spectrophotometric detection (ED/UV) after solid phase extraction (SPE) was used for determination of vanillylmandelic acid in human urine. HPLC-ED was performed at a glassy carbon electrode in a “wall-jet” arrangement in acetate-phosphate buffer at pH = 2.5 and gradient elution (increasing content of\nacetonitrile from 5 to 25% in 10 minutes) was used. Optimized parameters were following: flow rate of mobile phase 1 mL min−1, detection potential +1.1 V, detection wavelength 279 nm, injected volume 20 μL. Dependence of the peak current on the analyte concentration was linear in the concentration range from 10 to 150 μmol L−1, with obtained limits of detection 2.6 μmol L−1 (calculated from peak height) and 1.9 μmol L−1 (calculated from peak area) for HPLC-ED, and 11.0 μmol L−1 (calculated from peak height) and 9.8 μmol L−1 (calculated from peak area) for HPLC-UV.
|
|
|
HPLC-ED/UV with Solid Phase Extraction for the Determination of 5-Hydroxyindole-3-acetic Acid
Němečková-Makrlíková, Anna ; Dejmková, H. ; Navrátil, Tomáš ; Barek, J. ; Vyskočil, V.
Determination of 5-HIAA in human urine was successfully performed using HPLC-ED/UV with SPE. HPLC-ED is a very sensitive technique, presented method does not need any sample pre-treatment apart from SPE procedure, which replaced filtration of samples of human urine to avoid problems with clogging a HPLC column. The found native\nconcentrations of 5-HIAA in human urine using HPLC-ED with SPE fully corresponds with published normal concentrations in urine (17.8 - 58.3 micromol l-1). The found native concentrations of 5-HIAA were 18.4 micromol L-1 (calculated from peak height). The presented method is fast and could be used for simple\nscreening of human urine, because HPLC-ED/UV allows simultaneous determination of 5-HIAA, HVA, and VMA as important tumour biomarkers.
|
host ::
RSS.