|
|
Studium interakcí proteinkinasy CaMKK2 s kalmodulinem pomoci fluorescenční spektroskopie.
Mikulů, Martina ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Ca2+ /kalmodulin-dependentní proteinkinasy jsou členy významné CaMK rodiny, která se účastní CaMK kaskády. Jedním z nich je Ca2+ /kalmodulin-dependentní proteinkina- sakinasa 2 (CaMKK2), která je aktivována vazbou komplexu Ca2+ /CaM. CaMKK2 se od většiny ostatních proteinkinas liší zejména strukturou v blízkosti αE-helixu a auto- inhibiční domény. Protože se autoinhibiční doména překrývá s Ca2+ /CaM-vazebnou doménou, lze před- pokládat, že vazba kalmodulinu způsobuje strukturní změny v oblastech interagujících s autoinhibiční doménou a ovlivňuje přístupnost těchto oblastí pro jiné molekuly. Pro ověření tohoto předpokladu byl exprimován a vypurifikován mutant CaMKK2 W445F, v jehož sekvenci se nachází pouze jeden tryptofanový zbytek na pozici 374, který se nachází v blízkosti sledované oblasti helixu αE. Strukturní změny v této oblasti byly pozorovány prostřednictvím zhášení intenzity fluorescence tryptofanového zbytku Trp374 prostřednictvím akrylamidu.Tato měření mohou poskytnout informaci o přístupnosti sle- dované oblasti. Porovnání zhášení fluorescence v přítomnosti a nepřítomnosti kalmodu- linu naznačilo, že při interakci CaMKK2 s kalmodulinem dochází ve sledované oblasti v blízkosti Trp374 ke...
|
|
|
Studium struktury komplexů proteinu 14-3-3 s CaMKK1 a CaMKK1:Ca2+/CaM
Mikulů, Martina ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Ca2+ -signální dráha je jedním z nejvýznamnějších mechanismů přenosu informace v buňce. Rodina Ca2+ /kalmodulin-dependentních proteinkinas (CaMKs) je skupina se- rin/threonin kinas, jejichž aktivita je regulována intracelulární koncentrací iontů Ca2+ a vazbou receptorového proteinu iontů Ca2+ kalmodulinu (CaM). Součástí této pro- teinové rodiny je tzv. Ca2+ /CaM-dependentní kaskáda, jejímž členem je Ca2+ /CaM- dependentní proteinkinasa kinasa (CaMKK), která se u savců nachází ve dvou iso- formách, CaMKK1 a CaMKK2. Aktivita CaMKK1 je regulována nejen vazbou kalmodulinu, ale i fosforylací cAMP- dependentní proteinkinasou A, která zároveň ve struktuře CaMKK1 vytváří vazebné motivy rozpoznávané regulačními proteiny 14-3-3. Dřívější studie interakce CaMKK1 s proteiny 14-3-3 naznačily, že tato interakce nejen udržuje neaktivní CaMKK1 v inhi- bovaném stavu, ale také znepřístupňuje její aktivní místo a přímo inhibuje aktivitu CaMKK1. Struktura proteinového komplexu, který vzniká mezi CaMKK1 a 14-3-3 proteinem je však stále neznámá. Hlavním cílem této práce bylo charakterizovat proteinové komplexy vznikající in- terakcemi mezi CaMKK1, kalmodulinem a proteinem 14-3-3γ, a to pomocí metod ana- lytické ultracentrifugace,...
|
|
|
Studium struktury komplexů proteinu 14-3-3 s CaMKK1 a CaMKK1:Ca2+/CaM
Mikulů, Martina ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Ca2+ -signální dráha je jedním z nejvýznamnějších mechanismů přenosu informace v buňce. Rodina Ca2+ /kalmodulin-dependentních proteinkinas (CaMKs) je skupina se- rin/threonin kinas, jejichž aktivita je regulována intracelulární koncentrací iontů Ca2+ a vazbou receptorového proteinu iontů Ca2+ kalmodulinu (CaM). Součástí této pro- teinové rodiny je tzv. Ca2+ /CaM-dependentní kaskáda, jejímž členem je Ca2+ /CaM- dependentní proteinkinasa kinasa (CaMKK), která se u savců nachází ve dvou iso- formách, CaMKK1 a CaMKK2. Aktivita CaMKK1 je regulována nejen vazbou kalmodulinu, ale i fosforylací cAMP- dependentní proteinkinasou A, která zároveň ve struktuře CaMKK1 vytváří vazebné motivy rozpoznávané regulačními proteiny 14-3-3. Dřívější studie interakce CaMKK1 s proteiny 14-3-3 naznačily, že tato interakce nejen udržuje neaktivní CaMKK1 v inhi- bovaném stavu, ale také znepřístupňuje její aktivní místo a přímo inhibuje aktivitu CaMKK1. Struktura proteinového komplexu, který vzniká mezi CaMKK1 a 14-3-3 proteinem je však stále neznámá. Hlavním cílem této práce bylo charakterizovat proteinové komplexy vznikající in- terakcemi mezi CaMKK1, kalmodulinem a proteinem 14-3-3γ, a to pomocí metod ana- lytické ultracentrifugace,...
|
|
|
Studium interakcí proteinkinasy CaMKK2 s kalmodulinem pomoci fluorescenční spektroskopie.
Mikulů, Martina ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Ca2+ /kalmodulin-dependentní proteinkinasy jsou členy významné CaMK rodiny, která se účastní CaMK kaskády. Jedním z nich je Ca2+ /kalmodulin-dependentní proteinkina- sakinasa 2 (CaMKK2), která je aktivována vazbou komplexu Ca2+ /CaM. CaMKK2 se od většiny ostatních proteinkinas liší zejména strukturou v blízkosti αE-helixu a auto- inhibiční domény. Protože se autoinhibiční doména překrývá s Ca2+ /CaM-vazebnou doménou, lze před- pokládat, že vazba kalmodulinu způsobuje strukturní změny v oblastech interagujících s autoinhibiční doménou a ovlivňuje přístupnost těchto oblastí pro jiné molekuly. Pro ověření tohoto předpokladu byl exprimován a vypurifikován mutant CaMKK2 W445F, v jehož sekvenci se nachází pouze jeden tryptofanový zbytek na pozici 374, který se nachází v blízkosti sledované oblasti helixu αE. Strukturní změny v této oblasti byly pozorovány prostřednictvím zhášení intenzity fluorescence tryptofanového zbytku Trp374 prostřednictvím akrylamidu.Tato měření mohou poskytnout informaci o přístupnosti sle- dované oblasti. Porovnání zhášení fluorescence v přítomnosti a nepřítomnosti kalmodu- linu naznačilo, že při interakci CaMKK2 s kalmodulinem dochází ve sledované oblasti v blízkosti Trp374 ke...
|
host ::
RSS.